龙春兰
- 作品数：45 被引量：94H指数：5
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家临床重点专科建设项目重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程金属学及工艺更多>>
- Piwi互作RNA的筛选及其在儿童肾母细胞瘤组织中的表达被引量：3
- 2020年
- 目的探讨Piwi互作RNA(piRNA)在儿童肾母细胞瘤中的表达及临床意义。方法对Piwi样蛋白2(Piwil2)基因重编程人成纤维细胞所形成的肿瘤样干细胞进行高通量测序,筛选出差异表达piRNA,并利用miRanda软件预测其靶基因,对靶基因进行基因本体(GO)功能分析。采用qRT-PCR检测差异表达piRNA及其靶基因在34例肾母细胞瘤患儿肿瘤组织及癌旁正常肾组织标本中的表达,并分析差异表达piRNA及其靶基因与肾母细胞瘤临床病理特征的关系。结果通过高通量测序筛选出230个差异表达piRNA,利用miRanda软件预测出43个靶基因,经GO分析发现其参与的生物学过程主要为调节细胞钙离子浓度,分子功能主要为参与ATP酶的活动及多聚A尾RNA结合。选取5个未知的差异表达piRNA及其靶基因检测其在肾母细胞瘤肿瘤组织及癌旁正常组织中的表达情况,结果显示第13位未知上调piRNA(NU13)表达量在肿瘤组织中下调(P<0.01),其靶基因NOP56核糖核蛋白(NOP56)表达在肿瘤组织和癌旁正常组织中差异表达无统计学意义(P=0.58);第9位未知上调piRNA(NU9)表达量在肿瘤组织中下调(P<0.01),其靶基因40S核糖体蛋白S8(RPS8)基因在肿瘤组织和癌旁正常组织中差异表达无统计学意义(P=0.29);第5、7、9位未知下调piRNA(ND5、ND7、ND9)及其共同靶基因MT-RNR2样蛋白1(MTRNR2L1)基因的表达量在肿瘤组织中均下调(P均<0.01)。以上在儿童肾母细胞瘤组织中出现差异表达的piRNA及其靶基因与患儿年龄、性别、肿瘤临床分期、病理分型无明显相关性(P均>0.05)。结论piRNA NU9、NU13、ND5、ND7、ND9及靶基因MTRNR2L1在儿童肾母细胞瘤组织中出现差异表达,有望成为鉴别肾母细胞瘤与正常肾组织的标志物。
- 王璋张丹张朝霞王钊颖谭小军卢虹旭沈炼桔龙春兰魏光辉何大维
- 关键词：高通量测序肿瘤干细胞肾母细胞瘤
- 人脐带间充质干细胞缓解马兜铃酸诱导小鼠肾纤维化的作用及机制
- 2019年
- 该实验探究了人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cell,hucMSC)缓解马兜铃酸(aristolochic acid,AA)诱导小鼠肾纤维化的作用及可能机制。我们将huc-MSC经尾静脉注射干预AA诱导的肾纤维化小鼠模型。HE、PAS和Masson染色观察肾脏形态变化,Western blot和免疫组化检测上皮间质转化相关标志物E-cadherin、N-cadherin和TGF-β/Smad信号通路蛋白TGF-β1和p-Smad2/3表达水平。组织形态学染色结果显示,AA可诱导小鼠出现肾小管扩张、结构破坏,肾间质区胶原纤维沉积,呈纤维化改变;Western blot和免疫组化结果显示,其E-cadherin表达降低,N-cadherin、TGF-β1及p-Smad2/3表达增高。huc-MSC干预后,肾脏形态明显改善,胶原纤维沉积减少,E-cadherin表达增高,N-cadherin、TGF-β1及p-Smad2/3表达受到降低。研究结果表明,huc-MSC能够通过抑制TGF-β/Smad信号通路减轻肾脏上皮间质转化,从而缓解马兜铃酸诱导的小鼠肾纤维化。
- 余熠杭张德迎胡东周宇刘博向涵龙春兰沈炼桔刘星林涛何大维魏光辉
- 关键词：人脐带间充质干细胞肾纤维化马兜铃酸上皮间质转化TGF-Β/SMAD信号通路
- 邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯对血睾屏障完整性的损伤及机制被引量：2
- 2017年
- 目的探讨邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯(DEHP)破坏睾丸血睾屏障完整性的机制研究。方法将出生后60 d的SD雄鼠随机分为两组,即玉米油对照组和DEHP暴露组,DEHP的用药剂量为750 mg/kg,采用灌胃的方式给药,每天1次,连续处理30 d,并于最后1次处理后麻醉处死。HE染色观察睾丸的组织病理学改变情况;Western blot检测睾丸组织中构成血睾屏障的关键连接蛋白N-cadherin、β-catenin、occludin和connexin43(Cx43)的膜蛋白表达水平;MTT检测睾丸支持细胞(Sertoli cell)的活力,活性氧检测试剂盒检测细胞中活性氧(Reactive oxygen species,ROS)生成水平;Western blot检测抗氧化应激蛋白Nrf2以及p-p38的蛋白表达水平。结果与对照组相比,DEHP暴露后的睾丸曲细精管结构紊乱,管腔中可见圆形的精子细胞,精子排列失去极性;Western blot结果表明occludin和connexin43的表达明显降低,N-cadherin和β-catenin表达明显升高(P<0.05);Sertoli细胞随着DEHP暴露浓度的增加,活力显著降低,ROS生成水平明显增加,Nrf2和p-p38的蛋白表达明显增高(P<0.05)。结论 DEHP暴露可通过氧化应激激活p38 MAPK信号通路,破坏血睾屏障完整性,并最终损伤生精功能。
- 沈炼桔唐向亮龙春兰曹希宁魏仪王养才孙茫周玥刘洋刘博黄方圆魏光辉
- 关键词：血睾屏障氧化应激损伤P38
- 刺五加苷诱导大鼠间充质干细胞成骨分化的作用被引量：6
- 2019年
- 目的探讨刺五加苷诱导大鼠间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用。方法提取SD大鼠的BMSCs,培养3代后采用流式细胞术鉴定表面抗原CD45、CD29、CD90的表达;在经典成骨培养液中加入不同浓度的刺五加苷而分为9组:A组(1×10^(–4)mol/L),B组(1×10^(–5)mol/L),C组(1×10^(–6)mol/L),D组(1×10–7mol/L),E组(1×10^(–8)mol/L),F组(1×10^(–9)mol/L),G组(1×10^(–10)mol/L),H组(经典成骨组),I组(阴性对照组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力,反转录定量PCR(RT-qPCR)检测骨形成蛋白(BMP)表达情况,筛选出刺五加苷的最佳诱导浓度。以最佳诱导浓度培养12d后,RT-qPCR检测成骨分化相关基因Runt相关转录因子(RUNX)、成骨细胞特异性转录因子(OSX)、骨涎蛋白(BSP)、骨钙素(OCN)的mRNA表达水平,Western blotting检测Notch跨膜受体蛋白1(Notch1)、毛发增强分裂蛋白(Hes1)的蛋白表达水平;第21天时行矿化钙结节茜素红染色。结果第3代BMSCs表面抗原符合干细胞鉴定标准。CCK-8检测结果显示,A、B两组在培养120h后明显抑制了BMSCs的增殖,后期培养中将舍弃A、B两组;而RTqPCR结果显示,添加有刺五加苷的C～G组中,E组BMP表达量最高(4.91±0.46),因此选择1×10^(–8)mol/L作为刺五加苷的最佳诱导浓度进行后续实验。RT-qPCR检测结果显示,E组OSX表达量(30.72±1.96)明显高于I组(1.02±0.27)和H组(9.99±0.59,P<0.05),BSP表达量(8.15±0.47)高于I组(1.09±0.31)和H组(6.03±0.8,P<0.05),OCN表达量(5.91±0.68)高于I组(1.18±2.91)和H组(3.05±0.53,P<0.05),RUNX表达量(1.99±0.09)虽高于I组(1.02±0.19),却低于H组(2.51±0.06,P<0.05)。Westernblotting检测结果显示,E组成骨诱导后Notch1表达量(4608±103)较I组(2638±308)高,却低于H组(5218±182,P<0.05),Hes1表达量(8885±17)较I组(6241±461)增高,却低于H组(12 289±629,P<0.05)。茜素红染色结果显示刺五加苷浓度为10–8mol/L时矿化钙结节多于经典成骨组,提示该浓度刺五加苷�
- 黄月颜亮崔向荣龙春兰周琴田杰朱静
- 关键词：成骨分化骨髓间充质干细胞
- DEHP通过氧化应激损伤导致SD大鼠生精功能损伤
- 目的:DEHP导致SD大鼠生精功能损伤的氧化应激机制。方法:产后雌鼠随机分为玉米油对照组和DEHP暴露组,于子鼠出生后(postnatal day,PND)1-30天灌胃母鼠玉米油或DEHP 100 mg/kg bw/d...
- 沈炼桔吴盛德彭金普王养才周玥曹希宁刘洋魏仪龙春兰林涛何大维魏光辉
- 性染色体异常型性发育异常的临床诊断和治疗经验:附39例报告
- 目的:加深对性染色体型性发育异常的临床诊治认识。方法:回顾性分析重庆医科大学附属儿童医院收治的39例性染色体型性发育异常患儿的临床资料。结果:住院患儿39例(年龄6月-18岁,平均5.3岁),入院前社会性别男23例、女1...
- 吴盛德唐向亮魏仪王养才龙春兰沈炼桔林涛何大维李旭良俊宏刘星华燚陆鹏张德迎温晟魏光辉
- 维甲酸促进隐睾大鼠睾丸生精功能改善的实验研究被引量：2
- 2019年
- 目的探讨维甲酸改善氟他胺诱导隐睾大鼠生精功能的相关机制,为临床预防隐睾患儿发生不育提供动物实验基础。方法30只雌性SD大鼠合笼成功后采用随机数字表法平均分为:对照组10只,孕期第12~20天皮下注射1 mg/ml的玉米油25 mg·kg^-1·d^-1;氟他胺诱导隐睾组10只,孕期第12~20天皮下注射玉米油配制的氟他胺25 mg·kg^-1·d^-1;维甲酸干预组10只,在氟他胺诱导隐睾组处理基础上,予子代雄鼠生后1~10 d及28~30 d玉米油配制的维甲酸1 mg·kg^-1·d^-1。于生后30 d及60 d观察子代雄鼠睾丸组织病理、精子数量及质量,免疫组织化学及蛋白质印迹法检测氧化应激水平蛋白、凋亡水平蛋白及血睾屏障相关连接蛋白水平改变。结果对照组无隐睾发生,睾丸重量为(0.56±0.17) g,体积为(0.44±0.12)cm^3,精子数量为(2.25±0.14)个/ml;睾丸组织各级生精细胞排列整齐,层次清楚,可见较多精子细胞;氧化应激蛋白SOD1、HO-1、Gpx表达量分别为0.92±0.02和0.62±0.06、0.93±0.12,凋亡蛋白Bax及Bcl-2表达量分别为0.67±0.06和0.80±0.04,血睾屏障相关连接蛋白Cx43及Zo-1表达量分别为1.44±0.07和3.84±0.10。氟他胺诱导隐睾组隐睾发生率为62.50%(20/32),睾丸重量为(0.13±0.03) g、体积为(0.07±0.02)cm^3,精子数量为(0.65±0.17)个/ml,上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);睾丸组织各级生精细胞排列紊乱,层次不清,结构破坏;氧化应激蛋白SOD1、HO-1、Gpx表达量分别为1.23±0.07和0.90±0.09、1.70±0.01,凋亡蛋白Bax及Bcl-2表达量分别为0.87±0.01和0.53±0.20,血睾屏障相关连接蛋白Cx43及Zo-1表达量分别为0.51±0.07和1.48±0.25,上述指标与对照组比较,差异亦均有统计学意义(P<0.05)。维甲酸干预组睾丸重量为(0.29±0.11) g、体积为(5.21±0.30)cm^3,精子计数为(1.49±0.31)个/ml,与对照组比较差异无统计学意义,但较氟他胺诱导隐睾组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)�
- 周宇彭金普张德迎周玥龙春兰沈炼桔刘星林涛何大维魏光辉
- 关键词：隐睾维甲酸氧化应激血睾屏障
- HEP-2细胞染色体不稳定性与kinetochore变异被引量：2
- 2011年
- 染色体非整倍性畸变是恶性肿瘤细胞的显著细胞遗传学特征,但其诱发染色体数目不稳定的机制一直尚未阐明。本研究从与染色体分离直接相关的动粒(kinetochore)角度,采用kine-tochore-NOR同步银染技术对HEP-2细胞染色体kinetochore变异进行分析,以探讨恶性肿瘤细胞染色体数目变异的形成机制。实验共分析HEP-2细胞分裂相308个,计染色体16 962条,正常对照个体外周血细胞分裂相300个,计染色体13 800条。结果表明:与正常人外周血细胞相比,HEP-2细胞染色体kinetochore缺失和kinetochore迟滞复制频率显著升高(P<0.01),而kinetochore-NOR融合频率二者没有显著差异(P>0.05),这些结果提示kinetochore缺失和kinetochore迟滞复制可能是HEP-2细胞染色体非整倍性变异起源的诱因之一。此外,我们还在某些HEP-2细胞染色体上观察到多重kinetochore现象,并认为染色体多重kinetochore可能是恶性肿瘤细胞染色体结构畸变产生的一个新的途径。
- 龙春兰谭彬刘学庆丁裕斌陈雪梅余秋波高茹菲王应雄何俊琳
- 关键词：染色体不稳定HEP-2细胞
- 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯诱导隐睾对SD幼鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响被引量：5
- 2013年
- 目的探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[D(i2-ethylhexy1)phthalate,DEHP]作用于SD孕鼠后,对哺乳期雄性幼鼠睾丸组织中生殖细胞凋亡及凋亡基因Bax和Bcl-2表达的影响。方法将30只妊娠第12.5天的SD孕鼠随机分正常对照组、玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组,每组10只。玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组自妊娠第12.5～19.5天分别每日灌胃玉米油(2 ml)和DEHP(500 mg/kg),正常对照组不给药。取各组出生后第20天的雄性幼鼠睾丸组织,采用Q-PCR法检测睾丸组织中Bax和Bcl-2基因的水平,流式细胞术检测睾丸生殖细胞的凋亡情况。结果 DEHP诱导隐睾组幼鼠睾丸组织中Bax基因mRNA的水平显著高于两对照组(P<0.000 1),Bcl-2基因mRNA的水平显著低于两对照组(P<0.01);DEHP诱导隐睾组幼鼠睾丸生殖细胞凋亡百分率显著高于两对照组(P<0.000 1)。结论孕期暴露环境内分泌干扰物DEHP可引起雄性子代发生隐睾,且隐睾鼠睾丸生殖细胞凋亡率增加,隐睾子代睾丸组织中凋亡基因Bax和Bcl-2的表达有改变,推测其改变可能参与了生殖细胞的凋亡过程,并可能与隐睾继发的远期不育有关。
- 刘东尧吴盛德华燚何文飞何昀陈柏林龙春兰魏光辉
- 关键词：隐睾生殖细胞细胞凋亡BAX基因BCL-2基因
- 卵睾型性发育异常单中心临床诊治分析
- 目的:总结卵睾型性发育异常的临床特点及诊治经验。方法:回顾性分析1993年1月至2015年12月就诊于重庆医科大学附属儿童医院并通过病理确诊卵睾型性发育异常患者临床资料和随访资料。结果:社会性别:男性30例,女性2例;1...
- 吴盛德魏仪唐向亮王养才龙春兰沈炼桔林涛何大维李旭良光辉
