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巴曲酶在毕赤酵母中的高效表达被引量：5: 2009年; 目的研究巴曲酶在毕赤酵母菌中的表达。方法按Pichia pastoris偏好密码子人工合成巴曲酶全基因,克隆到酵母分泌型表达载体pPICZαA中,将重组载体酶切线性化后经电转化转入X-33,筛选鉴定转化子,经摇瓶发酵甲醇诱导,酵母菌分泌表达有凝血活性的巴曲酶。经SDS-PAGE电泳确定其分子量为33.0kDa,免疫印迹证明重组巴曲酶具有天然巴曲酶的免疫活性。结果经发酵条件的优化,发酵罐的表达量达到25000Ku/L发酵液,从每升发酵液中可纯化出11.0mg重组巴曲酶。结论巴曲酶毕氏酵母菌成功的构建,为重组巴曲酶止血药的开发奠定了基础。; 薛雁徐梅薛百忠王宏英兰海英; 关键词：重组巴曲酶类凝血酶巴斯德毕赤酵母

一种新型淀粉酶的鉴定及其产酶菌株的筛选被引量：30: 2002年; 对筛选到的菌株ZX99产生的一种新型淀粉酶 (异麦芽低聚糖酶 )进行了分析鉴定。ZX99菌株能产生一种胞外淀粉酶 ,该酶能催化淀粉的降解产生异麦芽低聚糖。对原产酶菌株ZX99多次进行紫外线照射诱变后 ,获得了优良、稳定的变异菌株BS3 2 32 ,其产酶水平为原株的 1 60 %。产物薄层层析证明 ,该酶能催化淀粉的降解 ,产生异麦芽糖、潘糖、异麦芽三糖和异麦芽四糖等低聚糖 ,但对普鲁兰基本不起作用 ,由此证明它是一种不同于新型普鲁兰酶 (neopullulanase)和传统淀粉酶 (amylase)的一种新型淀粉酶。; 张应玖朱学军关键李吉平薛雁郝黎明赵文斌; 关键词：芽孢杆菌

天然巴曲酶的酶学性质研究被引量：2: 2009年; 目的研究巴西矛头蝮蛇蛇毒中纯化的天然巴曲酶的酶学性质。方法测定不同的温度、pH值和金属离子等条件对重组定点突变巴曲酶活性的影响。结果实验表明,该酶在温度30～40℃,pH6.5～9.0活性较为稳定;其最适反应温度为37℃,pH为7.5;Mg2+、K+和Ca2+离子对酶活有激活作用,而Cu2+、Fe2+和Zn2+离子对该酶有抑制作用。结论从蛇毒提取的天然巴曲酶酶学性质比较稳定。; 王宏英薛雁徐梅苏珊邸伟庆王建华姜大威杨宇; 关键词：蛇毒血凝酶巴曲酶酶学性质

谷胱甘肽过氧化物酶模拟物2-位碲桥联环糊精的合成及催化作用被引量：4: 2003年; 以 β 环糊精 (CD)为酶模型 ,将Te引入 β 环糊精中 ,成功地合成出一种新的水溶性好、活力高的谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)小分子模拟物 2 TeCD ,并对其结构进行了表征 .采用Wilson辅酶偶联法 ,间接测定了 2 TeCD催化还原型谷胱甘肽(GSH)还原H2 O2 的GPX活力为 46 7U/ μmol,与文献报道的数据相比 ,2 TeCD的GPX活力最高 .通过考察 2 TeCD催化GSH还原H2 O2 反应的动力学 ,发现反应初速度对底物浓度的双倒数曲线为一组平行线 ,表明 2 TeCD所遵循的催化机制可能为三转移乒乓机制 .通过考察自由基捕获剂 2 ,4 二叔丁基甲基苯酚对酶促和自发反应速率的影响 ,发现 2 TeCD催化的酶促反应为非自由基机理 .通过考察酶不可逆抑制剂碘乙酸对酶促反应速率的影响 ,发现 2 TeCD催化反应过程中不生成碲醇中间体 .由此推测出 2 TeCD的催化循环经历碲硫化合物、次碲酸硫酯和次碲酸中间体 .该催化循环与含硒GPX小分子模拟物所经历的催化循环不同 ,以及环糊精对底物具有识别与结合的能力 ,可能是 2; 张鲲任晓君牟颖薛雁郭灿辉阎岗林罗贵民沈家骢; 关键词：谷胱甘肽过氧化酶人工酶

表达HBsAg及rhIFNα2b融合蛋白的人参细胞株的建立被引量：1: 2009年; 目的建立表达HBsAg及rhIFNα2b融合蛋白的人参细胞株。方法采用PCR方法分别扩增HBsAg及rhIFNα2b基因,以GS linker连接后,克隆入表达质粒pBI121,构建植物细胞表达质粒pBISI,转化农杆菌LBA4404,感染人参愈伤组织细胞。经G418筛选抗性细胞株,提取细胞基因组DNA,进行PCR检测;应用ELISA法检测HBsAg及rhIFNα2b的表达;通过Western blot分析表达蛋白的反应原性。结果重组表达质粒pBISI经酶切鉴定,表明构建正确。筛选得到3株正常生长的人参细胞株,基因组DNA扩增得到约1200bp的融合基因片段;经ELISA检测,其中1株能够表达HBsAg及rhIFNα2b;表达的蛋白与鼠抗HBsAg血清在相对分子质量35000处出现特异条带。结论已获得了表达HBsAg及rhIFNα2b融合蛋白的人参细胞株。; 于海鹏刘丹薛雁任琦李娟富锐丽李铮姚为民盛军; 关键词：HBSAG 重组人干扰素Α2B 融合蛋白

HPLC法测定非洛地平缓释片中非洛地平的含量被引量：2: 2009年; 目的建立HPLC法测定非洛地平缓释片的含量。方法采用大连依利特ODS-2（5μm，4．6mm×250mm）色谱柱；乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液（pH3．0）（2：1：2）为流动相，流速为1．0mL／min，检测波长为254nm，进样体积为20μL。结果非洛地平在9．72～29．16mg／L浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9998）。平均回收率为100．3％，RSD为0．87％（n=9）。结论该方法简便、灵敏、准确，可用于非洛地平缓释片的质量控制。; 薛雁李英王宏英沈文彧邸伟庆; 关键词：非洛地平缓释片高效液相色谱法

具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的小分子模拟物2-TeCD保护线粒体抵抗氧化损伤被引量：11: 2002年; 首次合成了一个新的含碲化合物 2 TeCD(二碲桥联环糊精 ) ,并证实其具有谷胱甘肽过氧化物酶 (GPX)活力 ,能清除氢过氧化物 .与其它GPX模拟物相比 ,2 TeCD具有分子量小 ,水溶性好及良好的化学和生物学稳定性 ,且其GPX活力比另一种被广泛认知的小分子模拟物Ebselen高约 4 6倍 .用Fe2 + Vc诱导的线粒体损伤体系研究了 2 TeCD的抗氧化性质 ,结果发现在相同剂量下 2; 薛雁任晓君张鲲牟颖刘俊秋曹鹏郭灿辉罗贵民沈家骢; 关键词：谷胱甘肽过氧化物酶活性线粒体抗氧化损伤

具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的小分子模拟物—2-TeCD的合成及其生物学效应研究: 活性氧(ROS)是机体正常代谢的产物.当机体ROS产生和清除处于不平衡状态时,ROS损伤机体的各种分子,如RNA、DNA、蛋白质、糖类和脂类,从而导致细胞功能紊乱.与ROS相关的疾病包括阿尔兹海莫尔、心肌休克、动脉粥样硬...; 薛雁; 关键词：谷胱甘肽过氧化物酶活性生物学效应; 文献传递

毕赤酵母表达巴曲酶发酵条件的优化研究被引量：5: 2009年; 目的对表达重组巴曲酶的巴斯德毕赤酵母的发酵条件进行优化，确定最佳的发酵控制条件以获得重组巴曲酶的最高表达量。方法通过多因素正交实验确定巴曲酶发酵培养的最适培养条件。结果表达温度在25℃，pH值为7．0，加入甲醇的量为10g／L时为最优发酵条件，诱导表达时间为84-96h。结论重组巴曲酶可以开发为止血药，代替临床应用的从蛇毒中提取的巴曲酶。; 薛雁徐梅薛百忠王宏英兰海英; 关键词：重组巴曲酶毕赤酵母摇瓶发酵发酵优化

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薛雁