詹希美 作品数:211 被引量:646 H指数:12 供职机构: 中山大学中山医学院寄生虫学教研室 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家自然科学基金委员会-广东省人民政府联合基金 国家科技重大专项 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 自动化与计算机技术 文化科学 更多>>
代表性差异性分析——种分析复杂基因组间差异性的方法 1997年 介绍一种新方法——代表性差异性分析法,它是一种有效的发现复杂基因间差异的方法,被广泛的应用于肿瘤、微生物、寄生虫等领域。如克隆肿瘤的缺失基因,新的致病基因的发现,不需基因图谱即可快速分离与相关的多态性标记物。 王轶 詹希美关键词:基因 RDA 肿瘤 全文增补中 弓形虫MIC 6羧基端蛋白片段的表达及其多克隆抗体的制备 被引量:7 2009年 目的克隆表达刚地弓形虫微线体蛋白6羧基端蛋白片段(Tg MIC6C),制备多克隆抗体。方法PCR扩增目的基因片段,克隆到pGEX-4T-1载体上,构建MIC6C/pGEX-4T-1原核表达系统;IPTG诱导表达GST-MIC6C融合蛋白,亲和层析融合蛋白;用纯化的融合蛋白混合免疫佐剂免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,纯化并分析抗体的特异性。结果构建了MIC6C/pGEX-4T-1原核表达系统并获得纯化的GST-MIC6C融合蛋白;获得了抗目的蛋白的多克隆抗体,抗体能特异地识别目的蛋白,抗体效价为1∶8 000。结论在体外获得了纯化的GST-MIC6C融合蛋白及其多克隆抗体,为后续GSTpull-down筛选与MIC6相互作用的蛋白奠定了基础。 郑斌 何蔼 李卓雅 郑小英 张瑞琳 杨潇 詹希美关键词:刚地弓形虫 多克隆抗体 广州管圆线虫雌性成虫肌蛋白-1基因的克隆表达及免疫学效应分析 2014年 目的对广州管圆线虫雌性成虫肌蛋白-1(Ac-fmp-1)基因的开放读码框进行克隆、表达及重组蛋白的免疫学效应分析,评价其重组蛋白在免疫学诊断中的应用前景。方法逆转录聚合酶链反应扩增目的基因,克隆至原核表达载体pET-30a-c(+),重组质粒转化至大肠埃希菌E.coli BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍离子亲和层析(Ni-IDA)纯化分离表达产物。免疫印记(Western-blot)和酶联免疫吸附试验(ELISA)分析重组蛋白的免疫性。结果广州管圆线虫Ac-fmp-1基因的编码区有1 251个碱基,编码417个氨基酸。原核表达载体pET-Ac-fmp-1构建成功,IPTG诱导表达获得了体外高效表达的重组融合蛋白,经亲和层析得到纯化蛋白。融合蛋白可被感染广州管圆线虫的SD大鼠血清及病人血清所识别;作为包被抗原用于ELISA检测大鼠血清其敏感性与特异性均为100%,与粗抗原无差别;检测广州管圆线虫病人血清敏感性为100%,与粗抗原有差别;检测其他寄生虫病人血清与正常病人血清其特异性为100%和98%,与粗抗原相比特异性较高。结论广州管圆线虫Ac-fmp-1基因在原核表达系统获得高效表达,编码蛋白可能是虫体的重要抗原成分,在免疫学诊断方面有潜在的应用前景。 李素丽 詹希美 李海飞关键词:广州管圆线虫 原核表达 免疫诊断 抗日本血吸虫循环抗原单链抗体的抗原定位和初步应用 被引量:5 2003年 目的 将获得的抗日本血吸虫循环抗原的单链抗体进行抗原定位和用于诊断。方法 用间接荧光抗体试验(IFA)对 2株可溶性单链抗体所针对的抗原进行定位 ;将可溶性单链抗体进行生物素标记后 ,用于检测急、慢性血吸虫病人血清标本。结果 两个特异性单链抗体分别于日本血吸虫成虫的肠管和生殖系统呈现明显的荧光反应。检测急性血吸虫病人血样 2 0份 ,慢性血吸虫病人血样 30份 ,正常人血样 2 0份。结果用其中 1株单链抗体检测急性病人的敏感度为 6 0 % ,慢性病人的敏感度为 36 7% ,特异度为 90 % ;以 2株单链抗体混合检测急性病人的敏感度为 75 % ,慢性病人的敏感度为 5 6 7% ,特异度为 85 %。结论 经抗体库技术制备的单链抗体可用作日本血吸虫病的诊断 ,单抗组合较单株单抗可提高免疫学检测的敏感性。 陈代雄 孟锦绣 易冰 何蔼 李卓雅 张瑞琳 詹希美关键词:日本血吸虫 循环抗原 单链抗体 抗原定位 日本血吸虫成虫抗原基因的克隆和序列分析 1997年 本实验在用感染兔血清和单克隆抗体对日本血吸虫(大陆株)成虫cDNA表达文库进行筛选的基础上。 陈代雄 刘启文 詹希美关键词:克隆 日本血吸虫 抗原基因 寄生虫学Internet信息网络站点的初步建立 1997年 应用HTML和Java语言,缩写网络主页及相应的网关接口程序,初步建立起寄生虫学Internet信息网络站点(http://WWW.gxsums.edu.ch/xxgk/zyjs/jscx/)。利用该站点可以进行寄生虫学相关资料的检索、专题讨论、查寻与寄生虫学领域有关的重要网络地址、了解中山医科大学寄生虫学教研室的发展动态以及检索本室发现的蠕虫新种和新记录以及新建立的科,亚科和属。 林六文 谢敏辉 宋罗盟 詹希美 李卓雅关键词:寄生虫学 INTERNET 蠕虫 全文增补中 粉尘螨主要变应原Derf 1基因的改造与可溶性表达 被引量:3 2008年 目的在大肠杆菌中提高粉尘螨1类变应原(Der f 1)的可溶性表达。方法用RT-PCR方法扩增得到Der f 1的全长序列与成熟肽序列(mDer f 1);以已知Der p 5基因的前导序列替换Der f 1前导序列和原酶序列,重新构建出rDer f 1基因;将上述3个基因分别克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中表达,经Western-blot对三者的表达产物进行分析鉴定。结果Western-blot表明,pGEX-Der f 1与pGEX-mDer f 1的表达产物分别为分子量约63 000与51 000的重组蛋白质,重组蛋白质主要存在于细胞裂解液的沉淀中。pGEX-rDer f 1大量表达了可溶性目的蛋白质,分子量约53 000,并被成功地分离纯化。以上三种表达产物均可被鼠抗GST抗体与螨过敏患者血清特异地识别。结论表达了含Der f 1,mDer f 1与rDer f 1的三种GST融合蛋白质,它们均具免疫反应性,纯化获得了GST-rDer f 1融合蛋白质,为后期的诊断及治疗奠定了基础。 甘明 何蔼 李卓雅 郑小英 吴瑜 王玲 张瑞琳 詹希美关键词:粉尘螨 克隆 重组变应原 中国大陆4地日本血吸虫蛋白质及同工酶的多态性研究 被引量:1 1997年 本文通过对中国大陆境内安徽、湖南、湖北和云南4地日本血吸虫的蛋白质组分、同工酶多态性进行分析表明:1梯度SDS、IEF电泳结果均显示4地日本血吸虫雌雄虫的蛋白条带相同,说明在蛋白质组分上可能是相同的。2同工酶电泳显示4地血吸虫雌雄虫在CO酶谱上无差别,即没有多态性表现。在GPI、ACP和G6PDH上显示了雌雄虫间的酶谱略有差异,但不同地理株同性虫体间未显示差异,说明在雌雄虫间可能存在基因位点的多态性,在PGM和MDH的同工酶谱上则表现出既有雌雄虫间的不同,也有不同地理株间的差异,表现4地日本血吸虫雌雄虫和不同地理株间有基因位点的多态性表现。 路群 詹希美 李卓雅 王亮 李长江关键词:日本血吸虫 蛋白质 同工酶 多态性 核酸微阵列技术及其在寄生虫学研究中的应用前景 被引量:2 2001年 核酸微阵列技术是近年来DNA芯片(DNA chip)技术的一个重要进展。该技术是将多个基因的cDNA或mRNA片段点阵于尼龙膜等固相表而而组成一个高密度的二维阵列所得。本文综述了其基本原理、方法、特点及其在寄生虫学研究中的应用前景。 陈代雄 俞慕华 詹希美关键词:寄生虫学 基因表达 联合PCR技术克隆白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶基因及其生物信息学分析 2011年 目的测定白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶的基因的全长序列并用生物信息学方法分析其结构和功能。方法从白纹伊蚊卵、幼虫、蛹、雌蚊、雄蚊中提取总RNA,逆转录后以总cDNA为模板,设计简并引物进行巢式PCR,扩增部分序列后设计新的特异性引物补全5’端序列,使用3’-RACE法补全3’端序列,拼接全长后进一步进行生物信息学分析。结果通过巢式PCR扩增出1145bp的核苷酸序列,测序后设计5’端序列的下游引物,扩增出约900bp的核苷酸序列,设计3’端的上游引物,配合3’RACE试剂盒扩增出约600bp的核苷酸序列,寻找重复序列将三段序列进行拼接,得到国内外从未获得的长2244bp、编码747个氨基酸序列的白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶基因的全长序列。生物信息学分析其与白纹伊蚊的相似性最高,为含信号肽的跨膜蛋白,含3个Cu氧化酶超家族位点,属于蓝色多铜氧化酶家族。结论联合PCR技术的应用使较长长度的基因序列的扩增更为方便、准确。为进一步对其进行功能的研究奠定了基础。 刘静 吴瑜 詹希美 冯崑尧 甘明 张美春 郑小英 李卓雅 何蔼关键词:巢式PCR 白纹伊蚊