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密码子优化型鸭甲肝病毒VP1基因在昆虫细胞中的表达被引量：2: 2014年; 为了提高基因A型鸭甲肝病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)VP1基因在昆虫细胞中的表达水平,本研究根据昆虫细胞密码子偏爱性对野生型DHAV VP1(wtVP1)基因进行改造,合成了optiVP1基因,并利用Bac-to-Bac表达系统构建了重组杆状病毒rBacmid-wtVP1和rBacmid-optiVP1,分别转染对数生长期的sf9昆虫细胞表达VP1蛋白。转染72 h后,sf9细胞出现典型的细胞病变(cytopathic effect,CPE),Western-blot和间接免疫荧光法(indirect immunofl uorescence assay,IFA)检测结果表明VP1蛋白在重组杆状病毒感染的sf9昆虫细胞中获得了良好表达。用Image J软件对Western-blot扫描的图片进行灰度分析发现,optiVP1基因在昆虫细胞中的表达水平明显高于wtVP1。本研究为进一步研制诊断抗原和新型基因工程疫苗的开发奠定了基础。; 李传峰陈宗艳孟春春梁瑞英胡文刘光清; 关键词：VP1 重组杆状病毒密码子优化

甲型鸭肝炎病毒2A蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：1: 2014年; 采用RT-PCR方法从甲型鸭肝炎病毒ZJ-V株的RNA模板中扩增出2A基因,将其克隆到表达载体pET-30(+)中,经酶切和测序鉴定后转化表达宿主菌BL21(DE3)细胞中,以IPTG诱导表达His-DHAV-2A融合蛋白.结果表明:目的蛋白在1mmol/L IPTG诱导4h的情况下以可溶性形式表达.表达产物经Ni柱纯化后获得了高纯度的融合蛋白.以纯化后的His-DHAV-2A融合蛋白为抗原免疫白兔制备多抗,Western-blot试验表明制备的多抗可与目的蛋白发生特异性反应.以上结果说明,DHAV的2A蛋白在大肠杆菌中成功表达,且制备的多抗血清可用于2A蛋白的表达检测.; 胡文孟春春李传峰陈宗艳梁瑞英李宁黄云秀吴润刘光清; 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体

鸭甲型肝炎病毒2A蛋白的生物学功能的初步研究: 【目的】分别扩增鸭甲型肝炎病毒(DHAV)非结构蛋白2A、2A2、2A3的编码基因,利用原核表达载体p ET30a(+)进行表达,以纯化后的蛋白为抗原,免疫新西兰白兔制备抗2A、2A2和2A3的多克隆抗体。采用双荧光报告...; 胡文; 关键词：原核表达亚细胞定位; 文献传递

A型鸭肝炎病毒微基因组的构建被引量：1: 2014年; 为研究A型鸭肝炎病毒(DHAV)非编码区的结构和功能,笔者拟构建该病毒的微基因组并对其进行初步鉴定。采用酶切的方法将萤火虫荧光素酶报告基因(fLuc)与A型鸭肝炎病毒的ORF进行替换;并在5′UTR上游插入海肾荧光素酶报告基因Rluc作为内参基因;同时还在Rluc上游引入锤头状核酶,3′UTR下游引入丁型肝炎核酶,至此得到了含有双报告基因的A型鸭肝炎病毒微基因组(pRluc-fLuc)。将pRluc-fLuc转染DF-1细胞,8h便可以检测到报告基因的表达,24h表达量达到峰值。上述结果表明,已经成功构建了A型鸭肝炎病毒微基因组,这为进一步研究病毒非编码区的结构和功能以及病毒的翻译或复制的调控机理提供了良好的技术平台。; 梁瑞英胡文李宁缪秋红毕庄莉孟春春李传峰陈宗艳刘光清; 关键词：非编码区

鸭肝炎病毒复制子的构建及其应用研究: 为了研究A型鸭肝炎病毒(DHV-A)的复制机制,病毒与宿主之间的相互作用以及致病机制等,创建一个安全,有效的技术平台,将病毒的衣壳蛋白编码区删除,代之以报告基因(FLUC)。同时,保留了DHV-A复制必需的所有蛋白酶基因...; 梁瑞英李传峰陈宗艳孟春春胡文刘光清; 关键词：鸭肝炎病毒复制子报告基因非编码区

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胡文