丁慧荣
- 作品数：8 被引量：21H指数：3
- 供职机构：泸州医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 不同细胞裂解液对肝细胞蛋白提取影响的研究被引量：2
- 2005年
- 目的 寻找一种更适合肝细胞蛋白质提取的细胞裂解液配方。方法 配制不同组成和不同浓度的细胞裂解液 ,分别对相同条件下培养的肝细胞进行裂解并进行蛋白定量及十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)佐证。结果 不同组成及不同浓度的细胞裂解液对肝细胞裂解作用存在显著差异。结论 去污剂用 4 % 3 [(3 胆酰胺丙基 ) 二乙胺 ] 丙磺酸 (CHAPS)的细胞裂解液对肝细胞裂解效果最好。
- 刘友平丁慧荣肖斌罗文炽李洪
- 关键词：肝细胞蛋白质提取聚丙烯酰胺凝胶电泳去污剂SDS-PAGE
- 小鼠肝细胞胰岛素与EGF信号转导磷蛋白质组的动力学行为对比分析
- 2007年
- 目的分析小鼠肝细胞内胰岛素与表皮生长因子(EGF)信号转导磷蛋白质组的动力学行为差别,以此找出两者关键性的信号蛋白。方法采用双向电泳及放射性同位素标记技术,进行分析比较EGF与胰岛素分别介导的磷酸化蛋白质组的动力学行为。结果参与两者信号转导的磷蛋白质种类没有多大差异,大多数信号磷蛋白磷酸化水平的动力学行为也表现为一致性,但有4个蛋白点其磷酸化水平随时间变化趋势明显不同。结论胰岛素与EGF虽然在多方面有许多相似之处,但在同一细胞内参与信号转导的个别信号蛋白其磷酸化水平的动力学行为差别较大,估计这些蛋白就是导致EGF与胰岛素最终生物学活性有所不同的关键蛋白。
- 刘友平李洪丁慧荣何涛张春燕
- 关键词：表皮生长因子磷酸化蛋白质信号转导系统动力学行为
- 放射性^(32)P掺入小鼠肝细胞内的动力学研究
- 2005年
- 目的:寻求放射性同位素^(32)P掺入到小鼠肝细胞内达到磷平衡的时间点。方法:采用^(32)P掺入标记小鼠肝细胞磷蛋白不同时间点,SDS-PAGE对不同掺入标记时间的全细胞蛋白进行分离,放射自显影后进行半定量分析,获得^(32)P掺入标记的时间动力学曲线。结果:^(32)P掺入标记培养小鼠肝细胞磷蛋白是一动态过程,直到8小时后达到平衡。结论:放射性^(32)P掺入到小鼠肝细胞内的磷平衡时间至少需8h,本实验为小鼠肝细胞放射性^(32)P掺入标记实验提供了准确的掺入平衡时间点。
- 刘友平丁慧荣李洪何涛
- 关键词：肝细胞动力学磷蛋白小鼠肝细胞^32P细胞内动力学研究
- 小鼠肝细胞胰岛素信号转导的动力学研究被引量：1
- 2006年
- 目的从细胞整体水平观察细胞内信号蛋白在胰岛素刺激下发生的动力学变化,找出胰岛素相关信号蛋白的动力学改变及其对胰岛素信号转导最终生理效应的影响。方法采用双向电泳及放射性同位素标记技术,分析小鼠肝细胞在胰岛素(100 nmol/L)持续刺激不同时间得到的胰岛素信号蛋白磷酸化水平发生的动力学变化。结果小鼠肝细胞胰岛素信号转导相关磷蛋白有数十种,其中磷蛋白Shc、MKP3等的时间动力学曲线均呈峰型。结论在细胞整体水平,胰岛素多条信号转导途径之间存在相互交流,这种相互交流对信号转导的最终效应产生了复杂的整合和调控,使细胞对持续高浓度的胰岛素刺激产生了自适应控制。
- 丁慧荣刘友平李洪何涛段承刚
- 关键词：胰岛素细胞信号转导动力学小鼠肝细胞
- 小鼠肝细胞胰岛素与表皮生长因子信号转导磷蛋白质组的对比分析(英文)
- 2008年
- 背景:表皮生长因子和胰岛素都主要通过PI3K通路和MAPK通路进行信号转导,但各自的生理功能不同。目的:从细胞整体水平对比分析小鼠肝细胞内胰岛素与表皮生长因子信号转导磷蛋白质组的动力学行为差别,以此找出二者关键性的信号蛋白。设计、时间及地点:随机分组设计的对比观察实验,于2005-07/2006-04在泸州医学院分子生物学实验室完成。材料:实验用肝细胞来源于昆明种封闭群乳小鼠。方法:选取细胞长势相当的肝细胞,采用放射性同位素(32P)对其进行标记,标记后按随机数字表法分为3组,空白对照组、表皮生长因子刺激组(给予10μg/L表皮生长因子)及胰岛素刺激组(给予100nmol/L胰岛素)。主要观察指标:表皮生长因子、胰岛素分别作用0,5,20,60,120min,采用双向电泳技术分析比较表皮生长因子与胰岛素分别介导的磷酸化蛋白质组的动力学行为,即磷酸化水平。结果:参与两者信号转导的磷蛋白质种类没有多大差异,大多数信号磷蛋白磷酸化水平的动力学行为也表现为一致性,但有4个蛋白点其磷酸化水平随时间变化趋势明显不同。结论:胰岛素与表皮生长因子在同一细胞内参与信号转导的个别信号蛋白其磷酸化水平的动力学行为差别较大,估计这些蛋白就是导致表皮生长因子与胰岛素最终生物学活性的关键蛋白。
- 刘友平姚富丽丁慧荣李洪
- 关键词：表皮生长因子磷酸化蛋白质信号转导系统动力学行为
- 高浓度EGF对小鼠肝细胞信号转导的动力学研究被引量：3
- 2005年
- 目的:探讨高浓度表皮生长因子(EGF)对小鼠肝细胞信号转导的动力学改变。方法:从细胞整体水平的角度出发,采用双向电泳及放射性同位素标记技术,并结合相关数据库资源和双向电泳专用分析软件,分析小鼠肝细胞在高浓度的EGF信号持续刺激不同时间得到的EGF信号蛋白在EGF信号转导过程中其磷酸化水平发生的动力学变化。结果:在高浓度EGF持续刺激下,小鼠肝细胞内的某些结点信号蛋白如Eps15和ERK2的磷酸化动力学曲线表现为持续活化状态。结论:在高浓度的EGF持续刺激下,EGF信号网络系统中的某些信号蛋白将会发生一定的改变,这些改变可能与肿瘤的发生、发展有密切关系。
- 刘友平丁慧荣吴民泸李洪
- 关键词：动力学研究信号蛋白小鼠肝细胞活化状态ERK2
- 一种简单、经济、高效的大量肝细胞培养方法被引量：13
- 2005年
- 采用组织“切割分离法”加“胰蛋白酶消化法”两种传统方法的组合,获得细小的肝组织块进行贴壁法培养,待肝细胞长满瓶底(肝细胞为主)即传一代(目的去组织块及其他间质细胞),继续培养可获得高密度、高纯度、高活力的肝实质细胞。本实验方法操作简单、经济、高效,适用于一般实验室进行大规模肝细胞培养的细胞培养方法。
- 刘友平丁慧荣何涛代荣阳李洪
- 关键词：肝细胞实验室间质细胞原代培养传代培养
- 培养肝细胞在蛋白质组学研究中的应用被引量：3
- 2005年
- 目的研究一种简便的肝细胞培养方法以培养出足够量的单一类型细胞,从而获得尽可能多的蛋白量进行细胞蛋白质组学分析。方法采用肝组织块贴壁法培养并传一代(目的是去组织块及其他间质细胞)。收集细胞蛋白并进行SDS-PAGE及双向凝胶电泳。结果本实验方法可获得高密度、高纯度、高活力的肝实质细胞,细胞裂解后得到的蛋白质电泳图谱效果好。结论实验方法操作简单、经济、高效,能够满足一般实验室进行细胞蛋白质组学分析。
- 刘友平丁慧荣何涛代荣阳李洪
- 关键词：养肝肝细胞培养组织块肝实质细胞间质细胞
