苏静芬
- 作品数：7 被引量：15H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 恒河猴P21基因在COS-7细胞中沉默位点的验证
- 2015年
- 目的在细胞水平筛选恒河猴P21基因的有效沉默靶点。方法检测COS-7中P21基因的表达水平;设计shRNA并构建P21-RNA干扰慢病毒载体FUGW-TDT-P21shRNA转染COS-7细胞,通过real-time PCR检测沉默效率,并以Western blot在蛋白水平进行验证。结果筛选到四个有效的靶位,分别位于P21 mRNA的541-561、542-562、215-239、624-648 bp。四个靶位点在mRNA水平的沉默效率分别为(91.82±3.21)%、(82.47±2.48)%、(81.31±2.69)%和(87.35±4.59)%。相应的蛋白表达量为(11.97±0.70)%、(20.22±0.65)%、(23.21±0.63)%和(14.42±0.86)%。结论在细胞水平筛选得到四个有效的P21基因沉默靶点,可用于恒河猴基因沉默研究。
- 李雨函苏静芬张晨石亮刘云波
- 关键词：基因沉默P21基因恒河猴
- 两种核酸提取方法对小鼠诺如病毒RNA提取效能的比较被引量：7
- 2013年
- 目的比较两种核酸提取方法对小鼠诺如病毒RNA的提取效能。方法用Trizol提取法和QIAamp Viral RNA Mini Kit提取法分别提取感染小鼠诺如病毒(Murine Norovirus,MNV)的小鼠小肠组织样品RNA和细胞培养物RNA,测定RNA浓度;用MNV特异的引物对分离的核酸样品进行一步法RT-PCR扩增。结果Trizol提取法提取小肠组织的RNA浓度高于QIAamp Viral RNA Mini Kit提取法;QIAamp Viral RNA Mini Kit提取得到的细胞培养物RNA浓度高于Trizol提取法。经QIAamp Viral RNA Mini Kit提取的两种核酸样品均能扩增出特异条带,而Trizol提取的核酸样品未见特异条带。结论在MNV的检测中,QIAamp Viral RNA Kit更适合组织样品中MNV病毒核酸的提取。
- 田胜男苏静芬向志光刘云波
- 关键词：TRIZOLVIRALRNAMINIKIT
- 小鼠诺如病毒间接免疫荧光检测方法的建立
- 目的:建立小鼠诺如病毒(MNV)的间接免疫荧光试验(IFA)的检测方法.
方法:将MNV-1接种RAW264.7细胞,培养36小时收集病毒培养物及未感染细胞培养物,点制抗原玻片;以107TCID50的MNV-1...
- 田胜男佟巍张丽芳常慧李雨函苏静芬刘先菊向志光刘云波
- 关键词：诺如病毒间接免疫荧光法酶联免疫吸附测定
- 文献传递
- 恒河猴 p53基因沉默靶点在细胞水平的验证被引量：3
- 2014年
- 目的：为建立恒河猴 p53基因沉默模型，首先在细胞水平筛选和测定恒河猴 p53基因有效沉默靶点。方法测定非洲绿猴肾来源成纤维细胞 COS-7中 p53基因的表达水平；对恒河猴 p53基因做生物信息学分析，优选靶序列设计 shRNA，克隆入慢病毒载体 FUGW-TDT，转染 COS-7细胞，以 real-time PCR 检测 p53 mRNA 抑制水平，以 Western blot 检测 p53蛋白水平表达变化。结果在 COS-7细胞检测到 p53基因的表达；生物信息学筛选到3个靶片段，分别位于 p53 mRNA 的238～258 bp，681～701 bp，169～189bp，均在开放阅读框内； p53三个靶位点的沉默效率在 mRNA 水平分别为（87.17±4.03）％，（72.62±14.11）％，（76.22±0.98）％；在蛋白水平的沉默效率分别为（84.44±2.18）％，（71.0±1.18）％，（74.17±0.95）％。结论在细胞水平筛选得到3个有效的 p53基因沉默靶点，可用于后续的恒河猴基因沉默研究。
- 苏静芬张晨李雨函刘先菊佟巍向志光石亮石桂英刘云波
- 关键词：基因沉默P53基因恒河猴
- 小鼠诺如病毒间接免疫荧光检测方法的建立被引量：4
- 2014年
- 目的建立小鼠诺如病毒（MNV）的间接免疫荧光试验（IFA）的检测方法。方法将MNV-1接种RAW264.7细胞,培养36 h收集病毒培养物及未感染细胞培养物,点制抗原玻片;以107TCID50的MNV-1灌胃接种BALB/c小鼠,收集感染血清做阳性对照血清。收集人工感染后不同时间点的血清样品,以1：10的稀释度使用IFA法测定感染血清MNV抗体滴度。选取80份送检小鼠血清样品,以IFA和ELISA方法测定,差异样品使用Western blot方法进行验证。结果 MNV-1感染RAW264.7细胞（36~48）h,细胞感染率为60%,以36 h感染细胞状态为佳;IFA法测定感染小鼠血清,小鼠感染1周后抗体水平逐渐提高,在4周时抗体滴度达到最高值,之后维持稳定,采集感染4周的动物血清做IFA方法的阳性质控品;80份血清中,IFA法测定阳性27份,阴性53份,ELISA法测定阳性32份,阴性48份;Western blot方法对差异样品验证,其中阳性3份,阴性2份,IFA法和ELISA法检测符合率分别为96.0%和97.5%。结论 IFA方法检测小鼠诺如病毒基本可以反应小鼠的感染情况,偶有假阴性的出现,可以选择IFA方法和ELISA方法作为初筛,差异样品用Western blot方法验证。
- 田胜男佟巍张丽芳常慧李雨函苏静芬刘先菊向志光刘云波
- 关键词：间接免疫荧光法
- 腺相关病毒介导的狨猴P53基因沉默被引量：1
- 2016年
- 目的在细胞和整体动物水平,利用RNA干扰技术下调绒猴p53基因表达。方法对狨猴p53基因做生物信息学分析,针对靶序列设计shRNA干扰序列,构建在腺相关病毒载体上,转染非洲绿猴肾细胞(cos-7),在细胞水平用荧光定量PCR检测p53mRNA抑制效果,以Western blot方法检测p53蛋白水平表达变化;优选shRNA干扰序列,包装含shRNA干扰序列的8型腺相关病毒,静脉注射感染狨猴;手术取少量肝脏组织,用Western blot和免疫组化方法检测p53蛋白水平的变化。结果细胞水平研究发现2个有效RNA干扰靶点,mRNA干扰效率分别为(82.7±8.1)%和(80.7±7.5)%(P<0.05);蛋白表达下调(77.3±11.5)%和(73.7±10.7)%(P<0.05);2只绒猴感染病毒后,经活体荧光成像分析可见病毒在肝脏、睾丸、颈部等位置分布,狨猴肝脏P53蛋白经Western blot、免疫组化分析未见明显变化。结论本研究在细胞水平实现绒猴P53基因表达下调,但整体动物水平狨猴肝脏P53蛋白表达未发现明显变化;今后需在感染方式等方面做进一步优化。
- 石亮张晨向志光邓仪晨苏静芬刘云波
- 关键词：P53RNA干扰狨猴
- 慢病毒介导恒河猴P53和P21基因沉默的初步研究
- 肿瘤是一种严重危害人类健康的疾病。作为动物模型，非人灵长类动物与人类的亲缘关系最近，在遗传学和生理学上与人类最相似。建立肿瘤的非人灵长类动物模型可以更利于肿瘤发病机理及治疗方案的研究。P53基因和P21基因是十分重要的抑...
- 苏静芬
- 关键词：恒河猴P21基因慢病毒基因沉默肿瘤模型
- 文献传递
