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许园园
作品数:
2
被引量:4
H指数:1
供职机构:
宁波市医疗中心李惠利医院
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
余方友
温州医科大学
王良兴
温州医科大学
张协
温州医学院附属第一医院
瞿涤
复旦大学上海医学院医学分子病毒...
楼丹萍
温州医学院附属第一医院
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saeRS对金黄色葡萄球菌临床分离株的hla和lukS-PV表达的影响
被引量:3
2013年
目的研究双组分信号调控系统saeRS对金黄色葡萄球菌临床分离株a溶血素基因(hla)和Panton.Valentine杀白细胞素基因(1ukSIF-PV)表达的影响。方法利用同源重组技术敲除saeRS基因,获得金黄色葡萄球菌saeRS基因敲除株,并构建saeRS回复突变株。应用SDS-PAGE检测金黄色葡萄球菌saeR/S野生株、敲除株及回复突变株分泌蛋白的变化,采用RT—PCR检测金黄色葡萄球菌saeR/S野生株、敲除株及回复突变株hlamRNA和lukS—PVmRNA。结果成功构建了金黄色葡萄球菌saeRS基因敲除株SA75AsaeRS。与野生株SA75相比,SA75/XsaeRS的生长无明显差异,但分泌蛋白种类和数量有明显减少且溶血能力明显减弱。saeRS基因回复突变株SA75/XsaeRS—C可以基本恢复敲除株的溶血能力。在3、6和10h3个时间点与野生株相比,SA75AsaeRS的hlamRNA均有明显下降,分别是野生株的7.6%、0%和0.1%。lukS—PVmRNA也均有明显下降,分别是野生株lukS—PV表达量的37.2%、19.2%和20.4%。结论saeRS基因是调节金黄色葡萄球菌分泌蛋白的关键因子。saeRS基因对金黄色葡萄球菌的hla和lukS—PV的表达具有正调控作用。
屠金晶
张协
许园园
尚永朋
楼丹萍
武有聪
瞿涤
王良兴
余方友
关键词:
金黄色葡萄球菌
HLA
金黄色葡萄球菌双组份调节系统SaeRS对重要毒力基因的分子调控机制
被引量:1
2015年
目的:初步研究金黄色葡萄球菌双组份调节系统Sae RS对重要毒力基因的分子调控机制。方法:PCR扩增双组份调节系统Sae RS的反应调节蛋白Sae R基因,构建重组表达质粒pET28a-sae R,用限制性酶切、PCR和基因测序方法进行鉴定。用IPTG诱导表达重组蛋白His Sae R,用镍离子螯合亲和层析法纯化,用Western blot法鉴定。用实时荧光定量RT-PCR方法检测金黄色葡萄球菌SA75及SA75Δsae RS突变株luk-PV、hla、coa、fnb B、sak、psmβ基因转录水平。凝胶迁移阻滞实验验证纯化蛋白His Sae R对这些毒力基因启动区序列的结合能力。结果:重组表达质粒p ET28a-sae R构建成功;在0.4 mmol/L IPTG,25℃培养12 h的条件下,重组蛋白His Sae R在大肠杆菌中以可溶形式高效表达;与SA75野生株相比,Dsae RS突变株luk-PV、hla、coa、fnb B基因转录水平均明显下降,分别为野生株的19.7%、0.3%、31.6%、3.5%;psmβ基因和sak基因转录水平无变化。反应调节蛋白Sae R能有效结合luk-PV、hla、coa、fnb B及其自身P1启动区序列。结论:金黄色葡萄球菌双组份调节系统Sae RS对luk-PV、hla、coa、fnb B基因表达具有正调控作用,而这种作用可能是通过反应调节蛋白Sae R与这些基因启动区序列直接结合而实现。
许园园
丁宇
刘云灵
李丹
王良兴
余方友
关键词:
金黄色葡萄球菌
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