王胤
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 荷瘤小鼠脾脏髓源抑制细胞的分选及鉴定
- 2014年
- 目的研究荷瘤小鼠脾脏中髓源抑制细胞(myeloid derived suppresser-cell,MDSCs)的分选与鉴定方法。方法常规培养小鼠肾癌细胞(Renca细胞),于Balb/c小鼠皮下建立小鼠肾癌模型;分离小鼠脾脏制成单细胞悬液,磁珠分选Gr-1+CD11b+双阳性的MDSCs;台酚蓝染色检测细胞存活率;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)测其细胞纯度;显微镜下观察细胞形态;免疫荧光测其表面Gr-1、CD11b荧光表达情况;RT-PCR检测Cox2和Arg-1的m RNA的表达情况;小鼠皮下成瘤实验观察MDSCs促肿瘤生长。结果成功建立小鼠肾癌模型,磁珠分选后经FCM检测Gr-1+CD11b+双阳性的MDSCs细胞可达92.3%,显著高于分选前(P<0.01);免疫荧光鉴定结果显示:分选后的细胞形态完整,Gr-1和CD11b的荧光表达于细胞膜且2种荧光可以融合;RT-PCR检测分选后的MDSCs细胞群的Cox2和Arg-1的m RNA相对表达量显著高于分选前(P<0.05);小鼠皮下成瘤观察到MDSCs组与实验对照组有显著差异(P<0.05)。结论用免疫磁珠从荷瘤小鼠脾脏中成功分选得到MDSCs,具有较高纯度和良好的生物活性,为后续实验提供了理想的细胞来源。
- 刁建军杨雪宋学东陈仕友王胤王晓蓉罗春丽张尧吴小候
- 关键词：MDSCS脾脏磁珠分选
- 氨基端PLCε基因的克隆、原核表达及抗血清的制备
- 2014年
- 目的通过在原核系统中表达人磷脂酶Cε(phospholipase Cε,PLCε)基因,制备兔抗PLCε的抗血清,并验证其特异性。方法应用RT-PCR从人膀胱癌细胞的cDNA中克隆出部分PLCε基因,构建重组表达载体PGEX-6P-1/PLCε,并转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导表达GST-PLCε融合蛋白,通过GST亲和层析系统纯化重组蛋白,超滤后免疫家兔,获得家兔抗PLCε的抗血清。采用ELISA检测抗血清效价,Western blot测定其特异性。结果 RT-PCR扩增出336 bp的PLCε基因,并成功构建重组质粒PGEX-6P-1/PLCε,质粒测序结果显示,目的基因序列与GenBank中PLCε基因序列完全一致。将纯化后的GST-PLCε蛋白免疫家兔,获得抗血清;ELISA效价1∶16 000以上;Western blot结果显示,该抗血清与原核表达的GST-PLCε融合蛋白和人膀胱癌T24细胞株表达的PLCε蛋白特异性结合。结论在原核细胞中表达了PLCε蛋白,制备了家兔抗人PLCε的抗血清,可用于相关肿瘤检测,为进一步研究PLCε蛋白功能和作用机制奠定了基础。
- 宋学东王胤杜红飞范砚茹梁勤东吴小侯罗春丽
- 关键词：原核表达抗血清制备
- hepaCAM与藏花素联合应用对前列腺癌细胞增殖的影响
- 2014年
- 目的:研究肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)与藏花素联用对前列腺癌(prostate cancer,PCa)细胞DU145增殖的影响。方法:四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法检测细胞增殖效应;克隆形成实验检测细胞克隆形成率;实时荧光定量PCR、Western blot法检测细胞周期调节因子cyclinD1及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达变化。结果:hepaCAM过表达腺病毒与藏花素单独使用均能抑制PCa细胞DU145的增殖[48 h抑制率分别为(12.0±2.0)%,(22.0±1.0)%],但两者联用比单独应用效果更加明显[48 h抑制率为(54.0±1.0)%,P=0.000]。Real-time PCR结果显示,hepaCAM过表达腺病毒及藏花素联合作用与藏花素单独使用相比,cyclinD1 mRNA表达下调(P=0.048);两者联合应用与hepaCAM过表达腺病毒或藏花素单独使用相比,PCNA mRNA水平下调(P=0.047,P=0.006)。Western blot结果显示,与单独使用hepaCAM过表达腺病毒或藏花素相比,两者联用组cyclinD1蛋白表达明显降低(P=0.002,P=0.002),同时PCNA蛋白表达也降低(P=0.000,P=0.003)。结论:hepaCAM基因过表达腺病毒与藏花素联用对PCa DU145细胞增殖的抑制有明显的协同作用,作用机制与下调cyclinD1和PCNA的表达有关。
- 王胤杨雪王晓荣吴小候陈娥罗春丽
- 关键词：前列腺癌细胞增殖
- 5-氮杂胞嘧啶核苷联合hepaCAM腺病毒通过抑制p-AKT诱导膀胱癌细胞T24凋亡被引量：4
- 2014年
- 目的:研究5-氮杂胞嘧啶核苷(5-azacytidine,azac)联合肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)腺病毒对膀胱癌细胞T24凋亡的影响及可能机制的探讨。方法:7种不同因素分别处理培养的膀胱癌细胞T24,hoechst 33258染色检测各处理组细胞凋亡率,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测细胞早期凋亡率,RT-PCR检测hepaCAM及B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,bcl-2)mRNA的表达,Western blot检测hepaCAM、p-AKT、total-AKT、bcl-2蛋白的表达。结果:hoechst 33258显示,azac联合hepaCAM腺病毒组细胞凋亡率为(45.21±0.06)%,明显高于hepaCAM腺病毒组(15.60±0.02)%和azac组(26.30±0.02)%,差异有统计学意义(P=0.003,P=0.008);FCM显示,azac联合hepaCAM腺病毒组细胞早期凋亡率为(16.05±0.06)%,明显高于hepaCAM腺病毒组(3.90±0.02)%和azac组(9.67±0.02)%,差异有统计学意义(P=0.002,P=0.043);RT-PCR显示,与单独hepaCAM腺病毒组和azac组相比,azac与hepaCAM腺病毒联用可以上调hepaCAM mRNA的表达(P=0.004,P=0.000),下调bcl-2 mRNA的表达,差异有统计学意义(P=0.026,P=0.030);Western blot显示,与单独hepaCAM腺病毒组和azac组相比,azac联合hepaCAM腺病毒组可上调hepaCAM蛋白的表达(P=0.003,P=0.003),同时下调p-AKT(P=0.001,P=0.005)和bcl-2(P=0.000,P=0.002)蛋白的表达,差异有统计学意义。结论:azac联合hepaCAM腺病毒可能通过抑制p-AKT的磷酸化水平加速诱导T24细胞凋亡,可为膀胱癌的治疗提供新的思路。
- 王晓荣杨雪王胤吴小候唐敏罗春丽
- 关键词：膀胱癌细胞T24P-AKT细胞凋亡
- PLCε基因通过NF-κB/p65途径抑制肾癌786-0细胞的增殖被引量：2
- 2014年
- 目的探讨RNA干扰技术沉默人源磷脂酶Cε(PLCε)基因对肾癌786-0细胞p65核转位的调控,对786-0细胞增殖的影响及其机制。方法用携带PLCεshRNA基因的真核表达质粒pGenesil-PLCε转染786-0细胞,克隆形成实验检测786-0细胞的增殖,RT-PCR检测PLCε、c-Myc和COX-2 mRNA的表达,Western blot检测PLCε、c-Myc、COX-2和p65总蛋白及p65在细胞核的表达,细胞免疫荧光检测p65在细胞核与细胞质的定位。同时应用p65特异的抑制剂BAY11-7082处理786-0细胞,Western blot检测c-Myc和COX-2蛋白的表达。结果转染pGenesil-PLCε质粒的786-0细胞生长明显受抑制;转染pGenesil-PLCε质粒细胞中PLCε、c-Myc和COX-2 mRNA和蛋白表达水平均较对照组pGenesil-NP明显下调(P<0.01),且抑制核中p65蛋白的表达(P<0.01),细胞免疫荧光结果显示转染pGenesil-PLCε质粒组p65在细胞核中的表达较对照组pGenesil-NP明显下降;BAY11-7082抑制c-Myc和COX-2蛋白的表达(P<0.01),且呈时间浓度依赖性。结论沉默PLCε基因后可能是通过抑制p65的核转位及c-Myc、COX-2的表达抑制786-0细胞的增殖。
- 杨雪欧俐苹王晓荣王胤吴小候罗春丽
- 关键词：786-0细胞增殖
