于葛华
- 作品数：15 被引量：34H指数：4
- 供职机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 慢性肾炎患者外周血共刺激分子CD_(28)和CD_(137)水平变化研究被引量：4
- 2003年
- 目的 研究慢性肾炎患者外周血共刺激分子CD2 8和CD1 37的表达特点及其在慢性肾炎免疫病理机制中的作用。方法 采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析 ,对 5 2例慢性肾炎患者外周血共刺激分子CD2 8、CD1 37和T淋巴细胞亚群的表达进行检测。结果 慢性肾炎患者T细胞亚群明显失衡 ,表现为CD4减少 ,CD8增加 ,CD4 CD8比值显著降低。共刺激分子CD2 8表达显著低于正常对照组 (P <0 0 1) ,且CD+4 CD+2 8T细胞和CD+8CD+2 8T细胞均显著减少 (P <0 0 1)。共刺激分子CD1 37表达显著高于正常对照组 (P <0 0 1)。结论 慢性肾炎患者外周血T细胞亚群失衡和T细胞活化所必需的共刺激分子CD2 8、CD1 37异常表达 。
- 沈华英董吉祥汪寅石永兵于葛华张学光
- 关键词：慢性肾炎共刺激分子CD28CD137免疫病理学
- 转染人CXCR4细胞株的构建及其生物学功能的研究被引量：1
- 2006年
- 目的:构建稳定表达人CXCR4基因的L929细胞株,分析CXCR4分子对转基因细胞迁移能力的影响。方法:TRIzol一步法抽提人外周血单个核细胞(PBMC)总RNA,RT-PCR扩增出CXCR4基因,双酶切装入逆转录病毒载体pEGZ-Term,与辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T,用其培养上清感染L929细胞72h后,经Zeocin筛选出稳定表达CXCR4分子的L929细胞株;利用微孔隔离小室检测转人CXCR4基因的L929细胞在SDF-1α作用下的迁移能力。结果:构建含CXCR4基因的重组逆转录病毒载体,经转染包装细胞293T后,筛选获得能稳定高表达人CXCR4蛋白的L929转基因细胞,转入人CXCR4基因的L929细胞在SDF-1α作用下介导迁移。结论:成功构建转染人CXCR4细胞株,为肿瘤迁移模型的研究和鼠抗人CXCR4mAb的制备打下基础。
- 周时勇杨明峰王雪峰于葛华成中芹张学光
- 关键词：CXCR4逆转录病毒迁移
- CD_(40)激发对恶性B淋巴细胞体外生物学行为的影响被引量：1
- 2002年
- 目的 观察重组人可溶性CD4 0 配体 (rhsCD4 0 L)及CD4 0 L基因转染细胞 (CD4 0 L TC)对恶性B淋巴细胞体外生物学行为的影响 ,探讨rhsCD4 0 L在肿瘤生物治疗中的可能作用。方法 利用基因工程技术获得了rhsCD4 0 L和CD4 0 L TC ,分别与恶性B淋巴细胞株XG2、XG7、U2 6 6、82 2 6、Raji及Daudi共同作用 ,分析了CD4 0 激发对肿瘤细胞的体外增殖 (锥虫蓝计数法 )、细胞周期 (碘化丙锭掺入法 )、细胞表面共刺激分子的表达 (免疫荧光标记法 )以及细胞凋亡 (Annexin Ⅴ FITC法 )的效应。结果 ①恶性B淋巴细胞株CD4 0 表达呈异质性 ,XG2高表达CD4 0 ,82 6 6、Raji和Daudi中度表达 ,而XG7和U2 6 6不表达CD4 0 。显微镜下观察发现 ,rhsCD4 0 L(5 μg ml)可引起XG2或Daudi细胞的同型聚集 ,该效应在作用 6～ 8h后即可出现 ;与CD4 0 L TC细胞共育后 (肿瘤细胞 :CD4 0 L TC =5∶1) ,XG2 ,Raji和Daudi细胞可粘附于CD4 0 L TC表面 ;②rhsCD4 0 L和CD4 0 L TC均可显著抑制XG2、Raji和Daudi细胞的体外增殖 ,导致XG2细胞呈现G1 期阻滞 ,而Raji和Daudi细胞阻滞于G2 期。并诱导XG2、Raji、Daudi细胞的凋亡 ,凋亡率分别为 :XG2细胞 2 3 3%和 18.8% ,Raji细胞 11.6 %和 8.9% ,Daudi 14 .2 %和 15 .9% ;③表型分析显示
- 时宏珍戚春建庄羽美顾宗江于葛华赵文宝张学光
- 关键词：CD40生物治疗体外生物学
- 激发型CD40单抗5C11对白血病细胞来源的树突状细胞生物学特性的影响
- 本文采用本科室自制的激发型CD40单抗5C11配合细胞因子,进行了10例白血病细胞源细胞体外诱导DC,并对白血病源DC的生物学特性作初步分析。1 材料与方法10例标本均来自苏州大学附一院血液科,经临床、血液学及细胞遗传学...
- 王正飞于葛华朱子玲王凤鸣朱一蓓顾宗江时文彪张学光
- 文献传递
- 基质细胞衍生因子1及其受体CXCR_4在自体外周血造血干细胞动员中的表达及临床意义
- 2006年
- 目的探讨基质细胞衍生因子1及其受体CXCR4(SDF-1/CXCR4)在自体外周血造血干细胞动员中的表达及意义。方法采用免疫荧光标记和流式细胞仪表型检测分析CD3+4细胞上CXCR4的表达;ELISA方法动态分析患者造血干细胞动员过程中血浆中SDF-1水平的变化。结果①采集物中CD3+4CXCR4+细胞较动员前外周血和骨髓中CD3+4CXCR4+细胞均显著减少,分别为:(22.4±10.92)%,(32.09±12.71)%,(59.07%±26.98)%,P(0.01;动员好的组CD3+4CX-CR4+细胞数(20.11±8.87)%较动员差的组CD3+4CXCR4+细胞数(27.79±12.71)低,但无统计学意义(P=1.21)②血浆SDF-1至采集干细胞时显著降低;动员好的组血浆SDF-1平均含量显著低于动员差的组(P(0.001)。结论在造血动员过程中,SDF-1/CXCR4信号的表达是逐渐下调的,血浆SDF-1含量显著降低者动员效果好。
- 李彩霞吴德沛孙道萍刘跃均曹俊杰于葛华张学光
- 关键词：基质细胞衍生因子CXCR4造血干细胞动员
- 分泌独特型免疫球蛋白BALB/c小鼠B细胞淋巴瘤模型的建立被引量：2
- 2002年
- 目的 :构建分泌独特型免疫球蛋白 (idiotype ,Id)的BALB c小鼠B细胞淋巴瘤细胞株 ,建立动物模型 ,为进一步开展Id 树突状细胞 (dendriticcell,DC)疫苗的免疫治疗提供物质基础。方法 :采用降植烷和不完全弗氏佐剂间隔致敏 6～ 8周龄BALB c小鼠 ,继而采用细胞融合技术、ELISA法、免疫荧光标记和流式细胞术 (flowcytometry ,FCM)筛选获得分泌Id的阳性克隆 ;体内诱生腹水和体外无血清培养法制备Id ,优球蛋白沉淀法结合凝胶Suphecray 2 0 0过滤纯化Id ;建立荷瘤模型 ,从荷瘤小鼠骨髓前体细胞诱导DC。结果 :获得 2株稳定分泌Id的BALB c小鼠B细胞淋巴瘤细胞SB4和SB5 ,Id均为IgM κ ;成瘤率均为 10 0 % ,荷瘤小鼠平均生存期为 (3 0± 4)d。结论 :SB4和SB5能持续稳定分泌非自身反应性Id 。
- 古涛席泓庄羽美朱一蓓邱玉华戚春建于葛华李敏马泓冰张学光
- 关键词：B细胞淋巴瘤树突状细胞
- 鼠抗人OX40功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定
- 2005年
- 目的:研制功能性鼠抗人OX40单克隆抗体。方法:以转人OX40的转基因细胞L929-OX40为免疫原,常规免疫6-8周龄的雌性BALB/c小鼠;采用B淋巴细胞融合技术,将免疫小鼠脾脏细胞与SP2/0融合,以L929-OX40转基因细胞及PHA活化的T细胞为抗体筛选阳性细胞,经免疫荧光标记分析对杂交瘤进行反复筛选和多次的克隆化培养;采用快速定性试纸法及竞争抑制结合试验分析了该单抗的亚类及抗原识别位点;采用MTT法分析单抗在体外对T细胞的促增殖效应以及ELISA分析活化T细胞分泌的细胞因子。结果:获得1株持续、稳定分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为7E11),该单抗能特异性地识别人OX40分子和介导有效的共刺激信号,体外促进活化的T细胞增殖和细胞因子的分泌。结论:成功研制成一株能分泌功能性鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤,该抗体特异性地识别人OX40分子并具有在体外协同刺激T细胞的作用。
- 孙建军王勤陈永井居颂文邱玉华施勤于葛华时文彪张学光
- 关键词：OX40杂交瘤单克隆抗体T细胞
- 肿瘤细胞冻融裂解物上清对凋亡细胞负载的树突状细胞生物学特性的作用研究被引量：14
- 2003年
- 目的 :探讨Balb/c小鼠骨髓瘤SP2 / 0细胞冻融裂解物上清对SP2 / 0凋亡细胞负载的骨髓来源的树突状细胞 (DC)的成熟、生物学特性及功能的影响。方法 :采用小鼠重组粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM -CSF)和白介素 4(IL - 4)诱导骨髓来源的DC ,10 0Gyγ射线辐照诱导SP2 / 0细胞凋亡 ,与未成熟DC共育 16- 2 0h ;SP2 / 0细胞冻融裂解物上清和脂多糖 (LPS)分别作用于DC 48h。采用免疫荧光标记和流式细胞术分析DC表型 ;[3H] TdR掺入试验和 [51Cr]释放试验测定DC刺激T细胞增殖和细胞杀伤效应。采用腹股沟皮下DC主动免疫治疗SP2 / 0荷瘤小鼠 ,每间隔 14d治疗 1次 ,共 3个疗程 ,观察肿瘤生长情况及小鼠生存期。结果 :(1)经SP2 / 0冻融裂解物上清和脂多糖 (LPS)诱导凋亡肿瘤细胞负载的DC高表达共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHC -Ⅱ分子 ,但抗原摄取能力均下降 ;(2 )SP2 / 0冻融裂解物上清组和LPS组DC体外刺激T细胞增殖和激活CTL能力均高于对照组 (P <0 0 5 ) ;(3 )经SP2 / 0冻融裂解物上清组主动免疫治疗小鼠存活期长于其它各组 (P <0 0 5 )。结论 :小鼠SP2 / 0细胞冻融裂解物上清可诱导凋亡细胞负载的树突状细胞成熟 ,能够刺激T细胞增殖和激发肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL) 。
- 古涛朱一蓓李敏黄勇席泓于葛华戴俊顾宗江张学光
- 关键词：肿瘤细胞凋亡细胞树突状细胞生物学特性
- 鼠抗人多聚体蛋白聚糖单克隆抗体对骨髓瘤细胞株生长的抑制作用
- 2005年
- 目的研究多聚体蛋白聚糖(syndecan 1,CD138)单克隆抗体(mAb)4B3 对天然表达syndecan 1的人多发性骨髓瘤(MM)细胞XG 1 和XG 2 的生物学效应。方法采用间接免疫荧光标记和流式细胞术分析,通过4B3mAb观察XG 1和XG 2细胞膜上syndecan 1荧光标记阳性率;按常规培养方式对XG 1、XG 2进行细胞培养和台盼蓝染色记数,观察不同浓度的4B3mAb对XG 1和XG 2细胞体外生长作用。结果4B3mAb能识别XG 1 和XG 2 细胞表达的syndecan 1 分子,表达率与商品化的鼠抗人syndecan 1 mAb(BB4)相似;同时,4B3mAb与XG 1 和XG 2 细胞膜上synde can 1荧光标记阳性率基本一致,反应均呈强阳性;加入不同浓度的4B3mAb,XG 1 细胞数量2 d后开始下降,而XG 2细胞3 d后数量出现减少。结论4B3mAb抗体对XG 1 和XG 2 均具有明显的生长抑制作用,但XG 2细胞的生长抑制作用早于XG 1,可为MM的生物治疗提供新途径。
- 孙万平孙静王国卿王凤鸣梁文飚于葛华张学光
- 关键词：单克隆抗体蛋白聚糖多聚体细胞株生长免疫荧光标记细胞数量
- 激发型CD_(40)单抗5C11对白血病细胞来源树突细胞的诱导作用及生物学特性被引量：3
- 2003年
- 目的 探讨激发型CD40 单抗 5C11对白血病细胞来源的树突细胞 (DC)的诱导作用及其生物学特性的影响。方法 激发型CD40 单抗 5C11联合不同的细胞因子组合诱导白血病细胞分化为DC ,通过显微镜形态分析 ,流式细胞仪表型分析 ,活细胞计数 ,IL 6、IL 12ELISA定量检测及混合淋巴细胞反应和细胞毒性实验等细胞生物学、免疫学方法对其进行研究。结果 白血病患者外周血或骨髓的白血病细胞 ,在经激发型CD40 单抗 5C11联合不同的细胞因子组合培养后 ,能诱导成为大量成熟的DC ;形态学观察呈现典型的DC特征 ;流式细胞仪检测证实细胞表面上调性表达CD40 、CD80 、CD83 、CD86等分子 ;白血病细胞分化为DC后 ,IL 6分泌量减少 ,IL 12分泌量增加 (P <0 .0 5 ) ;同种异体混合淋巴细胞反应也显示 ,诱导的DC具有很强的刺激同种异体T细胞增殖的能力 ,这种增殖的T细胞对白血病细胞具有一定的杀伤作用。结论 激发型CD40 单抗 5C11联合细胞因子能诱导白血病细胞分化为功能性DC。这可能在白血病的过继免疫疗法中具有潜在的应用价值。
- 王正飞于葛华朱子玲朱一蓓王凤鸣潘建忠顾宗江张学光
- 关键词：树突细胞生物学特性
