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Crk基因shRNA质粒的构建及其在肝纤维化中的作用被引量：1: 2014年; 目的:构建靶向信号接头蛋白Crk的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的真核表达载体质粒,研究其对肝星状细胞株LX-2功能的影响.方法:根据Crk mRNA序列进行设计并合成shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并连接入plko载体.包装Crk慢病毒,感染人肝星状细胞株LX-2.研究其对LX-2细胞增殖、迁移和活化功能的影响.结果:定量PCR和Western blot检测结果提示成功构建了针对Crk特异性shRNA真核表达质粒,shCrk组的Crk表达明显低于对照组.干扰Crk基因后,LX-2细胞的活化、迁移能力减弱;而细胞增殖没有受到影响.结论:LX-2中成功构建Crk基因的shRNA真核表达载体;下调Crk基因后能够抑制LX-2细胞的活化和迁移.; 胡江峰陈超齐峰刘婷婷刘保海朱樑; 关键词：短发夹RNA 肝星状细胞肝纤维化

压力对肝星状细胞迁移能力的影响: <正>背景与目的:肝星状细胞(HSC)位于肝板与肝窦内皮细胞之间的Disse间隙内,并通过肝窦内皮细胞'窗口'与肝窦相通。在肝纤维化发展过程中,Disse间隙内压力升高,HSC所受压力增高,胞外压力环境的变化有可能调节H...; 张宗棨吴汉军余帮陈超吴诚唐丹朱樑; 文献传递

一种改良的肝星状细胞分离方法被引量：1: 2011年; 目的改良肝星状细胞(HSC)的分离方法,为深入研究肝纤维化的发生机制奠定基础。方法采用Ⅳ型胶原酶和链酶蛋白酶原位消化肝脏,在1.040～1.060 g/mL范围内多重多次密度梯度离心分离HSC,台盼蓝染色测定细胞存活率,328 nm紫外光激发HSC自发蓝绿色荧光法和Desmin细胞免疫荧光法鉴定HSC及检测HSC纯度。Desmin和α-SMA细胞免疫荧光方法鉴定HSC静息和活化状态。结果每只大鼠肝脏HSC得率为(3～5)×107个,HSC存活率在95%以上,纯度在90%以上,体外培养14 d后活化的HSC纯度几乎达100%。结论在1.040～1.060 g/mL密度范围内采用多重多次密度梯度离心方法,避免了HSC分离过程中因密度配比误差及HSC自身密度相对不均一性所导致的细胞流失,建立了一种改良的肝星状细胞分离方法,HSC得率和纯度更加稳定,达到国外文献报道水平。; 陈超陈宁覃霞朱樑; 关键词：肝星状细胞细胞分离肝纤维化

miR-214通过抑制TOM1表达促进肝星状细胞活化和迁移被引量：4: 2013年; 背景:肝星状细胞(HSCs)持续激活所致的细胞外基质过度沉积是肝纤维化发生、发展的关键环节。MicroRNAs(miRNAs)是一类重要的生物调节分子,为HSC的分化、增殖、凋亡、脂肪蓄积以及胶原生成所必须。既往对HSCmiRNAs表达谱的分析显示,miR-214在HSC活化过程中表达显著增高。目的:探讨miR-214在HSC中的生物学功能及其可能机制。方法:以real time PCR检测静息和完全活化状态大鼠HSC的miR-214 mRNA表达;应用miR-214封闭慢病毒载体感染HSC以敲除miR-214表达,以Transwell细胞迁移实验、蛋白质印迹法检测感染前后HSC迁移、活化能力的变化;应用荧光质粒报告系统对TargetScan(http://www.targetscan.org/)预测的miR-214靶基因进行验证。结果:miR-214 mRNA在HSC活化过程中表达显著增高(P<0.01)。miR-214敲除组HSC Transwell小室迁移细胞数较阴性对照组显著减少(P<0.001),HSC活化标记物α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白表达显著下调(P<0.01)。预测显示TOM1为miR-214的靶基因,并得到荧光质粒报告系统证实;miR-214敲除组HSC TOM1蛋白表达显著上调(P<0.05)。结论:miR-214参与促进HSC的活化和迁移,进而促进肝纤维化进程;miR-214在HSC中的生物学功能至少部分是通过抑制TOM1表达实现的。; 公绪华陈超朱樑; 关键词：肝星状细胞微RNAS 纤维化

MOESIN(膜突蛋白)在胆囊癌中的表达和肿瘤生物学行为关系的研究: 目的:观察MOESIN(膜突蛋白)在胆囊癌组织中的表达情况,探讨其与肿瘤生物学行为的关系. 方法:采用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测59例胆囊癌组织标本、7例癌旁组织标本及6例慢性胆囊炎组织标本中MOESI...; 黄海林陈超周东曾朋胡志前姚厚山; 关键词：胆囊癌生物学行为正相关性; 文献传递

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陈超