陈晓琦
- 作品数：20 被引量：55H指数：4
- 供职机构：武汉生物制品研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肠道病毒71型灭活疫苗TritonX-100残留检测方法的建立与验证被引量：1
- 2015年
- 目的建立适合于肠道病毒71型（Vero细胞）灭活疫苗原液TritonX-100残留检测方法并加以验证。方法使用分光光度法对TritonX-100残留进行检测,并按照《中华人民共和国药典》（2010年版）二部中的相关规定对检测方法进行验证及初步应用。结果本方法在5~50μg/ml浓度范围能定量检测TritonX-100残留量,取不同浓度TritonX-100检测其回收率在85.97%~107.31%,RSD≤4.05%;重复性检测的RSD≤0.25%,中间精密度试验RSD≤3.18%;对检测中影响结果的参数：检测持续时间、检测温度、检测波长和检测试剂苯酚浓度在一定范围内适度变化后,检测理论浓度的TritonX-100,其平均回收率在86.42%~107.80%,RSD≤3.54%;340nm波长扫描PBS、5%苯酚、PBS＋苯酚的A值均〈0.01,TritonX-100及5%苯酚反应物的A值明显高于此值。结论本方法的准确度、精密度、专属性以及耐用性均符合规定,方法准确稳定,可用于对肠道病毒71型（Vero细胞）灭活疫苗原液中TritonX-100残留量的检测。
- 陈晓琦王继麟郭长福明平刚张柳涂晶杨邦玲段凯黄佐林
- 关键词：肠道病毒71型灭活疫苗
- 肠道病毒71型疫苗研究进展及质量标准被引量：3
- 2017年
- 肠道病毒71型（enterovirus 71，EV71）是导致手足口病的主要病原体之一，近年来在我国持续流行，对婴幼儿的健康造成了严重威胁。安全有效的疫苗是控制EV71流行的重要手段。全球有多家研究机构正在开展EV71疫苗的相关研究，目前由我国自主研发的3种EV71疫苗已获准上市。同时，为保证疫苗的安全性、有效性和质量可控性，已在研发中建立了合适且规范的质量标准。
- 解庭波陈晓琦徐葛林
- 关键词：肠道病毒A型疫苗
- 肠道病毒71型灭活疫苗分离纯化方法的研究进展
- 2015年
- 近年来,肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染引起的手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)在我国持续流行,已成为我国现阶段重大的公共卫生问题之一。用疫苗防控EV71感染及HFMD的发生是最经济有效的方法。目前,EV71灭活疫苗研发进展较快,多家研究机构已完成临床Ⅲ期试验。为了获得更高纯度、收率及安全性的疫苗制品,病毒收获液的分离纯化技术十分关键。本文结合现阶段EV71灭活疫苗的生产工艺,对疫苗常用分离纯化方法的研究进展作一综述。
- 肖慧明平刚陈晓琦徐葛林
- 关键词：手足口病肠道病毒71型灭活疫苗分离纯化
- 三磷酸腺苷生物发光快速微生物检测法在疫苗中间品无菌试验中的应用被引量：12
- 2010年
- 目的探讨三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)生物发光快速微生物检测法应用于疫苗中间品无菌试验的可行性。方法测定各种培养基与疫苗培养上清液(不含细胞碎片)的本底值,并确定阳性限值;确定测试仪的检测限及线性范围;考察非细菌来源的ATP对测定值的影响;筛选适宜培养基;比较ATP生物发光法与无菌试验检测结果的一致性。结果除199培养基外,其他培养基的RLU本底值均低于205,阳性限值为500;测试仪的最低检测限为10-15mol/L,在10-15～10-6mol/L范围内,线性关系良好;采用增菌法进行试验,可不考虑非细菌来源的ATP的影响;筛选出的适宜培养基为硫乙醇酸盐流体培养基(不含琼脂);ATP生物发光法和无菌试验检测结果的阳性符合率为80%,2种方法各有1个样品另一种方法未检出。结论 ATP生物发光法操作简便,应用范围广泛,可应用于疫苗中间品的无菌试验。
- 魏树源杨京生陈晓琦桂金柱刘瑛球王珍黄宙
- 关键词：三磷酸腺苷无菌试验荧光素
- 柯萨奇病毒A组16型动物模型及其在疫苗研究中的应用被引量：3
- 2015年
- 柯萨奇病毒A组16型（ coxsackievirus A16， CVA16）属于小核糖核酸病毒科的肠道病毒属（Enterovirus），其病毒颗粒呈20面体立体对称的球形结构，直径23～30 nm，由内部的核酸和衣壳蛋白质组成，无脂质包膜［1］。其核酸为单股正链RNA，全长约7410个核苷酸。 RNA 两端为5′-和3′-非编码区（ UTRs），中间的开放阅读框（ ORF）编码一个多聚前体蛋白，经蛋白酶水解为P1、P2和P3三个前体蛋白。 P1进一步酶解为VP1、VP2、VP3和VP4，共同组成病毒衣壳［2］，VP1含病毒主要的中和抗原决定簇［3］。
- 邓咪陈晓琦申硕
- 关键词：柯萨奇病毒A组16型动物模型单股正链RNA蛋白质组成疫苗
- 高效价抗肠道病毒71型兔血清的制备及鉴定被引量：4
- 2014年
- 目的制备高效价的抗肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）兔血清。方法分别用RD细胞和Vero细胞培养EV71,纯化后,将经甲醛灭活和未灭活的EV71抗原分别加入佐剂或不加佐剂,经不同途径（肌肉、皮下、腹腔）免疫家兔,每周采血,分离血清,分别采用ELISA、免疫双扩散、免疫荧光和中和抗体试验检测兔血清抗体效价,并分析不同方法检测兔血清抗体结果的相关性。结果未灭活和灭活的纯化EV71抗原加弗氏佐剂后,经皮下或肌肉途径免疫家兔均可获得高效价的抗EV71兔血清,其中加弗氏佐剂的灭活疫苗经皮下途径免疫获得了最高滴度的中和抗体;当抗血清ELISA效价达到或接近1∶10^8,免疫双扩散效价达到或接近1∶512,抗血清1∶2 000稀释后荧光强度〉荻时,可进行免疫家兔的全血采集;不同方法免疫家兔全血采集的血清中和抗体效价为29 406～1 280 652 U/0.2 ml;免疫双扩散检测与中和抗体和免疫荧光检测结果的相关性较高。结论获得了高效价的抗EV71兔血清,为EV71疫苗抗原的相关检定创造了条件。
- 王继麟陈晓琦吴杰明平刚宰家敏郭长福杨京生段凯
- 关键词：肠道病毒71抗血清酶联免疫吸附测定
- 几种呼吸道合胞病毒检测方法的比较被引量：5
- 2007年
- 目的比较不同从临床样本中快速、敏感特异的检测呼吸道合胞病毒(RSV)的方法,以便早期诊断RSV感染。方法应用不同方法对45例急性下呼吸道感染患儿鼻咽分泌物RSV进行检测,包括病毒分离、直接涂片间接免疫荧光法(IFA)、快速细胞培养法、双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)及链亲和素-生物素法(LSAB)。结果鼻咽分泌物45例中,病毒分离阳性12例(26.7%),直接涂片间接免疫荧光法检测出阳性14例(31.1%),快速细胞培养法阳性20例(44.4%)。双抗体夹心ELISA及LSAB法均仅检出4例阳性,阳性率均为8.9%。结论将直接涂片间接免疫荧光法与快速细胞培养法同时应用于RSV感染的早期诊断,既能及时提供检测结果,又能提高诊断的敏感性,是最适合于RSV感染早期诊断的方法。
- 陈晓琦徐葛林全家妩
- 关键词：呼吸道合胞病毒间接免疫荧光法酶联免疫吸附试验
- 快速细胞培养法在呼吸道合胞病毒感染早期诊断中的应用被引量：2
- 2007年
- 目的建立检测呼吸道合胞病毒(RSV)的快速细胞培养法,并应用于呼吸道合胞病毒感染的早期诊断。方法采用自制的抗RSV的单克隆抗体,经快速细胞培养法和直接涂片法检测165份急性下呼吸道感染的婴幼儿鼻咽分泌物及咽拭子中RSV,并与病毒分离培养比较,再将自制试剂盒与进口呼吸道病毒荧光检测试剂盒检测结果进行比较,探讨其临床实用性。结果57份咽拭标本中,1份快速细胞培养法及直接涂片法检测均为阳性,阳性率1.8%,未分离到病毒。108份鼻咽分泌物中,快速细胞培养法检出21份阳性,阳性率19.4%。直接涂片法检测出14份阳性,阳性率13%,病毒分离培养法检出阳性12份,阳性率11%。快速细胞培养法与其他两种方法相比,阳性检出率差异有显著意义。自制试剂盒与进口试剂盒检出40份鼻咽分泌物标本,阳性率均为35%。结论将直接涂片法与快速细胞培养法同时应用于RSV感染的早期诊断,既能及时提供检测结果,又能提高诊断的敏感性,是对RSV感染进行早期诊断的实用方法。
- 陈晓琦徐葛林全家妩
- 关键词：呼吸道合胞病毒
- 单克隆抗体在呼吸道合胞病毒感染诊断和防治中的应用被引量：3
- 2004年
- 呼吸道合胞病毒 (RSV)是世界范围内婴幼儿下呼吸道感染的重要病原 ,目前尚无成熟疫苗应用于临床。展开对RSV被动免疫的研究显得尤为重要。单克隆抗体成为深入研究和防治RSV感染的有力武器。本文综述了单克隆抗体在RSV感染的诊断。
- 陈晓琦曹涛王继麟徐葛林
- 关键词：呼吸道合胞病毒单克隆抗体免疫防治
- 肠道病毒71型抗原ELISA定量检测方法的建立及应用被引量：9
- 2016年
- 目的建立肠道病毒71型（EV71）抗原ELISA定量检测方法,用于EV71疫苗生产工艺中抗原定量检测。方法选取抗EV71单克隆抗体作为包被抗体,HRP标记抗EV71多克隆抗体作为酶标二抗,建立EV71抗原ELISA定量检测方法。该方法经系统验证后,应用于定量检测2BS及Vero细胞基质EV71疫苗生产工艺过程样品的抗原含量。结果验证结果显示,该方法的线性范围为3.125~50.000 U/m L,样品回收率为92.0%~110.0%,变异系数小于8.8%;孵育时间及温度在一定范围内偏差的样品回收率为100.8%~113.8%;检测其他肠道病毒中抗原其A值均小于cut-off值;试剂于37℃孵育3 d后的检测样品回收率为101.4%~112.4%;2BS及Vero细胞基质EV71疫苗生产工艺过程样品的适用性检测中,抗原回收率为92.1%~114.9%。结论建立并验证EV71抗原ELISA定量检测方法,其准确度、精密度、耐用性均优良,特异性强、稳定性好,适用于不同细胞基质的EV71疫苗及多价手足口病疫苗生产工艺过程的质量控制。
- 陈晓琦王继麟季雅琦郭长福杨明游磊叶程肖慧明平刚张海峰李月影王泽鋆李秀玲申硕
- 关键词：肠道病毒71型抗原酶联免疫吸附试验手足口病
