王磊黎
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 供职机构：三峡大学医学院分子生物学研究所更多>>
- 发文基金：三峡大学天然产物研究与利用湖北省重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HIV-1 Tat蛋白结合Tar的抗艾滋病药物筛选模型的建立研究
- 2007年
- 目的：建立HIV-1 Tat蛋白结合Tar的细胞模型用于抗艾滋病药物体外筛选。方法：构建表达HIV-1 Tat蛋白的真核表达质粒（pCDNA3．1（＋）-Tat）和HIV-1 LTR-luc荧光素酶报告基因，采用脂质体转染法共转染HeLa细胞，荧光仪检测Tat蛋白结合HIV-1LTR促进荧光素酶在HeLa细胞内的表达情况。结果：成功构建pCDNA3．1（＋）-Tat和HIV-1 LTR-luc质粒，将质粒共转染HeLa细胞，荧光仪检测到荧光素酶的活性，建立了HIV-1 Tat蛋白结合Tar的细胞模型。以DRB（5，6-二氯-1-β呋核亚硝脲-苯并咪唑）为阳性对照，进行模型的条件优化。通过反复试验表明：目的基因和报告基因的比例、细胞浓度以及药物作用时间等对模型的稳定性和敏感性有影响。应用优化的细胞模型对文冠果、紫苏等天然产物浸提物进行筛选及结果的分析。结论：建立的HIV-1Tat蛋白结合Tar的细胞模型可用于抗HIV-1的药物筛选。
- 李在留刘朝奇邹坤李凤兰韩钰杨凡王磊黎
- 关键词：药物筛选
- HIV-1病毒Nef基因克隆、表达、纯化及其抗体的制备被引量：5
- 2008年
- 目的:运用基因工程方法制备HIV-1 Nef重组蛋白及其抗体。方法:用PCR技术从HIV-1H×B2质粒中扩增HIV-1 Nef基因,将测序鉴定过的HIV-1 Nef基因克隆到原核表达载体pET28a(+)上,应用酶切鉴定、测序、SDS-PAGE及Western blot等方法鉴定基因片段的正确性及表达蛋白的特异性。纯化的重组蛋白免疫兔3次后,ELISA法测定兔多克隆抗体滴度。用其制备的多克隆抗体通过免疫组织化学方法测定表达Nef基因的内皮细胞。结果:成功地构建了Nef基因的原核表达质粒,测序证明HIV-1Nef基因全长为621bp,编码206个氨基酸。在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达的重组蛋白为包涵体的形式。HIV-1 Nef蛋白N端融合6×His标签便于纯化及鉴定。获得的高纯度HIV-1 Nef融合蛋白,免疫动物后,可产生特异的高滴度抗体(ELISA滴度达1∶10000)。将转染Nef基因的内皮细胞,应用免疫组化的方法证明其抗体有高度的特异性。结论:构建了高表达HIV-1 Nef蛋白的原核表达系统,制备的Nef重组蛋白免疫动物,获得了特异、高效价的抗体,为研究Nef基因的生物学活性提供了实验材料和依据。
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- 关键词：HIV-1NEF抗体病毒
- HIV-1 Tat蛋白结合Tar的抗艾滋病药物筛选模型的建立研究被引量：2
- 2008年
- 目的建立H IV-1 Tat蛋白结合Tar的抗H IV-1药物筛选模型用于抗H IV药物筛选。方法构建表达H IV-1Tat蛋白的真核表达质粒(pCDNA3.1(+)-Tat)和H IV-1 LTR-luc荧光素酶报告基因,采用脂质体转染法共转染HeLa细胞,荧光仪检测Tat蛋白促进荧光素酶在HeLa细胞内的表达情况,建立H IV-1Tat蛋白结合Tar的细胞模型,用于抗H IV-1的药物筛选。以DRB(5,6-二氯-1-β-呋核亚硝脲-苯并咪唑)为阳性对照,进行模型的建立及条件的优化。结果通过反复试验表明,目的基因和报告基因的配比、转染时培养液中小牛血清的含量、细胞浓度、转染前细胞状态以及药物作用时间的长短等对模型的稳定性和敏感性有影响。结论应用优化的细胞模型对文冠果、紫苏等浸提物进行筛选及结果的分析。
- 李在留刘朝奇邹坤李凤兰韩钰杨凡王磊黎
- 关键词：HIV-1TAT
