陈湘红
- 作品数：1 被引量：6H指数：1
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 酶联免疫吸附试验检测HCV NS3-4A蛋白酶活性被引量：6
- 2000年
- 目的 建立一种检测丙型肝炎病毒 (HCV) NS3- 4A丝氨酸蛋白酶的酶联免疫吸附试验 (EL ISA)方法 ,用于筛选 HCV蛋白酶抑制剂。方法 将质粒 p MAL- c2 / NS3- 4A转化到大肠杆菌 K1 2 TB1 中 ,经 IPTG诱导表达 ,亲和层析柱纯化后得到麦芽糖结合的 NS3/ NS3- 4A融合蛋白 ,用 Western blot分析其免疫学活性 ,并以酶联免疫吸附试验检测其生物学活性。结果 SDS- PAGE电泳分析并用考马斯亮蓝染色 ,显示相对分子质量 112 0 0 0和116 0 0 0处有麦芽糖结合的 NS3及 NS3- 4A融合蛋白带出现 ;Western blot分析表明 ,表达的产物可与抗 NS3蛋白的单克隆抗体发生阳性反应。EL ISA证实 HCV NS3- 4A蛋白酶能使特异底物裂解。正交实验获得 EL ISA的最佳实验条件 ,其 P/ N值为 3.6 3,批内和批间变异系数 (CV)分别为 4.16 %和 7.5 2 %。此方法测定 1,4萘醌对 HCV蛋白酶活性 5 0 %抑制浓度 (IC5 0 )为 8.36 μm ol/ L。结论 建立的 EL ISA方法 ,用于测定 HCV蛋白酶活性 ,具有简便、快速、重复性好等特点 ,为以 HCV NS3- 4A蛋白酶为靶酶的抑制剂筛选及抗 HCV药物的研究奠定了基础。
- 陈湘红郭巨涛陈鸿珊王琳
- 关键词：丙型肝炎病毒ELISA
