郭春娟
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 供职机构：新疆农业大学更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛病毒性腹泻病毒内标双重TaqMan荧光RT-PCR方法的建立及初步应用被引量：1
- 2014年
- 为建立牛病毒性腹泻病毒（BVDV）内标双重TaqMan荧光RT-PCR方法,本研究根据BVDV 5＇-UTR区序列设计引物和荧光标记探针,通过重叠延伸PCR（SOE-PCR）扩增获得内标模板,经体外转录得到可以作为内标物的cRNA。经反应条件的优化,建立了BVDV内标双重TaqMan荧光RT-PCR检测体系。结果表明：当cRNA浓度为103拷贝/μL时,二者均有较好的扩增曲线;该方法对I型BVDV的检测灵敏度为0.25 TCID50,对II型BVDV的检测灵敏度为2.5 TCID50;利用该方法对猪瘟病毒等其他相关核酸的检测结果均为阴性;重复性检测Ct值变异系数为0.54~4.73。对506份临床样品检测,结果有23份样品为阳性,阳性样品检出数量和编号与不含内标的单一荧光RT-PCR方法完全一致,表明该方法可以用来对BVDV进行准确、快速检测,并且可以对检测结果进行质量监控。
- 季新成史茜郭春娟王科珂冉多良
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒内标
- 牛病毒性腹泻病毒E0基因原核表达载体的构建及表达被引量：2
- 2012年
- 采用RT-PCR方法,利用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)C24V株接种MDBK细胞,提取病毒RNA,扩增出BVDV-E0基因,将所得片段与pET-28a表达载体连接,转化至BL-21大肠杆菌中,筛选阳性克隆,鉴定后证明pET-28a-E0原核表达载体构建成功。经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定,鉴定结果表明,目的蛋白在大肠杆菌中得以表达。
- 王璐郭春娟吴星星宫玉玲季新成冉多良
- 关键词：克隆原核表达
- 猪2型圆环病毒新疆株全基因组的克隆与序列分析
- 2012年
- 根据GenBank中猪2型圆环病毒(PCV2)的核苷酸序列,设计了一对引物,采用PCR方法从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的死亡仔猪组织病料中扩增出一株PCV2全基因组,将其克隆到pMD simple18-T载体上,筛选获得了重组质粒pMD18-T-PCV2。对此重组质粒进行序列测定及同源性分析,结果表明,该PCV2新疆株的全基因组大小为1 767bp,与其它PCV2核苷酸序列同源性为95.0%～99.6%,而与PCV1的同源性仅为76.8%～76.9%。
- 吴星星郭春娟王璐宫玉玲孙建华冉多良
- 关键词：猪2型圆环病毒全基因组
- 牛病毒性腹泻/粘膜病荧光定量RT-PCR检测方法的建立
- 牛病毒性腹泻/粘膜病(Bovineviraldiarrhea/mucosaldisease,BVD/MD),由牛腹泻/粘膜病毒引起的,是黄病毒科、瘟病毒属的成员之一,在牛的病原学上具有很重要的地位。目前为止,还没有有效的...
- 郭春娟
- 关键词：牛病毒性腹泻粘膜病荧光定量RT-PCR方法
- 文献传递
- 牛病毒性腹泻病毒通用型RT-PCR检测方法的建立被引量：7
- 2012年
- 为建立一种快速、特异、简便的检测牛病毒粘膜腹泻病病毒Ⅰ、Ⅱ型抗原的通用RT-PCR方法,根据GenBank上已发表的牛病毒性粘膜腹泻病毒(BVDV)Ⅰ、Ⅱ型5’端非编码区保守序列设计合成了两条引物,其中上游引物为兼并引物。应用一步法RT-PCR技术分别对Ⅰ(Oregon C24V)、Ⅱ型(279)标准株进行扩增,将PCR产物胶回收后连与pMD18-T载体,经PCR、酶切鉴定条带均正确(288bp),测序结果与预期一致。同时设牛疱疹病毒Ⅰ型、牛传染性鼻气管炎、猪瘟病毒、蓝舌病病毒、口蹄疫病毒、MDBK细胞作对照,结果均为阴性;并对新疆各地州的样品进行检测。优化反应条件后,检测其灵敏度为10-1 TCID50/mL。经对400份临床样品检测,阳性检出率为10.75%,明显高于ELISA检测。试验表明,该方法具有特异、灵敏、高效、快速、重复性好等特点,可用于牛病毒粘膜腹泻病的临床检测及流行病学检测。
- 郭春娟吴星星王璐季新成冉多良买买提.黑牙斯丁王克栋熊浩
- 关键词：一步法RT-PCR
