申晓冬
- 作品数：34 被引量：116H指数：6
- 供职机构：生物化学与分子生物学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学理学更多>>
- 噬菌体PaP3推定基因tls核酸内切酶活性的初步验证被引量：2
- 2006年
- 目的对BLAST推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的tls基因功能进行实验验证。方法采用PCR方法从噬菌体PaP3基因组扩增出tls基因,克隆至pMD18-T载体中,再经酶切纯化后将目的基因插入表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达目的蛋白,超声裂菌后收集包涵体,并用裂解缓冲液溶解包涵体蛋白。然后利用Ni-NTA亲合层析纯化蛋白,通过透析使H6-TLS复性。最后构建含有末端酶大亚基酶切位点的底物质粒pMD-cos,检测复性蛋白活性。结果通过上述方法,成功构建了pQE-tls表达载体,融合蛋白H6-TLS表达量占菌体总量的30%。同时成功构建了目的蛋白的底物质粒pMD-cos。经由亲和层析初步纯化及透析复性后,H6-TLS可检测出核酸内切酶的活性,能将底物质粒部分线性化。结论成功地获得了具有内切酶活性的H6-TLS融合蛋白,为tls基因的认证提供了实验证据,为进一步鉴定和利用该基因奠定了基础。
- 申晓冬胡福泉李明胡晓梅周莹冰张克斌
- 关键词：基因表达
- TO901317抑制叉头盒蛋白M1表达并影响HepG2细胞增殖被引量：1
- 2011年
- 目的探讨肝X受体(liver X receptors,LXR)特异性激动剂TO901317对HepG2细胞中叉头盒蛋白M1(forkhead box protein M1,FOXM1)的表达及对HepG2细胞的增殖及细胞周期的影响。方法 TO901317(终浓度分别为0.5、5μmol/L)处理HepG2细胞24 h后,采用RT-PCR和Western blot检测FOXM1 mRNA和蛋白表达情况;采用流式细胞术检测细胞周期的变化,并用CCK-8检测HepG2细胞增殖情况。结果经不同浓度的TO901317(终浓度0.5、5μmol/L)处理HepG2细胞24 h后,FOXM1 mRNA和蛋白表达呈剂量依赖性下调(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,对照组G1期细胞数占间期所有细胞数的百分比为(52.98±2.53)%、0.5μmol/L TO901317处理组为(61.32±2.36)%、5μmol/LTO901317处理组为(70.40±4.65)%,表明TO901317能够剂量依赖性诱导HepG2细胞G1期阻滞(P<0.05);CCK-8检测结果显示,对照组D(450)为(1.53±0.07)、0.5μmol/L TO901317处理组为(1.25±0.09)、5μmol/L TO901317处理组为(1.06±0.06),表明TO901317能够剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖(P<0.05)。结论肝X受体诱导HepG2细胞的G1期阻滞,并且抑制该细胞的增殖,其原因之一可能由于抑制了细胞周期蛋白关键调节因子FOXM1的表达。
- 胡长江张艳黄刚张立申晓冬高敏何谐曾益军何凤田
- 关键词：HEPG2细胞
- 铜绿假单胞菌噬菌体PaP2的结构蛋白及其编码基因的研究被引量：3
- 2004年
- 目的 :确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP2结构蛋白的构成及其编码基因。 方法 :CsCl梯度离心纯化噬菌体PaP2颗粒 ,SDS PAGE电泳 ,确定结构蛋白条带及其相对分子质量 ;然后电转印于PVDF膜上 ,用Edman降解法进行N端测序。根据所测的N端氨基酸残基序列在PaP2预测基因编码的蛋白质中检索 ,从而逆推其编码基因。 结果 :SDS PAGE显示PaP2含有 10条带 ,其中 1、3、4、5、8、9等 6条带的含量足以回收进行N端测序 ,测得N端氨基酸残基分别依次为 :Met Ile Glu Leu Gly、Ala Ile Ser Pro、Ala Arg Phe Ile Asp、Ser Val Tyr Ala Gly、Ala Ile Ser Arg Asn 和Ser Phe Ser Leu Gly。据此推论出它们的编码基因分别是ORF18340 2 3889、ORF4 4 19 6 4 19、ORF16 5 89 1832 2、ORF82 74 95 30、OrF15 70 8 16 6 2 5、ORF75 6 3 830 9。 结论 :噬菌体PaP2含有 10个结构蛋白 ,其中 6个主要结构蛋白的编码基因分别是orf 2 4、orf 8、orf 2 3、orf 12、orf 2 2、orf 11。
- 黄建军胡晓梅朱军民申晓冬李明饶贤才胡福泉
- 关键词：铜绿假单胞菌噬菌体编码基因
- 云班课在生物化学与分子生物学实验教学改革中的应用探索被引量：5
- 2021年
- 生物化学与分子生物学实验技术是生命科学的重要研究手段,也是临床诊断技术的重要支撑。它是医学院校各专业学生的一门重要必修实验课程,也是医学教学改革的前沿阵地。近年来,随着互联网、大数据、人工智能等在教育领域的不断深入和融合,信息化教学正助推教学改革,迸发出新活力。本文探索了以"云班课"App为例的信息化教学工具在生化实验课中的应用方法,并小结了教学效果,为有效提高教学质量、进一步深化生物化学实验教学改革奠定了基础。
- 钟丹申晓冬高敏贺文辉何凤田陈姗戴双双黄刚
- 关键词：生物化学与分子生物学实验教学
- 铜绿假单胞茵噬菌体PaP3生物学特性的研究
- 噬菌体是在细菌体内营高度寄生的非细胞型生命现象。临床分离的细菌几乎均带有噬菌体,具有极大的多样性。因此,分离鉴定新的噬菌体并认识其基本生物学特性是生命科学的一个热点领域。噬菌体PaP3(Pseudomonas aerug...
- 周莹冰申晓冬李明黄建军胡晓梅饶贤才胡福泉
- 文献传递
- 铜绿假单胞菌噬菌体PaP1主要结构蛋白编码基因的确定
- 2006年
- 目的:确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP1主要结构蛋白的编码基因。方法:CsCl梯度离心纯化噬菌体PaP1 颗粒,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离该噬菌体的结构蛋白,转印PVDF膜后,对主要结构蛋白进行N-端测序,根据测序结果和实测分子量,在PaP1基因组序列中检索推定基因表达产物分子量相近、 N-端氨基酸残基序列相同的蛋白质所对应的编码基因。结果:SDS-PAGE显示PaP1至少含有7种结构蛋白,其中相对分子质量为38400的蛋白是主要的结构蛋白,其N-端5个氨基酸残基顺序为:Ala-Asn-Thr-Arg-Ser。结论:噬菌体PaP1至少含有7个结构蛋白,其中相对分子质量为38 400的蛋白系主要结构蛋白,其编码基因为 ORF6841-7875。
- 李明黄建军申晓冬胡晓梅饶贤才胡福泉
- 关键词：铜绿假单胞菌噬菌体结构蛋白编码基因
- 医学生物技术专业基因工程教学的体会被引量：4
- 2009年
- 为了讲好医学生物技术专业学生的基因工程课程，依据教学经验，从教学内容、教学方法以及课外教学等方面提出了一些教学体会和思考，通过改革教学内容，加强绪论的讲解，采用案例教学和读书报告等方法，并增加课外实践和见习等方式，可激发学生学习兴趣，提高教学效果。
- 申晓冬连继勤娄桂予高敏何凤田
- 关键词：基因工程教学方法教学内容案例教学
- 末端酶介导的双链DNA病毒核酸组装
- 2006年
- 病毒是一类非细胞结构的微生物,专性宿主细胞内寄生,以复制方式进行增殖。在病毒复制的过程中,组装是其特有的过程。不同类型病毒之组装的机制有很大差异,目前对双链DNA(dsDNA)病毒的组装机制研究较多,包括位点特异性组装和满头组装两种方式,采用何种方式进行组装与其基因组编码的末端酶有关。该文介绍末端酶介导的dsDNA病毒组装的有关进展。
- 陈志瑾申晓冬张克斌饶贤才
- 关键词：双链DNA病毒
- 噬菌体DNA的衣壳化及注入宿主细胞的机制被引量：3
- 2006年
- 噬菌体能够对复制产生的DNA进行精确包装,并使基因组DNA在蛋白质衣壳内以非常稳定的形式存在。同时,噬菌体还能高效释放基因组核酸并将其注入宿主菌体内。这种奇特的生物学现象及其内在机制在各种生物物理技术的帮助下,被人类逐渐认识。冷冻电子显微镜和荧光显微镜的出现,使得从单个噬菌体颗粒水平来了解基因组DNA的释放和穿入过程成为可能。
- 申晓冬胡福泉
- 铜绿假单胞菌噬菌体PaP3生物学特性的研究被引量：8
- 2006年
- 目的测定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的最佳感染复数、一步生长曲线和吸附K值及交叉吸附K值等基本生物学特性。方法按照感染复数(MOI)分别为0·0001、0·001、0·01、0·1、1和10加入噬菌体纯培养液和宿主菌,充分裂解细菌后,测定噬菌体滴度;以MOI=10的比例加入噬菌体及宿主菌,进行一步生长实验;纯化PaP3颗粒,免疫家兔,获得抗血清,通过中和反应实验测定PaP3和其抗血清之间的吸附反应常数K值。同时,利用抗血清交叉中和试验确定本室分离的三株噬菌体之间的血清学关系。结果当MOI=0·001时PaP3感染其宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高;根据一步生长实验结果绘制一步生长曲线;通过血清交叉中和反应得出不同的吸附常数。结论PaP3最佳感染复数为0·001,感染宿主菌的潜伏期是20min,爆发期是60min,平均爆发量约为31,其抗血清反应的吸附常数K值为262。
- 周莹冰申晓冬李明黄建军胡晓梅饶贤才胡福泉
- 关键词：细菌噬菌体
