付博
- 作品数：7 被引量：6H指数：2
- 供职机构：齐齐哈尔大学生命科学与农林学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目黑龙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 沉默MDR1基因增强SGC7901/ADM细胞对姜黄素的敏感性被引量：2
- 2017年
- 本研究利用短发夹RNA(sh RNA)沉默SGC7901/ADM细胞MDR1基因表达,增强人胃癌SGC7901/ADM细胞对姜黄素的敏感性。根据MDR1基因序列设计3对编码sh RNA的DNA模板,克隆到p Silencer 3.1-H1 neo(p3.1)上构建3种sh RNA表达载体,转染SGC7901/ADM细胞,q RT-PCR和Western blotting检测MDR1基因沉默效果,用荧光显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞活力。结果显示,3种sh RNA表达载体转染细胞后均能不同程度沉默MDR1基因的表达,增强了细胞对姜黄素的敏感性。
- 孙新迪邵淑丽恽冬泽李旭艳张伟伟付博李妍
- 关键词：SHRNA姜黄素
- 同工酶技术在树状多节孢研究中的应用
- 2005年
- 通过对紫杉醇产生菌树状多节孢HQD33和从此菌出发经LiCl和紫外线诱变产生的紫杉醇产量正变菌株的过氧化物酶同功酶、脂酶同功酶、淀粉酶同功酶、过氧化氢酶同功酶以及可溶性蛋白和游离组蛋白电泳图谱的分析,得到以下结论:除过氧化氢酶同功酶以外其它酶的同功酶谱都有不同程度的改变,可初步认为,紫杉醇的产生可能与本试验所选的同功酶有关.
- 解玉红赵俊英张鹏付博于淼张海英周东坡
- 关键词：紫杉醇同功酶树状多节孢
- 沉默MDR1基因增强急性早幼粒白血病耐药细胞HT9药物敏感性被引量：4
- 2012年
- 该研究利用短发卡RNA(small hairpin RNA,shRNA)表达载体沉默HT9急性早幼粒白血病耐药细胞MDR1基因表达,以提高细胞对三尖杉酯碱、阿霉素的敏感性。通过设计合成编码shRNA的DNA模板序列,定向克隆到pSilencer 2.1-U6 neo质粒,成功构建1个P-gp蛋白基因特异的shRNA表达载体,稳定电转染HT9细胞,实时荧光定量PCR分析MDR1 mRNA表达,Western blot检测细胞P-gp蛋白表达,流式细胞术检测P-gp蛋白外排泵功能,MTT法检测细胞对药物敏感性。结果显示,成功构建了shRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 neo-MDR1,转染HT9细胞后,PCR检测重组质粒整合到HT9/sh-2.1-1细胞基因组DNA,获得稳定遗传;HT9/sh-2.1-1细胞MDR1 mRNA表达降低了78.84%(P<0.01),P-gp蛋白表达降低了48.27%(P<0.05),细胞内Rho123相对荧光强度由(10.8±0.58)%升高至(73.56±1.37)%;转染细胞对三尖杉酯碱、阿霉素敏感性明显增强,IC50分别由(2.06±0.15)μmol/L降至(0.57±0.01)μmol/L、(4.04±017)μmol/L降至(1.56±0.05)μmol/L。提示shRNA干扰表达载体pSilencer 2.1-U6 neo-MDR1能够稳定、持久地抑制MDR1基因表达,并能有效增强HT9细胞对三尖杉酯碱、阿霉素的敏感性。
- 邵淑丽李旭艳张伟伟恽东泽付博张珍珠
- 关键词：短发卡RNAMDR1基因三尖杉酯碱
- 树状多节孢诱变株与出发株间同工酶差异初探
- 2005年
- 为了探索紫杉醇产生菌发酵产生紫杉醇的机理,对紫杉醇产生菌树状多节孢HQD33和经LiCl、紫外线诱变产生的紫杉醇产量正突变的HQD33诱变菌株(P50-2、P1-6、P5-8、L30-2、L50-4)的同工酶和蛋白质(如:过氧化物酶同工酶、脂酶同工酶、淀粉酶同工酶、过氧化氢酶同工酶以及可溶性蛋白和游离组蛋白)的电泳图谱进行了分析,结果显示:除过氧化氢酶同工酶以外其它酶和蛋白质的电泳图谱都有不同程度的改变。可初步推断,诱变使紫杉醇产生菌的分子生物学背景发生了变化,由于遗传背景的改变导致了产生菌细胞内部蛋白质和同工酶的变化,可进一步认为紫杉醇的产生与试验所选的同工酶和蛋白质有一定的相关性。
- 解玉红张鹏付博于淼张海英周东坡
- 关键词：树状多节孢紫杉醇同工酶
- 沉默MDR1基因表达逆转白血病耐药HT9细胞对大蒜素的耐药性被引量：1
- 2013年
- 目的:利用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体沉默耐药细胞HT9中MDR1基因表达,从而逆转人早幼粒白血病细胞株HT9对大蒜素的耐药性。方法:根据MDR1基因序列设计shRNA片段,构建靶向MDR1基因的pSilencer3.1-shMDR1表达载体,稳定转染HT9细胞,real-time PCR检测细胞中MDR1 mRNA的表达,Western blotting检测HT9细胞中P-糖蛋白(MDR1基因编码)的表达,MTT法检测细胞存活率,琼脂糖凝胶电泳检测经大蒜素处理后HT9细胞的凋亡,电镜观察细胞超微结构变化,流式细胞术检测细胞周期。结果:成功构建靶向MDR1的表达载体pSilencer3.1-shMDR1,稳定转染HT9细胞形成HT9-shMDR1细胞系,HT9-shMDR1细胞中MDR1 mRNA表达显著降低[(0.027±0.002)vs(0.110±0.005),P<0.01],P-糖蛋白表达也明显降低[(0.856±0.014)vs(1.454±0.027),P<0.05]。大蒜素对HT9-shMDR1细胞的IC50较对未转染组HT9细胞明显降低[(26.66±0.59)vs(52.75±0.64)μg/ml,P<0.01],HT9-shMDR1细胞对大蒜素耐药的相对逆转率为(49.45±1.86)%。与未转染组HT9细胞相比,经大蒜素处理后HT9-shMDR1细胞凋亡的DNA片段更为明显,电镜下可见细胞凋亡特有的半月体形成。大蒜素处理不影响未转染组HT9细胞和对照质粒转染后HT9细胞(HT9-neo细胞)的细胞周期,但大蒜素处理使HT9-shMDR1细胞的S期细胞比例减少[(31.40±2.13)%vs(53.80±1.87)%,P<0.01],G2/M期细胞比例增多[(35.62±2.06)%vs(9.37±2.09)%,P<0.01]。结论:靶向MDR1的干扰表达载体pSilenc-er3.1-shMDR1能够抑制MDR1基因的表达,从而逆转HT9细胞对大蒜素的耐药性。
- 张伟伟邵淑丽张珍珠张宇付博
- 关键词：MDR1基因短发夹RNA大蒜素
- 质粒介导的RNAi沉默mdr1基因增强白血病耐药细胞HT9对姜黄素的敏感性被引量：1
- 2014年
- 通过pSilencer 2.1质粒介导的RNAi技术沉默急性早幼粒白血病耐药HT9细胞的耐药基因mdr1表达,可提高耐药细胞对姜黄素的敏感性。通过设计合成靶向mdr1基因的shRNA干扰片段,定向克隆到pSilencer 2.1-U6neo质粒中,成功构建沉默mdr1基因特异表达的shRNA表达载体,电转染HT9细胞后筛选阳性克隆扩大培养。采用实时荧光定量PCR、Western blot检测细胞mdr1基因表达情况,流式细胞术检测P-糖蛋白外排泵功能,MTT法和流式细胞技术检测细胞对药物敏感性和细胞周期分布。结果显示,构建的shRNA表达载体pU6/shRNA/mdr1转染HT9细胞后,HT9/pU6/shRNA细胞mdr1 mRNA表达降低了78.84%(P<0.01),P-糖蛋白的表达量降低了48.27%(P<0.05),细胞内Rho123相对荧光强度由10.8%±0.58%升高至73.56%±1.37%;转染细胞对姜黄素敏感性明显增强,IC50由(24.10±0.83)μmol/L降至(5.10±0.14)μmol/L;耐药相对逆转率为84.74%±1.86%,与HT9细胞相比,经姜黄素处理的稳定转染细胞HT9/pU6/shRNA细胞周期阻滞在S、G2/M期。说明质粒介导的shRNA表达载体pU6/shRNA/mdr1能够稳定、持久地抑制mdr1基因表达,能有效增强HT9细胞对姜黄素的敏感性。
- 李旭艳邵淑丽张伟伟恽东泽付博张珍珠
- 关键词：姜黄素
- MDR1基因沉默增强三尖杉酯碱诱导的HT9细胞凋亡被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨靶向P-糖蛋白(又称多药耐药蛋白1,MDR1)基因的shRNA对三尖杉酯碱诱导人耐三尖杉酯碱的前髓细胞白血病HT9细胞凋亡的影响。方法:构建MDR1基因特异的shRNA表达载体pSilencer 3.1-H1 neo-MDR1,稳定电转染HT9细胞,实时荧光定量PCR分析MDR1 mRNA的表达,Western blotting检测细胞MDR1蛋白表达,MTT法检测细胞活力,经三尖杉酯碱处理后琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA片段化,激光共聚焦观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞周期变化。结果:成功构建了shRNA表达载体pSilencer 3.1-H1neo-MDR1,稳定转染后,HT9细胞MDR1 mRNA和蛋白表达均显著降低,HT9细胞三尖杉酯碱的IC50由(1.184±0.130)mg/L降至(0.711±0.010)mg/L。与HT9细胞相比,经三尖杉酯碱处理后稳定转染细胞HT9/sh-3.1-1的DNA ladder更明显,激光共聚焦显微镜下可见形态不规则的碎片状或梅花状等典型的细胞凋亡形态;细胞的S期细胞增多,并出现明显的凋亡峰。结论:shRNA表达载体pSilencer 3.1-H1 neo-MDR1能够稳定、持久地抑制MDR1基因,并有效增强三尖杉酯碱诱导的HT9细胞凋亡。
- 张伟伟邵淑丽张珍珠付博
- 关键词：短发夹RNA多药耐药P-糖蛋白三尖杉酯碱
