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人组织型纤溶酶原激活剂牛乳腺生物反应器的研究被引量：2: 2004年; 目的构建组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)乳腺定位表达载体,使其在牛乳汁中高效表达,从而建立牛乳腺生物反应器。方法RT-TD-PCR法克隆目的基因,通过酶切、连接、分离、纯化等方法构建含t-PA-cDAN的乳腺定位表达载体;采用显微注射法和乳腺注射法将融合基因转入小鼠的受精卵和小鼠及牛的乳腺组织中。结果显微注射法和乳腺注射法转基因后,t-PA可在小鼠和牛的乳汁中表达。结论所构建的乳腺定位表达载体可有效地使t-PA基因在小鼠和牛乳汁中表达,t-PA基因的表达不受转基因方法的影响,但t-PA在牛乳汁中的表达量明显高于小鼠的表达量,提示不同动物的乳蛋白调控系统有一定的差异,可能受着不同的因素或调控系统的影响。; 安靓李振林黄伟民黄吴键李进; 关键词：组织型纤溶酶原激活剂乳腺生物反应器转基因动物

适合低品质精子的冷冻方法开发及临床应用评价: 目前传统的慢速冷冻技术广泛应用于精子库和辅助生殖助孕中,它在保存大体积的正常精子样品(0.25 mL～1.0 mL)中有满意的复苏效率,精子膜功能和顶体功能保存较好。近年来辅助生殖实验室技术和男科手术技术的进步给严重生育...; 黄吴键; 关键词：冷冻超快速安全性

氨基酸浓度对昆明小鼠胚胎体外发育的影响(英文)被引量：4: 2005年; 目的探讨培养液中氨基酸成分对植入前昆明小白鼠胚胎发育的影响,摸索植入前胚胎体外培养氨基酸的最佳浓度。方法从超排昆明小鼠输卵管中取出的630枚受精卵均分为7组,分别在经添加不同浓度Eagle's氨基酸的去牛血清白蛋白KSOM培养液(mKSOM、mKSOM+1/16AA、mKSOM+1/8AA、mKSOM+1/4AA、mKSOM+1/2AA、mKSOM+ AA、mKSOM+2AA)中培养,对比观察各组胚胎体外发育的过程。用卡方检验分析添加各浓度氨基酸的培养液培养效率的差别,并将8细胞发育率和囊胚发育率分别与相应的氨基酸浓度进行曲线拟合分析。结果与未添加氨基酸组对比,添加氨基酸组胚胎发育率高,8细胞胚和囊胚的形成率与培养液中氨基酸的浓度关系均符合三次模型,在氨基酸为1/2浓度时8细胞胚和囊胚的形成率均达到最高。结论氨基酸对胚胎的体外发育有促进作用,但含有高浓度氨基酸的培养液培养效果反而有所下降,可能是由于高浓度的氨基酸影响胚胎的代谢和渗透压的改变,且氨基酸分解及胚胎代谢所产生的铵对胚胎有毒性作用。; 邓星王爽黄吴键刘求真谢卫兵张庆凌方唯意刘腾飞韩春杜莎莎吴丽莎丁彦青姚开泰; 关键词：小鼠植入前胚胎发育氨基酸

KSOM培养基营养成分调整对小鼠植入前期胚体外发育的影响被引量：8: 2005年; 目的囊胚发育率低和发育迟缓是继“2-细胞阻滞”解决后小鼠胚胎体外培养中面临的两大问题。本实验通过对KSOM培养基营养成分的调整,观察对胚胎发育的影响,优化培养基的构成。方法采用微滴培养法培养昆明小鼠单细胞胚胎,以胚胎发育到囊胚的比例、孵出比例以及注射hCG后120 h囊胚全细胞数作为判断培养效果的标准,比较KSOM在葡萄糖、牛血清白蛋白、氨基酸3种营养物质不同浓度下对小鼠植入前胚体外培养的效果。结果在未加氨基酸时葡萄糖、牛血清白蛋白的变化对注射hCG后120 h囊胚形成率、囊胚全细胞数影响不大,添加氨基酸后,囊胚发育速度提高,部分孵出和全部孵出比例提高,囊胚全细胞数增大明显,且葡萄糖、牛血清白蛋白与氨基酸对囊胚的发育有共同促进的作用。结论通过添加适量的氨基酸、葡萄糖、BSA改良KSOM培养基能很好的促进小鼠植入前胚体外发育。; 黄吴键袁进邓星安靓; 关键词：植入前胚胎营养成分

小鼠精子核内转染技术的建立及其机理的研究: 转基因动物的制作方法有五大类,十几种方案,但是长久以来一直不甚理想,目前仍然以显微注射法为主。由于显微注射法劳动强度大、效率低、周期长、耗费多,科学界一直在寻找替代方案。精子载体法就是以精子为载体,利用精子与卵子结合的过...; 黄吴键; 关键词：精子载体法碘化丙啶激光共聚焦

阳离子多聚物PEI结合电穿孔实现小鼠精子的核内转染的研究: 核内转染效率不高是制约精子载体法成功率的主要因素之一,本实验联合运用阳离子多聚物PEI和方波电穿孔两种不同机制的转染手段,以期克服精子难转染的问题.采用FITC标记的线性阳离子多聚物JetPEI-FluoF与适量的质粒p...; 黄吴键袁进李进安靓; 关键词：电穿孔 PEI 小鼠精子精子载体法; 文献传递

利用雄性生殖细胞建立转基因动物被引量：4: 2004年; 追溯了用雄性生殖细胞建立转基因动物的发展历程 ,系统阐述了本领域理论和实践的最新进展 ,围绕方法学逐渐改进和完善的过程 ,从利用精子和精原干细胞携带外源DNA两个方向展开 ,分析和评价了DNA转移方法与精子载体法结合、胞浆内单精子注射、蛋白连接的精子介导的基因转移、输精管注射法以及曲细精管显微注射法和精原干细胞移植法 6种实验设计方法。; 黄吴键安靓; 关键词：生殖细胞转基因动物精子载体法基因转移

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黄吴键