黄天谊
- 作品数：22 被引量：57H指数：6
- 供职机构：贵州省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科学研究与技术开发计划卫生部科学研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 间日疟原虫MSP-1和CSP基因遗传多样性的分析被引量：6
- 2005年
- 目的比较间日疟原虫两种主要分子标志(MSP1和CSP)的遗传多样性。方法分别用MSP1和CSP基因分型方法鉴定间日疟原虫现场分离株,并进行基因多态性比较和分析。结果共检测32份海南省现场确诊的间日疟病人血样,MSP1等位基因型混合感染率为18.75%,平均克隆数1.16;CSP基因型混合感染率为35.29%,平均克隆数为1.47。如果同时考虑两种基因型,混合感染率则为50.00%。空间对应分析发现,热带族与Sal1型关系密切,PvⅡ型与重组Ⅲ型分布靠近,其他基因型则较分散。结论同时用MSP1和CSP两种分子标志检测间日疟原虫,其基因型混合感染率高于用单一标志检测,两种标志检测结果存在一定对应关系。
- 张山鹰许龙善黄天谊谢汉国黄江宏陆惠民
- 关键词：裂殖子表面蛋白1环子孢子蛋白
- 快速套式PCR疟疾分子诊断试剂盒及检测方法
- 本发明公开了一种快速套式PCR疟疾分子诊断试剂盒及检测方法，包括具有自我封闭功能的新型引物，选用疟原虫线粒体基因组内的细胞色素氧化酶基因(cox1)作靶基因，在疟原虫属、种特异位点设计双向半套式引物四个，组合成一对属特异...
- 黄天谊郭传坤黎学铭
- 文献传递
- 套式/多重PCR诊断疟疾的敏感性、特异性和稳定性初探被引量：8
- 2007年
- 目的提高标签引物-套式/多重PCR诊断疟疾的敏感性、特异性与稳定性。方法用滤纸法采集非疟疾发热病人血样30份及其他传染病(感冒,流感,伤寒,肝炎等)患者血样20份;抽取恶性疟和间日疟各1例患者血4m1,进行系列稀释制备不同疟原虫含量的感染血样;健康者血样作对照。用热裂解法制备DNA模板,用线粒体细胞色素氧化酶基因作为靶基因,应用相关软件和网络资源(PrimerPremier5.0,PUBMED,NCBI-BLAST和Mfold服务器)设计和优化标签引物-套式/多重PCR,并用于检测所采集制备的各种血样。结果间日疟与恶性疟患者血系列稀释为含1000、100、10和1个虫/μl后经标签引物-套式/多重PCR检测,恶性疟和间日疟患者各稀释含虫血样分别在611bp和255bp出现1条带,能检测到原虫密度均为1个虫/μl血;非疟疾发热病人血样30份及其他传染病患者血样均为阴性;健康者血样未出现扩增条带,每种血样反复测试3次以上均获得同样结果。结论经优化的标签引物-套式/多重PCR在疟疾诊断中具有较高的敏感性、特异性和稳定性。
- 郭传坤黎学铭李锦辉毛玮林珍杜进发黄天谊
- 关键词：恶性疟原虫间日疟原虫疟疾诊断
- 弓形虫RH株表面抗原P30基因重组质粒的构建及鉴定
- 2003年
- 目的 构建弓形虫RH株表面抗原P30基因的重组表达质粒,为下一步免疫与诊断研究制备高纯度P30重组蛋白奠定基础。方法 自弓形虫RH株感染小鼠腹水中收集速殖子,用酚/氯仿法提取基因组DNA,用PCR法扩增编码P30的基因片段(经电泳切带纯化),定向插入到PQE-30表达质粒中,转化入TG1宿主菌,在含有青霉索的SOB平板上筛选阳性重组子,采用酶切、PCR扩增和DNA序列分析等方法对插入片段进行鉴定。结果 阳性重组质粒PQE30-P30经Sal+HindⅢ双酶切下的插片及PCR扩增产物均与原插入的P30基因片段大小一致为976bp,通过序列测定证实插入片段为编码P30的基因片段。结论 成功构建弓形虫表面抗原P30基因的重组质粒PQE30-P30。
- 刘涛黄雨婷卢丽丹唐丽娜黄天谊
- 关键词：弓形虫表面抗原质粒
- 标签引物-套式/多重PCR检测恶性疟原虫和间日疟原虫的研究被引量：11
- 2005年
- 目的建立简便、灵敏、低本底、可同时检测恶性疟原虫和间日疟原虫的套式/多重聚合酶链反应(PCR)系统。方法应用标签引物扩增技术、PrimerPremier5.0软件、美国生物信息中心(NCBI-BLAST)网络资源和矩阵试验法优化套式/多重PCR,检测疟疾患者滤纸血样并与镜检结果进行比较。结果新建立的标签引物套式/多重PCR,检测模拟现场滤纸血样的敏感性为恶性疟原虫1～2个虫/μl血,间日疟原虫5～10个虫/μl血。检测71份现场采集的镜检疟原虫阳性滤纸血样(恶性疟24份和间日疟47份)的结果与镜检结果的符合率分别为87.5%和100%。结论通过标签引物扩增技术优化的套式/多重PCR系统,适用于检测现场采集的滤纸血样,其检出低原虫血症的敏感性和鉴定虫种的准确性均优于镜检法,是很有潜力的疟疾诊断技术。
- 黄天谊王世海黎学铭郭传坤徐建军唐丽娜卢丽丹
- 关键词：恶性疟原虫聚合酶链反应疟疾诊断
- 基于线粒体细胞色素氧化酶亚单位3基因鉴定贵州省首例输入性卵形疟病例被引量：2
- 2019年
- 提取贵州省首例镜检诊断为输入性卵形疟病例的血样DNA,以疟原虫的核糖体RNA小亚基(SSU r RNA)和线粒体细胞色素氧化酶亚单位3基因(cox3)为靶标,分别设计属、种特异性引物及种特异性引物, PCR扩增、测序,比较2种引物对疟原虫种类PCR鉴定的特异性。以卵形疟原虫wallikeri亚种参考序列(GenBank登录号:HQ712053.1)和curtisi亚种参考序列(GenBank登录号:HQ712052.1)为模板,应用DNAMAN V6软件对扩增序列进行Blast比对。利用Mega 7.0.26软件,采用邻接法,基于疟原虫线粒体cox3基因DNA序列构建系统进化树。PCR结果显示,基于疟原虫SSU r RNA属、种特异性引物扩增,仅获得1 200 bp的属特异性条带,未出现种特异性条带。基于疟原虫cox3种特异性引物扩增,可获得880 bp的目的条带。Blast比对结果显示,PCR扩增获得的cox3基因序列与卵形疟原虫wallikeri亚种和curtisi亚种的序列一致度为99.4%和97.4%。
- 黄雨婷黄天谊卢丽丹佘丹娅李世军
- 关键词：PCR鉴定
- 单管单轮多重PCR检测4种疟原虫混合血样被引量：13
- 2015年
- 目的建立一种可同时检测4种疟原虫单一及混合感染的单管单轮多重PCR技术。方法在快速巢式PCR的基础上,设计折叠引物,优化PCR反应试剂的主要组分浓度及各条引物的退火温度,建立折叠引物多重PCR法（FP-PCR）。利用优化后的FP-PCR法,对间日疟原虫（Plasmodium vivax）、恶性疟原虫（P.falciparum）、卵形疟原虫（P.ovale,包括wallikeri亚种）和三日疟原虫（P.malariae）的单一及混合疟原虫DNA模板进行检测,分析该方法的敏感性和特异性。结果在7次重复实验中,4种疟原虫单一感染检出的最低浓度均接近1个/μl血。此外,在检测2～4种原虫以高、低密度相差100倍的模拟混合感染的滤纸血样中,FP-PCR法正确检出每个组合的所有虫种的成功率为68%（57/84）。在10份健康人滤纸血样中,FP-PCR法除产生少量二聚体外无任何扩增条带。结论 FP-PCR法仅需单管单轮扩增即可同时检测4种人疟原虫单一或混合感染,为疟疾的监测和筛查提供了简便、可靠的诊断方法。
- 黄雨婷佘丹娅卢丽丹张念恒黄天谊
- 关键词：多重PCR恶性疟原虫疟疾诊断
- 贵州省首例输入性卵形疟病例的鉴定
- 2020年
- 目的对1例输入性疟疾病例进行鉴定。方法采集病例外周血制作滤纸血样和血涂片。血涂片染色后镜检,同时进行疟疾快速诊断试剂盒(RDT)检测,滤纸血样进行PCR,PCR扩增片段测序后在GenBank中进行Blast分析。结果RDT检测提示非恶性疟的疟原虫阳性,血涂片镜检可见卵形疟原虫。PCR扩增出大小为880 bp的卵形疟特异条带,Blast分析显示与卵形疟原虫wallikeri亚种的cox3部分基因序列同源性为99.4%。结论依据RDT、镜检、PCR和序列分析等实验室检测结果,结合其流行病学资料,该例输入性疟疾病例确诊为贵州省首次由境外输入的卵形疟病例,且感染的疟原虫虫种是卵形疟原虫wallikeri亚种。
- 黄雨婷黄天谊卢丽丹佘丹娅
- 关键词：输入性疟疾血涂片镜检巢式PCR
- 套式／多重PCR方法应用于疟疾诊断与监测的初步评价被引量：12
- 2008年
- 目的与镜检法比较评价标签引物-套式/多重PCR(UT-PCR)在疟疾监测中的应用价值。方法在海南、云南省恶性疟和间日疟混合流行区和广西疟疾控制区的疟疾监测中,采集初诊为疟疾或疑似疟疾的发热患者的血片与滤纸血样400份,在双盲条件下比较镜检法与UT-PCR的初检结果,对结果不一致的血片再次镜检复查,同时对其滤纸血样重复PCR2～3次;评估UT-PCR与镜检法的敏感性和特异性。结果400例发热患者血样中,镜检法初检检出疟原虫阳性234例,其中恶性疟125例,间日疟109例;UT-PCR检出疟原虫阳性235例,其中恶性疟124例,间日疟109例;恶性疟和间日疟混合感染2例。两法初检结果一致的血样占92.5%(370/400),其中阴性154例,阳性216例(间日疟117例,恶性疟99例)。复查25份初检结果不一致的血样,包括镜检阴性PCR阳性11例,镜检阳性PCR阴性10例,镜检为恶性疟PCR为间日疟3例,镜检为间日疟而PCR为混合感染1例,其中15份与UT-PCR的初检结果一致,7份"假阳性"原因不明,仅3份为PCR的假阴性。根据复查结果评估PCR的敏感性为99.6%,特异性为98.8%。结论采用更敏感的UT-PCR疟疾诊断方法有助于解决疟疾诊断与鉴别诊断中的疑难问题,提高疟疾监测的质量和效率。
- 郭传坤黎学铭林珍王光泽杨亚明李锦辉蒋智华黄天谊
- 关键词：疟疾诊断间日疟恶性疟
- 折叠引物多重PCR疟疾分子诊断试剂盒及其检测方法
- 本发明公开了一种折叠引物多重PCR疟疾分子诊断试剂盒及其检测方法。所述试剂盒由含镁模板缓冲液及无镁单一组合试剂组成，包含了板DNA制备和折叠引物PCR反应全套试剂。所述折叠引物以疟原虫Cyt b基因作为靶基因，在疟原虫属...
- 黄天谊黄雨婷张念恒佘丹娅
- 文献传递
