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融合条件对小鼠体细胞核移植融合率的影响被引量：2: 2009年; 目的提高小鼠体细胞核移植过程中融合效率。方法使用CRY-3型和CE-450型细胞融合仪对B6D2F1小鼠去核卵母细胞与该品系小鼠胎儿成纤维细胞构成的重构胚进行融合，通过PEG／DMSO对供核细胞的预处理，比较了不同融合液，不同电极形状融合槽和供核细胞代次对融合率的影响。结果（1）以PEG／DMSO对供核细胞预处理5min的融合率显著高于同条件下未处理组（51．11％vs25．64％）（P〈0．05）；（2）融合液中含0．1g／L聚乙烯醇（PVA）组的融合率高于无PVA组；重构胚在甘露醇浓度为0．32mol／L融合液中的融合率（48．21％）高于其他甘露醇浓度组（27．78％，41．67％和30．11％）；（3）使用针状电极融合槽时的融合率（42．31％，43．13％）高于同条件下平行丝状电极融合槽组（30．43％，33．33％），其中又以在2000V／cm，20μs，2个脉冲时，交流电预处理30S组最高（43．13％）；（4）供核细胞传代一次后融合率随着传代次数的增加而下降。结论通过PEG／DMSO对供核细胞进行预处理，并在融合液中添加PVA时，结合优化的融合条件可以提高小鼠体细胞核移植过程中融合率。; 王怡鞠辉明薛整风杨玲冯亚杰郭磊袁玉国成勇; 关键词：PEG 小鼠体细胞核移植

小鼠乳汁中重组人乳铁蛋白的提取与抗菌活性的研究: 本研究从人乳铁蛋白(hLF)cDNA转基因小鼠乳汁中提取重组人乳铁蛋白(rhLF)，并用提取的rhLF进行抗菌活性分析。收集了2个基因和2个品系的(PcL25和AP基因)转基因小鼠乳汁，采用凝胶过滤层析法从转基因小鼠乳汗...; 缪明星柏亚军安礼友周咏松郭磊袁玉国成勇; 关键词：人乳铁蛋白转基因小鼠抑菌作用乳汁抗菌活性; 文献传递

山羊BLG基因侧翼区的克隆及序列分析被引量：2: 2008年; 克隆奶山羊β-乳球蛋白基因5′、3′调控区并对其进行序列分析。从徐淮奶山羊组织中提取基因组DNA,采用高保真长模板PCR法克隆得到山羊β-乳球蛋白基因4.2 kb的5′调控区和1.8 kb的3′调控区。将纯化后的PCR产物克隆到pGEM-TEasy载体中,经酶切鉴定和序列测定验证克隆的正确性。部分序列分析表明,5′区与GenBank中登录的山羊和绵羊BLG基因5′区同源性分别为100%和95%;3′区同源性则分别为99%和93%。克隆得到的奶山羊BLG调控区与山羊BLG伪基因显著不同,5′区和3′区同源性分别为83%和88%。结果表明,克隆得到的奶山羊BLG调控区可用于构建乳腺特异性表达载体,为指导外源基因在转基因动物乳腺中的高效表达奠定了基础。; 周咏松殷烈郭磊成勇徐娟柏亚军袁玉国; 关键词：奶山羊 Β-乳球蛋白基因 DNA序列分析

山羊β-乳球蛋白基因侧翼区的克隆和序列分析: 目的：克隆奶山羊β-乳球蛋白基因5'、3'调控区并对其进行序列分析。方法：从徐淮奶山羊组织中提取基因组DNA，采用高保真长模板PCR法克隆得到山羊β-乳球蛋白基因4.2kb的5'调控区和1.8kb的3'调控区.将纯化后的...; 周咏松成勇殷烈徐冬兰柏亚军郭磊袁玉国; 关键词：山羊 Β-乳球蛋白 DNA序列外源基因; 文献传递

程序化冷冻对小鼠胚胎发育的影响被引量：1: 2009年; 取小鼠原核(220枚)、2~4细胞胚胎(227枚)、桑椹胚(127枚),将其分为3组,每一时期胚胎分成两半,一半取出后立即冷冻复苏并体外培养至囊胚,另一半体外培养至囊胚后冷冻复苏,子宫冲取囊胚(78枚)冷冻复苏为对照组;各组囊胚均移植至子宫,比较程序化冷冻对小鼠早期胚胎存活率的影响。结果表明:原核、2~4细胞胚胎、桑椹胚体外培养至囊胚后冷冻复苏率分别为56.4%、72.2%、81.6%,移植产仔率分别为38.1%、41.6%、56.8%,原核、2~4细胞组复苏率和产仔率极显著或显著低于对照组,桑椹胚组与对照组差异不显著,显示体外培养对早期胚胎冷冻存活有影响;原核、2~4细胞胚胎、桑椹胚冷冻后体外培养至囊胚,胚胎移植后产仔率分别为25.3%、28.2%、42.1%,与对应胚胎时期体外培养至囊胚冷冻复苏后移植产仔率相比,原核、2~4细胞组均存在显著差异,而桑椹胚组差异不显著,显示原核、2~4细胞的早期胚胎体外培养至囊胚后冷冻可提高冷冻存活率。; 袁玉国李锋郭磊缪明星冯亚杰柏亚军成勇; 关键词：小鼠胚胎体外培养

奶山羊β-乳球蛋白基因5'、3'调控区的克隆和序列分析被引量：1: 2008年; 目的:克隆奶山羊β-乳球蛋白(BLG)基因5'、3'调控区,并对其进行序列分析。方法:从徐淮奶山羊组织中提取基因组DNA,采用高保真长模板PCR法克隆得到奶山羊BLG基因4.2kb的5'调控区和1.8kb的3′调控区;将纯化后的PCR产物克隆到pGEM-TEasy载体中,经酶切鉴定和序列测定验证克隆的正确性。结果:部分序列分析表明,奶山羊BLG基因5'区与GenBank中登录的山羊和绵羊BLG基因5'区的同源性分别为100%和95%,3'区的同源性分别为99%和93%;克隆得到的奶山羊BLG基因调控区与山羊BLG伪基因显著不同,二者5'区和3'区的同源性分别为83%和88%。结论:克隆得到的奶山羊BLG基因调控区可用于构建乳腺特异性表达载体,用于外源基因在转基因动物乳腺中的高效表达。; 周咏松成勇殷烈徐冬兰柏亚军郭磊袁玉国; 关键词：奶山羊 Β-乳球蛋白基因克隆 DNA序列分析

山羊β-乳球蛋白基因侧翼区的克隆和序列分析: 目的：克隆奶山羊B-乳球蛋白基因5'、3'调控区并对其进行序列分析。方法：从徐淮奶山羊组织中提取基因组DNA，采用高保真长模板PCR法克隆得到山羊β-乳球蛋白基因4.2kb的5'调控区和1.8kb的3'调控区。将纯化后的...; 周咏松成勇殷烈安礼友柏亚军郭磊袁玉国; 关键词：奶山羊 Β-乳球蛋白基因基因克隆; 文献传递

小鼠乳汁中重组人乳铁蛋白的提取与抗菌活性的研究: 从人乳铁蛋白(hLF)cDNA转基因小鼠乳汁中提取重组人乳铁蛋白(rhLF)，并用提取的rhLF进行抗菌活性分析。收集了2个基因和2个品系的(PCL25和ＡＰ基因)转基因小鼠乳汁，采用凝胶过滤层析法从转基因小鼠乳汗中提取...; 缪明星柏亚军安礼友周咏松郭磊袁玉国成勇; 关键词：人乳铁蛋白抗菌活性 ELISA检测; 文献传递

克隆山羊早期B超妊娠诊断可靠性研究: 体细胞克隆研究中妊娠羊早期早期正确论断对于寄母羊的饲养管理、降低研究成本、及胎儿发育的监测有较大的作用。本研究用兽用便携 B 型超声论断仪对29头寄母羊分不同的阶段进行 B 超检查,受体羊在20-35、35-60、60-...; 安礼友袁玉国成勇谬明星丁国梁郭磊柏亚军; 文献传递

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郭磊