赵新宇
- 作品数：10 被引量：24H指数：3
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- 小鼠凋亡相关新基因PNAS-4真核表达载体的构建、表达及体外抗肿瘤作用被引量：3
- 2007年
- 目的:对小鼠凋亡相关新基因PNAS-4(mPNAS-4)进行克隆,构建其真核表达载体,并在小鼠Lewis肺癌细胞系LL2中转染表达;探讨mPNAS-4基因转染LL2细胞过表达所诱导的体外肿瘤细胞凋亡情况。方法:用RT-PCR从小鼠肝脏组织中克隆mPNAS-4编码区cDNA,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-mPNAS-4;用脂质体将pcDNA3.1(+)-mPNAS-4转染小鼠Lewis肺癌LL2细胞;用RT-PCR检测转染细胞中mPNAS-4的过表达情况;通过MTT、流式细胞术(FCM)及DNALadder分别检测转染细胞的增殖与凋亡情况。结果:从小鼠肝脏组织中克隆到mPNAS-4全长cDNA并成功构建其真核表达载体pcDNA3.1(+)-mPNAS-4,转染小鼠Lewis肺癌LL2细胞可使其mRNA表达明显上调。mPNAS-4过表达能抑制LL2细胞增殖并诱导其凋亡。结论:mPNAS-4过表达对小鼠Lewis肺癌LL2细胞的生长有明显的抑制和诱导凋亡作用。
- 袁铸严飞赵新宇邓洪新李炯
- 关键词：基因转染真核表达凋亡
- 电子工作证的安全设计
- 该论文是以作者在实际工作中参与的一个项目为基础,通过对一个电子工作证管理系统的安全分析和总体设计,研究电子工作证在实际的管理过程中的安全应用.作者通过对项目应用背景的总结,对电子工作证在应用过程中的安全风险问题进行了分析...
- 赵新宇
- 关键词：工作证电子标签授权PDACF
- 文献传递
- 一种新的双元表达质粒pCMV-Myc-IRES-EGFP的构建及其表达被引量：10
- 2007年
- 为了研究基因的特征、理化特性及其功能机制,通常需要构建多个真核表达载体,涉及到多次的引物设计、酶切、连接和鉴定等繁琐的亚克隆过程。构建携带易于多种实验研究的多用或通用载体是基因工程载体的发展方向。为此,利用pIRES载体为骨架质粒,在A和B多克隆位点上分别插入c-Myc标签蛋白序列和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列,从而构建了一个包含c-Myc标签蛋白序列并携带有核糖体结合位点(IRES)介导的增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pCMV-Myc-IRES-EGFP。通过荧光检测和免疫印迹实验证实该载体能在哺乳细胞中表达。该载体可用于监测细胞的转染效率、分选稳定表达的阳性细胞群体、体外转录和翻译、检测或纯化目的蛋白以及捕获相关作用蛋白等多种实验研究,为基因功能研究提供了便利。
- 严飞赵新宇邓洪新魏于全
- 关键词：绿色荧光蛋白
- DRR1基因在制备抗肿瘤药物中的用途
- 本发明属于肿瘤基因治疗领域，具体涉及DRR1基因在制备抗肿瘤药物中的用途。本发明提供了新的肿瘤基因治疗的技术方案。该技术方案提供了DRR1基因及其编码蛋白在制备抗肿瘤药物与抗肿瘤辅助药物中的用途。动物实验结果表明DRR1...
- 魏于全赵新宇刘劝梁淑芳
- 文献传递
- DRR1基因的表达与功能初探以及靶向PLK1基因RNAi的抗肿瘤作用
- 非洲爪蟾(Xenopus laevis)模型系统是一种重要的新基因功能研究平台。本研究利用RT-PCR的方法从非洲爪蟾卵母细胞总RNA中克隆得到了与人DRR1基因(hDRR1)同源的cDNA片断，生物信息学分析结果表明该...
- 赵新宇
- 关键词：肿瘤抑制基因可溶性表达爪蟾
- HBD-2转基因小鼠的建立及鉴定被引量：2
- 2006年
- 人β防御素2(Hum an beta defens in 2,HBD-2)是人体抗菌肽的重要分子,体外试验研究证明具有广谱抗微生物活性,为开展其在整体水平上的功能研究,建立HBD-2转基因小鼠模型。用分子克隆方法构建了带CM V启动子的HBD-2全长cDNA真核重组表达质粒pCDNA 3.1-HBD 2,以此为摸板,PCR扩增出带CM V启动子和BGHpo lyA尾的HBD-2基因片段,用显微注射技术将此微基因导入小鼠雄原核中,于M 16培养液培养后经输卵管移植到受体鼠体内让其怀孕产生子代小鼠。PCR法检测外源基因在小鼠基因组中的整合,RT-PCR和免疫组化法检测HBD-2在小鼠组织的表达。PCR检测结果显示17只F0代转基因鼠中4只检测到阳性信号,RT-PCR和免疫组化检测显示HBD-2在其F1代转基因小鼠生殖道、呼吸道、泌尿道以及血管内皮等组织部位广泛表达。实验表明HBD-2基因已整合到小鼠基因组且广泛表达,为进一步研究HBD-2的生物学功能及基因调控提供了有用的整体动物模型。
- 张舒黄宁赵新宇王青松杨洋成勇鞠辉明熊文碧储国君李绚王伯瑶
- 关键词：Β-防御素人Β防御素2转基因小鼠
- 靶向EGFR的RNA干扰诱导非小细胞肺癌细胞A549凋亡的研究被引量：6
- 2008年
- 目的:探讨短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)介导的靶向EGFR基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549的凋亡诱导作用。方法:构建靶向人EGFR基因的表达shRNA的质粒(pShEGFR),转染A549细胞,应用RT-PCR分析EGFR mRNA的表达情况,采用MTT法检测A549细胞的生长状况,通过流式细胞仪以及PI染色法进行细胞凋亡的定量检测和形态学分析。结果:pShEGFR转染组A549细胞中EGFR mRNA的表达水平,较转染同一载体连接无关序列的对照组(pShNEG组)、单纯脂质体组及PBS阴性对照组A549细胞均明显降低,F=425.640,P=0.000,其中较PBS阴性对照组细胞降低了74.5%。转染pShEGFR的A549细胞与3种不同对照组细胞相比,生长受到明显抑制,F=107.428,P=0.000,生长抑制率达54.9%,而转染pShNEG组和单纯脂质体组的A549细胞生长抑制率则分别为20%和3.1%。流式细胞仪检测结果显示,pShEGFR组细胞存在32.8%的凋亡率,PI荧光染色可见pShEGFR组细胞呈现出典型的凋亡形态学变化。结论:质粒介导的靶向人EGFR基因的pShEGFR能够有效地干扰NSCLC细胞系A549中EGFR基因的表达,进而抑制肿瘤细胞的生长,诱导肿瘤细胞的凋亡。
- 游佳赵新宇陈县城徐宁邓洪新
- 关键词：RNA干扰细胞凋亡
- 人DRR1真核表达载体和稳定转染HEK293细胞株的建立及鉴定
- 2011年
- 目的:构建人DRR1基因的真核表达载体,通过转染HEK293细胞建立稳定的DRR1表达细胞株。方法:通过改造质粒pIRES,在其MCS1和MCS2中分别引入串联亲和纯化标签和绿色荧光蛋白基因,形成一个新的表达质粒pFSIG。将PCR扩增的DRR1基因插入pFSIG中进行酶切和测序验证。用重组质粒pFSIG-DRR1转染HEK293细胞,通过G418和绿色荧光检测筛选DRR1稳定表达细胞株。通过W esternb lot鉴定FS-DRR1蛋白的表达。结果:酶切、PCR和测序证实成功构建了pFSIG-DRR1表达质粒;建立了稳定转染的HEK293细胞系,W estern b lot检测证明重组DRR1在该细胞系中成功表达。结论:融合有串联亲和纯化标签的DRR1真核表达载体的构建和稳定表达细胞HEK293株的建立为在生理条件下研究DRR1的相互作用蛋白奠定了基础。
- 赵新宇聂春来袁铸
- 关键词：肿瘤抑制基因肿瘤发生串联亲和纯化
- 非洲爪蟾β-synuclein基因的克隆、亚细胞定位及原位表达检测
- 2011年
- 目的克隆非洲爪蟾β突触核蛋白基因(xenopus-β-synuclein,xSYNB)并研究其亚细胞定位。方法以成年爪蟾脑部的总RNA为模板,RT-PCR扩增获得xSYNB基因,并克隆入pGEM-TEasy载体而获得TA-xSYNB重组质粒,亚克隆到pEGFPN1载体上获得pEGFPN1-xSYNB真核表达载体。将pEGFPN1-xSYNB重组质粒转染HEK293细胞,用TA-xSYNB重组质粒为模板合成的正义与反义探针对非洲爪蟾胚胎进行原位杂交。结果成功构建了pEGFPN1-xSYNB重组质粒,绿色荧光检测结果发现xSYNB蛋白在细胞浆中表达。原位杂交实验表明xSYNB基因主要表达于胚胎的头部。结论首次鉴定了非洲爪蟾β-synuclein基因的表达,并发现xSYNB基因可能在爪蟾胚胎神经系统发育中起一定作用。
- 刘焕义曹康赵新宇袁铸
- 关键词：非洲爪蟾重组质粒
- β防御素2转基因小鼠抗金黄色葡萄球菌感染的研究被引量：3
- 2006年
- 目的探讨转基因小鼠抗金黄色葡萄球菌作用。方法用分子克隆方法构建β防御素2(HBD-2)全长cDNA重组质粒,通过显微注射技术,将重组片段注射入小鼠雌原核细胞,聚合酶链反应(PCR)方法检测小鼠HBD2基因整合情况,免疫组化检测转基因小鼠HBD2表达和组织分布。用金黄色葡萄球菌腹腔攻击转基因阳性小鼠观测全身情况和死亡数。结果DNA序列测定证明重组质粒插入HBD-2cDNA片段无误,PCR显示7只小鼠已整合HBD-2基因,PCR阳性小鼠免疫组化显示HBD2基因在肺、肠道、肝、肾、睾丸、小脑等组织广泛表达。腹腔攻击实验显示7只转基因小鼠4只存活,而野生小鼠10只全部死亡。结论HBD-2在体内具有显著抗金色葡萄球菌感染能力。
- 张舒黄宁赵新宇王青松杨洋成勇鞠辉明熊文碧欧珍蓉吴琦王伯瑶
- 关键词：防御素转基因小鼠抗感染作用
