高歌
- 作品数：28 被引量：21H指数：3
- 供职机构：首都医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 过表达Alpha-突触核蛋白激活mTORC1/S6K1通路负向调节Ⅰ型胰岛素受体底物
- ＜正＞目前,大量流行病学资料表明,帕金森病（PD）与糖尿病密切相关。文献表明50%-80%的帕金森病患者存在糖耐量异常或者胰岛素抵抗（IR）,糖尿病是PD潜在的危险因素。本研究利用过表达alpha-突触核蛋白（α-syn...
- 陈敏高姗姗高歌杨慧
- 文献传递
- 重复性低氧增高小鼠脑组织内CREB的磷酸化水平
- 2006年
- 目的：初步探讨cAMP反应元件结合蛋白（C砌强）在小鼠脑低氧预适应形成过程中的作用。方法：用我室已建立的小鼠整体低氧预适应模型，应用SDS．PAGE和Westernblot等技术，并结合Gel Doc凝胶成像系统，定量检测小鼠脑组织内CREB的磷酸化水平和蛋白表达量。结果：①随低氧暴露次数（H1．H4）的增加，小鼠海马组织内CREB的磷酸化水平（激活程度）明显增高（＊p＜0．05；n=7）；大脑皮层内CREB的磷酸化水平也随低氧暴露次数（H1．H4）的增加而明显增高，且在H1．H4组的变化具有显著的统计学意义（＊p＜O．05，n=7）。②随低氧暴露次数（H1．H4）的增加，CREB的蛋白表达量无论在小鼠海马还是皮层组织内均无明显改变。结论：CREB磷酸化水平的增高（激活）可能参与了脑低氧预适应的形成过程。
- 高亚南高歌龙彩瑕牛晨晨徐群渊李俊发
- 关键词：脑低氧预适应CREB磷酸化
- 一种丝氨酸129位磷酸化alpha‑突触核蛋白聚集体的ELISA检测方法
- 本发明涉及一种丝氨酸129位磷酸化alpha‑突触核蛋白聚集体的ELISA检测方法，所述方法包括使用单克隆抗体C140S，和多克隆抗体‑SN16进行夹心法ELISA，以测定人血液样本中的丝氨酸129位磷酸化alpha‑突...
- 杨慧段春礼邢昊高歌
- 重复性低氧对小鼠脑内CREB磷酸化及蛋白表达的影响
- ＜正＞目的:cAMP反应元件结合蛋白（CREB）作为核转录因子家族中的一员,是核内的第三信使, 在神经系统应激性损伤（如缺氧、紫外线、高渗透压等）中,活化（磷酸化）的CREB可直接或间接激活相关基因的转录,进而表达某些蛋...
- 高亚南高歌龙彩瑕李俊发
- 关键词：脑低氧预适应磷酸化蛋白表达量
- 文献传递
- 低氧预适应升高小鼠脑内JNK磷酸化水平和蛋白表达被引量：4
- 2006年
- 目的探讨C-JUN氨基末端激酶或应激激活蛋白激酶（JNKs／SAPKs）在脑低氧预适应发生、发展过程中的作用。方法将小鼠整体低氧预适应模型中BALB／C小鼠随机分为正常对照（H0）、早期（H1-H4组）和延迟性（H5-H6组）低氧预适应等7组。应用SDS-PAGE和Western bolt方法，并结合GelDoc凝胶成像系统，半定量检测大脑皮层和海马组织内JNK1和JNK2／3的磷酸化水平及其蛋白表达量的变化。结果在早期低氧预适应形成过程中，随低氧次数的增加，小鼠大脑皮层和海马组织内JNK1的磷酸化水平（未检测到磷酸化的JNK2／3）逐渐升高，且以皮层内（H1和H2组）和海马组织内（H1—H4组）的增高明显（P〈0．05，n=6）；而JNK1和JNK2／3只在延迟性低氧预适应（H5-H6组）发展过程中明显上调（P〈0．05，n=6）。结论JNK1的激活以及JNK1和JNK2／3蛋白表达量的增高可能分别参与了脑早期低氧预适应和晚期延迟性低氧预适应的发生和发展。
- 高歌龙彩瑕高亚南牛晨晨徐群渊李俊发
- 关键词：脑低氧预适应JNK蛋白表达量
- Thy1-αSYN转基因小鼠出现代谢紊乱和胰岛形态及功能的改变
- 2021年
- 帕金森病(PD)是第二大神经退行性疾病。PD的发病机制仍然不明确,普遍认为α-突触核蛋白(α-synuclein)的聚集和传播引起的神经损伤、线粒体功能障碍、炎症和氧化应激,自噬功能障碍等在PD的发生发展中发挥作用。越来越多的研究认为,代谢紊乱也是PD的发病机制之一。我们检测了过表达α-突触核蛋白是否能引起小鼠代谢紊乱以及可能的机制。研究分为Thy1-αSYN转基因小鼠组(TG)及同窝对照野生小鼠组(WT),分别检测它们在转棒仪上的停留时间,体重情况,血浆中胰岛素含量,小鼠糖耐量及胰岛素耐量等外周代谢情况。使用苏木精-伊红染色法对两组小鼠胰岛的形态进行观察,分离小鼠胰岛并使用葡萄糖刺激胰岛素分泌检测胰岛素分泌功能。结果显示,12月龄的TG组小鼠与WT组相比运动耐力下降23.1%(P<0.05),体重增加7%(P<0.01),糖耐量降低(P<0.05),胰岛素耐量降低(P<0.05),外周血中胰岛素含量降低20%(P<0.05)。TG组小鼠胰腺内α-突触核蛋白水平较WT组增加1.32倍(P<0.05),TG组小鼠的胰岛面积变小(P<0.05),胰岛个数减少(P<0.01),胰岛素分泌功能下降(P<0.01)。我们的研究提示,α-突触核蛋白在PD中的作用不局限于对多巴胺能神经元的损伤,它能影响代谢及外周器官的形态及功能,这为PD的发病机制提供新的理论依据。
- 高歌卢勇泉刘伟进杨汝宁张启迪杨慧
- 关键词：Α-突触核蛋白代谢紊乱糖耐量胰岛
- PINK1减轻α-突触核蛋白引起的线粒体损伤被引量：1
- 2016年
- 目的证明PINK1对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)引起的线粒体损伤的影响。方法将携带人源PINK1和α-syn基因的质粒共转染MN9D多巴胺能神经细胞,流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)、线粒体渗透性转运孔(mitochondrial permeability pore,mPTP)的开放情况及线粒体膜电势(ΔΨm)变化;MTT和乳酸脱氢酶法检测细胞活力及细胞损伤情况。结果 PINK1减少α-syn引起的ROS的生成、线粒体膜孔的开放及线粒体膜电势降低,并减轻α-syn所致细胞活力下降及和细胞损伤。结论 PINK1可以减轻α-syn引起的线粒体损伤。
- 王雪申甲梅高歌段春礼鲁玲玲杨慧
- 关键词：PINK1Α-突触核蛋白线粒体
- α-突触核蛋白通过氨基端引起MN9D细胞线粒体膜损伤被引量：1
- 2015年
- 目的在MN9D细胞中,探讨α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)氨基端(α-syn/N),NAC区,及C端(α-syn/C)对细胞及线粒体的作用。方法将细胞分为未处理组(control),空载体组(Myc),α-syn过表达组(α-syn),α-syn/N过表达组(α-syn/N),α-syn/del N过表达组(α-syn/del N),α-syn/NAC过表达组(α-syn/NAC),α-syn/C过表达组(α-syn/C),α-syn/del C过表达组(α-syn/del C)并瞬时转染α-syn各结构域48 h。用MTT和LDH法检测过表达α-syn各个结构域对细胞活力及LDH释放情况的影响,通过共聚焦显微镜及流式细胞仪检测细胞内ROS水平,线粒体渗透性转运孔(m PTP)的开放情况及线粒体膜电势(ΔΨm)变化,用免疫荧光染色检测线粒体形态。结果过表达α-syn,α-syn/N,α-syn/del C能使细胞活力下降(P<0.01),LDH的释放量明显增加(P<0.01),细胞内活性氧(ROS)水平增加(P<0.001),线粒体渗透性转运孔(m PTP)异常开放增加(P<0.01),线粒体膜电势下降(P<0.01)。并且过表达α-syn/N后,55%的线粒体出现气球样改变。结论α-syn通过其氨基端引起线粒体膜损伤。
- 高歌申甲梅段春礼王雪鲁玲玲张建亮杨慧
- 关键词：Α-突触核蛋白ROS
- 129位丝氨酸磷酸化α-突触核蛋白DELFIA检测方法的建立及初步应用
- 2021年
- 目的建立解离-增强镧系荧光免疫分析(dissociation enhanced lanthanide fluorescent immunoassay,DELFIA)检测129位丝氨酸磷酸化α-突触核蛋白的方法及初步应用。方法使用体外蛋白重组技术纯化得到人源α-syn蛋白单体(α-syn),用Polo样激酶催化α-syn获得磷酸化α-syn单体(phosphorylatedα-syn monomer,p-α-syn),用4-氧代壬烯醛制备α-syn聚集体(aggregates ofα-syn,OW)及磷酸化α-syn聚集体(aggregates of p-α-syn,OP)。使用Western blotting法和间接ELISA方法验证本实验室前期制备的识别α-syn蛋白N端的多克隆抗体SN16和识别129位丝氨酸磷酸化α-syn蛋白的单克隆抗体C140S。使用SN16作为捕获抗体,C140S作为检测抗体的双抗夹心DELFIA法建立检测OP的标准曲线,并检测Thy 1-α-SYN转基因小鼠血浆内OP的变化。结果考马斯亮蓝染色和Western blotting法检测结果显示体外纯化的人源α-syn蛋白单体(17000)纯度高,并通过催化获得了p-α-syn、OW和OP纯蛋白,均可用作建立标准曲线的标准抗原。Western blotting和酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)结果显示SN16对α-syn、p-α-syn、OW、OP这4种形式的蛋白均可识别,C140S可以识别p-α-syn和OP,说明SN16和C140S可以用作双抗夹心法的配对抗体。间接DELFIA检测结果显示C140S对OP的识别效率更好。双抗夹心DELFIA检测结果显示,SN16-C140S作为配对抗体检测标准抗原的范围为:0.625~20 ng/mL,并建立了检测OP的标准曲线。Wt及Tg组小鼠血浆中OP在12月龄均较6月龄有所增加(P<0.001),Tg组6月龄小鼠血浆中OP显著高于同月龄Wt组(P<0.001),Tg组12月龄小鼠血浆OP较Wt组有增高的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论本文建立的SN16-C140S配对的双抗夹心DELFIA体系可以检测Thy1-α-SYN转基因小鼠血浆中聚集的磷酸化α-syn变化情况。
- 高歌查旭刘伟进杨慧
- 关键词：帕金森病Α-突触核蛋白
- 重复性低氧增高小鼠脑组织内CREB的磷酸化水平
- 2006年
- 为探讨cAMP反应元件结合蛋白(CREB)在小鼠脑低氧预适应形成过程中的作用,本研究应用Westernblot技术结合GelDoc凝胶成像系统,半定量检测了整体低氧预适应模型小鼠脑组织内CREB的磷酸化水平和非磷酸化水平的表达水平。结果显示:(1)随低氧暴露次数(H1H4)的增加,小鼠海马组织内CREB的磷酸化水平(激活程度)明显增高(P<0.05;n=7);同样,大脑皮层内CREB的磷酸化水平也随低氧暴露次数(H1H4)的增加而明显增高(P<0.05,n=7);(2)随低氧暴露次数(H1H4)的增加,CREB的蛋白表达量无论在小鼠海马组织还是皮层组织内均无明显变化。以上结果提示CREB磷酸化水平的增高(激活)可能参与了脑低氧预适应的形成过程。
- 高亚南高歌龙彩瑕牛晨晨徐群渊李俊发
- 关键词：脑低氧预适应CREB磷酸化大脑皮层
