蒋红霞
- 作品数：129 被引量：474H指数：12
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 大肠杆菌外排泵系统基因表达及ELISA检测方法建立
- 2008年
- 【目的】对大肠杆菌AcrAB外排泵系统acrA、acrB基因进行原核表达,获得的表达产物AcrA、AcrB蛋白分别免疫兔,制备相应的抗体,建立大肠杆菌外排泵表达水平的ELISA检测方法。【方法】扩增AcrAB外排泵系统acrA、acrB基因片段,扩增片段分别与原核表达载体pET-41a(+)连接构建重组质粒,于BL21(DE3)中进行诱导表达。表达产物AcrA、AcrB纯化后分别免疫新西兰大白兔,获得抗AcrA、AcrB抗血清,并用Western blot方法对表达产物进行鉴定分析。纯化的AcrA、AcrB蛋白分别按不同的浓度包被酶标板,与不同稀释倍数的抗血清反应,通过ELISA检测确定最佳抗原包被浓度及抗体稀释度,初步建立大肠杆菌外排泵表达水平的ELISA检测方法。【结果】成功克隆和表达了acrA、acrB基因片段,经SDS-PAGE检测表明两种表达产物AcrA、AcrB均以可溶性蛋白形式存在。AcrA、AcrB抗原蛋白最佳包被浓度分别为1.0μg.ml-1和0.5μg.ml-1,抗AcrA、AcrB血清的最佳稀释度分别为1﹕800和1﹕400。用初步建立的ELISA方法检测8株大肠杆菌多重耐药菌株外排泵表达水平,结果表明分别用两种蛋白作包被抗体检测外排泵表达水平的结果一致。【结论】本研究通过原核表达的方法获得大肠杆菌AcrAB外排泵系统AcrA、AcrB蛋白并制备了相应的抗体,分别用两种抗体包被酶标板,并建立了大肠杆菌外排泵表达水平的ELISA检测方法,对8株多重耐药菌株的检测结果表明该方法可行、可靠。
- 吕殿红蒋红霞曾振灵陈杖榴
- 关键词：大肠杆菌外排泵原核表达ELISA方法
- 临床分离及药物压力下获得的鸡毒支原体耐氟喹诺酮类(FQs)gyrA基因突变特征
- 目的:对临床分离的及药物选择压力下筛选的鸡毒支原体耐药株进行gyrA基因片段的克隆和测序,利用分子生物学软件分析与耐药性有关的鸡毒支原体gyrA基因QRDR突变特征。方法:采用药物浓度递增的方法筛选一系列鸡毒支原体耐药株...
- 蒋红霞陈杖榴曾振灵邓旭明欧阳红生梁焕春阎继业
- 文献传递
- 氨基糖苷类抗生素耐药机制及耐药性检测芯片的研究
- 【目的】本研究拟调查氨基糖苷类抗生素钝化酶基因、16S rRNA甲基化酶基因及整合酶基因在广东省各地区兽医临床细菌中的流行情况,并尝试将生物传感器技术与传统基因芯片技术相结合构建生物传感器芯片对aac（3）-Ⅱc、aac...
- 向蓉蒋红霞曾东平宋家武曾振灵
- 关键词：氨基糖苷类耐药性
- 文献传递
- 寡核苷酸芯片检测兽医病原菌耐药性的研究被引量：15
- 2004年
- 利用寡核苷酸芯片(oligonucleotide array)对兽医临床常见病原菌耐药性检测进行了初步研究。设计1对兼并引物扩增3种病原菌(E. coli、S. aureus、M. gallisepticum)的gyrA基因片段,并用cy5-dCTP标记荧光。设计一系列检测病原菌对氟喹诺酮类药物耐药的寡核苷酸探针,将探针固定在APS-PDC法制作的Microarray上,用标记的PCR产物与之杂交,置于Scanarrray4000中扫描,利用ImaGene3.0软件对杂交图像进行分析。研究结果表明,设计的兼并引物能很好地扩增出3种病原菌的gyrA基因片段,与Microarray杂交后在相应的位点出现可检测的杂交信号,样本O78S(禽大肠杆菌)、SS(金黄色葡萄球菌)、S6-10(鸡毒支原体)的ratio比值均≥2,说明这3株是敏感株;样本EDr(犬大肠杆菌)、ECr(猫大肠杆菌)与a1探针(检测GyrA第83位氨基酸发生突变的探针)的ratio比值≤0.5,说明这两株是耐药突变株,均与样本的实际情况相吻合。说明利用Oligonucleotide array能快速准确地检测出GyrA亚基第83、87位发生突变的耐药菌株,是可行、有效、快捷的抗菌药耐药性的监测方法。本研究为进一步研制和开发兽医临床常见病原菌耐药性检测芯片打下初步基础。
- 蒋红霞陈杖榴曾振灵邓旭明欧阳红生李瑶
- 关键词：寡核苷酸芯片兽医病原菌耐药性
- 2002和2009年食品动物源产CTX-M-14大肠杆菌传播分子机制比较
- 【目的】通过比较和分析2002年和2009年产CTX-M-14大肠杆菌传播分子机制的特点,推测产CTX-M-14大肠杆菌传播分子机制的演变趋势,进而为bla传播机制及其变化规律的研究提供参考。【方法】从本实验室保存的20...
- 郭玉芳甄盼盼汤电王丽华付晓平任君玉张文慧刘志杰赵秋云蒋红霞
- 关键词：CTX-M-14复制子
- 文献传递
- 鸡源肠杆菌质粒介导喹诺酮类耐药基因检测被引量：11
- 2009年
- 【目的】对广东地区分离得到的鸡源肠杆菌进行质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基因检测。【方法】采用纸片扩散法对84株鸡源肠杆菌临床分离株进行27种抗菌药物的敏感性测定。通过PCR检测质PMQR基因qnr、qepA和aac(6′)-Ib-cr。研究PMQR基因阳性菌株染色体gyrA、gyrB、parC、parE基因喹诺酮耐药决定突变区(QRDRs)的变异情况。【结果】84株鸡源肠杆菌对兽医临床常用的恩诺沙星、氟罗沙星、氨苄西林、复方新诺明、强力霉素以及利福平、链霉素、罗红霉素的耐药率很高,且为多重耐药;对氨苄西林/舒巴坦、氨曲南、多粘菌素E和头孢氨苄的敏感性高。在84株鸡源肠杆菌中检测到1株同时携带qnrB和aac(6′)-Ib-cr基因的肺炎克雷伯氏杆菌GDK05,整个qnrB基因的阅读框架与GenBankTM中的qnrB6一致,同时GDK05在gyrA基因的QRDR出现83位S→I变异,gyrB、parC、parE基因的QRDRs没有检测到变异。【结论】广东地区集约化养殖场鸡源肠杆菌对兽医临床常用抗菌药物耐药严重。本研究首次在兽医临床上检测到1株同时携带qnrB6和aac(6′)-Ib-cr基因的鸡源肺炎克雷伯氏菌。PMQR机制的出现预示着喹诺酮类耐药很可能会在兽医临床上更加快速而广泛地传播。
- 岳磊蒋红霞刘健华廖晓萍李树娟陈雪影吴彩霞张小云刘雅红
- 关键词：肠杆菌质粒喹诺酮耐药
- 抗菌新药防治畜禽感染性疾病的药理和应用研究
- 陈杖榴曾振灵冯淇辉刘雅红方炳虎黄显会丁焕中梁梓森庞永中朱基美孙永学叶启薇杨桂香蒋红霞陈红刘涤洁夏安庆刘汉儒郭允秋
- 针对我国规模化养殖过程中出现的流行性细菌性疾病问题，系统研究了氟喹诺酮类、β-内酰胺类、氯霉素类抗菌新药治疗畜禽感染性疾病的药理和应用研究，获得了恩诺沙星等药物在健康动物内的药动学参数；评价了人工疾病模型对药物的药动学特...
- 关键词：
- 关键词：抗菌新药药理学感染性疾病
- 兽用抗菌药物耐药性研究被引量：42
- 2003年
- 本文报道了对兽用抗菌药耐药性的研究情况 ,主要研究内容包括 :①对广东地区动物源大肠杆菌耐药性的调查 ,从鸡、猪、牛、环境和饲养员等分离大肠杆菌 1 5 2 4株 ,测定了这些菌株对环丙沙星等 2 1种抗菌药物的敏感性。结果表明 ,动物源分离的大肠杆菌普遍存在耐药性 ,其中耐药率最高的为青霉素类、四环素类和磺胺药 ,这与动物用药的强度、频率呈正相关。②对大肠杆菌耐药Ⅰ型整合子 /基因盒的分子流行病学调查 ,经PCR扩增等方法测定了 1 92株耐药大肠杆菌的Ⅰ型整合子 /基因盒 ,发现有 1 0 5株携带Ⅰ型整合子 ,检出率为5 4.7% ,这些整合子多数位于质粒上。③对耐氟喹诺酮类的大肠杆菌、鸡毒支原体、沙门氏菌的 gyrA基因突变进行了研究 ,发现这些耐药菌株的 gyrA基因可发生 1个位点以上的突变 ,高水平耐药菌株常发生 2个位点突变 ,个别菌株还可以发生 3个位点突变。
- 陈杖榴吴聪明蒋红霞廖晓萍魏秀丽丁焕中曾振灵
- 关键词：兽用抗菌药物耐药性GYRA基因
- 屠宰肉沙门菌血清型鉴定及CTX-M型ESBLs的流行调查被引量：3
- 2020年
- 本研究收集了2015-2017年分离自屠宰肉(鸡肉、猪肉和鸭肉)的110株沙门菌,采用MALDI-TOF/TOF质谱微生物鉴定系统和分子生物学方法进行菌株鉴定。采用二倍琼脂稀释法测定沙门菌对兽医临床常用17种抗生素的敏感性;玻片凝集法进行血清型鉴定;PCR及基因测序方法检测沙门菌CTX-M型ESBLs耐药基因的流行以及所携带的其他耐药基因。结果显示,110株沙门菌对一些常用药物,如四环素、萘啶酸以及氨苄西林耐药率高达75%以上,对第三代头孢菌素的耐药率为20%~30%,对氟喹诺酮类耐药率接近40%,对阿米卡星的耐药率较低为5%。110株沙门菌共鉴定出15种血清型,以鼠伤寒(24%)和印第安纳型(23%)为主,其次为里森(16%)、德尔卑(8%)、肠炎(8%)以及一些不常见血清型。110株沙门菌中共检出19株CTX-M型阳性菌株,共有4种不同亚型,优势CTX-M亚型为blaCTX-M-55共12株、4株blaCTX-M-27、2株blaCTX-M-65、1株blaCTX-M-64,12株产CTX-M-55的沙门菌中携带有至少1种以上的PMQR基因,且都发生gyrA:S83F D87G+parC:T57S S80R多靶位突变。产CTX-M-55沙门菌对氟喹诺酮类药物表现出高水平耐药,且都携带有至少2种以上的PMQR基因,这种对头孢菌素和氟喹诺酮类耐药的菌株随着食物链传播和扩散,对公共卫生和人类健康都存在潜在风险。
- 丁晓敏张传珍张岩张莉娟常满霞赵秋云林晓玲蒋红霞
- 关键词：沙门菌食品动物血清型
- 细菌16S rDNA基因芯片的构建及应用被引量：3
- 2011年
- 本试验为建立能检测兽医临床重要病原菌的基因芯片方法,采用通用引物扩增菌株16S rDNA V1-V3区,制备16S rDNA PCR产物基因芯片,对5种兽医临床微生物进行检测。结果显示,制备的基因芯片能特异性地检测金黄色葡萄球菌、链球菌和鸡毒支原体,以及这3种菌株混合样品,但对大肠杆菌及沙门菌检测结果不理想。基因芯片检测灵敏度为3μg/L。
- 林居纯曹三杰蒋红霞曾振灵
- 关键词：基因芯片病原菌RDNA
