高畅
- 作品数：5 被引量：43H指数：2
- 供职机构：吉林大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学医药卫生更多>>
- Cyclin A-Cdk2对B细胞成熟因子的体外磷酸化作用
- 2008年
- 目的原核表达并纯化仅含BH3结构域的细胞凋亡调控蛋白BMF,并进行CyclinA-Cdk2特异性底物的体外磷酸化检测。方法从HeLa细胞中扩增人源BMF基因,克隆至pGEX-6P-1表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Glutathione Sepharose 4B凝胶柱亲和层析纯化。以纯化的融合蛋白GST-BMF作为底物,免疫共沉淀得到的CyclinA-Cdk2作为酶源,并以Cdk2的已知底物HistoneH1作为阳性对照,进行体外磷酸化试验。结果BMF基因的原核表达载体构建正确,表达的融合蛋白GST-BMF约占菌体总蛋白的40%,纯化后纯度约为90%。在体外磷酸化试验中,未出现与目的蛋白GST-BMF相对分子质量相近的放射自显影带。结论BMF蛋白在无细胞体系中不能被CyclinA-Cdk2磷酸化。
- 李清何侃高畅李晶华金英花
- 关键词：凋亡CYCLIN
- 莲藕多糖的提取及生物活性的研究被引量：14
- 2007年
- 对莲藕水溶性多糖的提取工艺及体外生物活性进行了探索。采用正交实验设计,得到了莲藕多糖的最佳提取条件为料液比为16∶、浸提温度为90℃、浸提时间为6h,采用体外实验研究莲藕多糖对超氧阴离子、羟自由基清除作用以及对H2O2诱导的红细胞氧化溶血的抑制作用。结果表明:莲藕多糖对超氧阴离子的清除作用较弱,对羟自由基具有很强的清除作用,并能有效抑制H2O2诱导的红细胞氧化溶血。
- 王瑜高畅姜丽艳张博珣梁小璇佟立全孟庆繁
- 关键词：生物活性
- 促凋亡蛋白BID多克隆抗体的制备与鉴定
- 2008年
- 目的制备抗BID的多克隆抗体,用于检测凋亡信号转导过程中BID蛋白的表达。方法采用PCR技术合成编码BID特异性肽段的基因,构建GST融合基因表达载体,在E.coli BL21中诱导表达GST-BID多肽的融合蛋白,经Glutathione Sepharose 4B纯化后免疫家兔,免疫血清经纯化后,得到抗BID的多克隆抗体,经Western blot鉴定其特异性。结果通过PCR扩增获得了BID肽段的编码基因;pGEX-6P-1-BID多肽重组质粒经酶切鉴定及测序证明构建正确;在E.coli BL21中表达了GST-BID多肽融合蛋白;纯化后蛋白纯度达95%;制备的抗BID多克隆抗体能够特异地识别BID蛋白。结论所制备的抗BID多克隆抗体可特异性检测BID蛋白。
- 陈越高畅陈勇佟立全孔维金英花
- 关键词：促凋亡蛋白多克隆抗体特异性
- 芋头多糖的提取及生物活性的研究被引量：29
- 2006年
- 对芋头水溶性多糖的提取工艺进行了探索,通过以料液比、提取温度、提取时间为3个因素,进行了L9(33)正交实验。采用体外实验研究经过处理的芋头多糖对超氧阴离子、羟自由基清除作用以及对H2O2诱导的红细胞氧化溶血的抑制作用。结果表明,料液比显著影响水溶性多糖的提取率,最佳提取工艺为料液比1∶6、提取温度70℃,提取时间6h。芋头多糖对超氧阴离子的清除作用较弱,对羟自由基具有很强的清除作用,芋头多糖能够抑制H2O2诱导的红细胞氧化溶血。
- 王瑜高畅张娜梁小璇佟立全陈智贤孟庆繁
- 关键词：生物活性
- 人Bik基因的克隆、表达与纯化
- 2008年
- 目的克隆人Bik基因,并进行表达及纯化。方法用PCR方法从HeLa细胞cDNA文库中扩增Bik基因,克隆至pGEX-6P-1表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达产物进行GST亲和层析纯化。结果PCR扩增得到483bp的DNA片段,重组质粒pGEX-6p-1-Bik经酶切鉴定和测序分析,表明构建正确。表达的重组蛋白占菌体总蛋白的38%,纯化后蛋白纯度达96%。结论已成功克隆并利用原核表达系统表达了人Bik基因,为进一步研究Bik蛋白结构和功能奠定了基础。
- 李晶华何侃佟立全李杨高畅孔维金英花
- 关键词：克隆原核表达纯化
