刘奇
- 作品数：10 被引量：7H指数：2
- 供职机构：宜兴市人民医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 原核表达载体pGEX-4T-1/Snapin的构建和表达鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的构建pGEX-4T-1/Snapin原核表达载体并在大肠埃希菌中高效表达,以纯化得到Snapin/GST融合蛋白。方法用RT-PCR从小鼠血小板RNA中扩增Snapin基因。将目的片段装入原核表达载体pGEX-4T-1并转化至大肠埃希菌E.coli DH5α中,经过IPTG诱导,SDS-PAGE及凝胶扫描分析目的蛋白的表达水平。结果成功获得小鼠Snapin基因并构建得到重组表达质粒pGEX-4T-1/Snapin。筛选获得pGEX-4T-1/Snapin/E.coli DH5α重组转化菌株,诱导表达得到融合蛋白Snapin/GST。结论成功构建小鼠Snapin原核表达载体,并在E.coli DH5α中高效表达融合蛋白Snapin/GST,为深入研究Snapin蛋白的生物学结构和功能奠定基础。
- 刘奇汤俊明
- 关键词：基因克隆原核表达融合蛋白
- 血清抗F蛋白抗体与HCV基因分型及丙型肝炎的关系被引量：2
- 2012年
- 目的探讨血清抗F蛋白抗体与HCV基因分型及不同临床分型的丙型肝炎的关系。方法收集256例抗HCV抗体阳性患者血清标本,用ELISA法检测血清抗F蛋白抗体,提取HCV RNA并进行逆转录反应,根据5'非编码区(5'NCR)1,2,3,1b型碱基序列,设计保守区通用引物及型特异性引物。用巢式PCR对HCV进行基因分型。结果抗F蛋白抗体阳性率为61.3%(157/256)。男性与女性抗F蛋白抗体率分别为64.3%(110/171)与55.3%(47/85),差异无统计学意义(χ2=1.953,P>0.05)。与急性丙型肝炎抗F蛋白抗体阳性率的36.6%(15/41)相比,慢性丙型肝炎为63.6%(112/176)、丙型肝炎合并肝硬化为76.9%(30/39),差异有统计学意义(χ2分别为10.02和13.21,P均<0.01)。HCV RNA阳性患者抗F蛋白抗体阳性率为62.5%(90/144)与阴性患者的59.8%(67/112)相比无显著性差异(χ2=0.187,P>0.05);基因分型结果表明,1b型抗F蛋白抗体阳性率为62.8%(81/129),2型为60.0%(6/10),1b/2型为60.0%(3/5),各型抗F蛋白抗体阳性率无明显差异(χ2分别为0.109和0.105,P均>0.05)。结论血清抗F蛋白抗体与HCV临床分型有关,与性别、HCV RNA以及HCV基因型分布无关。
- 丁伟良刘奇黄莺葛志军王洁邓小昭喻荣彬张云
- 关键词：丙型肝炎基因分型
- HPV癌基因E6/E7 mRNA联合HPV DNA检测对宫颈癌及癌前病变的诊断价值分析
- 2021年
- 目的:分析人乳头瘤病毒(HPV)癌基因E6/E7信使核糖核酸(mRNA)与HPV脱氧核糖核酸(DNA)对宫颈癌(CC)及癌前病变的诊断价值。方法:以2017年1月至2019年12月本院妇科收治的宫颈病变患者152例为研究对象。根据细胞病理分级将患者分为未见上皮内病变细胞或恶性细胞(NILM)组、不典型鳞状上皮细胞(ASCUS)组、低度鳞状上皮内病变(LSIL)组、高度鳞状上皮内病变(HSIL)组,比较不同细胞病理分级患者HPV癌基因E6/E7 mRNA与HPV DNA阳性表达率。根据不同组织病理学分级将患者分为炎症组、宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ组、CINⅡ组、CINⅢ组和CC组,比较不同组织病理学分级患者HPV癌基因E6/E7 mRNA与HPV DNA阳性表达率。分析HPV癌基因E6/E7 mRNA与HPV DNA检测对宫颈癌及癌前CINⅡ级以上病变的诊断价值。结果:不同细胞病理分级患者HPV癌基因E6/E7 mRNA和HPV DNA阳性率比较,NILM组(38.89%和48.61%)低于ASCUS组、LSIL组、HSIL组(64.86%和70.27%,91.67%和91.67%,100.00%和100.00%,P<0.05),ASCUS组(64.86%和70.27%)低于LSIL组、HSIL组(91.67%和91.67%,100.00%和100.00%,P<0.05)。不同组织病理学分级患者HPV癌基因E6/E7 mRNA、HPV DNA及联合检测阳性检出率比较,炎症组(33.33%、42.59%及46.30%)低于CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组、CC组(57.14%、64.29%及66.67%,88.00%、88.00%及100.00%,88.24%、94.12%及100.00%,100.00%、100.00%及100.00%,P<0.05),CINⅠ组(57.14%、64.29%及66.67%)低于CINⅡ组、CINⅢ组、CC组(88.00%、88.00%及100.00%,88.24%、94.12%及100.00%,100.00%、100.00%及100.00%,P<0.05)。HPV癌基因E6/E7mRNA与HPV DNA联合检测与单独检测相比较,虽然在诊断宫颈癌及癌前病变CINⅡ级以上的灵敏度、特异性以及阳性预测值、阴性预测值等方面,差异均无统计学意义(P>0.05),但是联合检测的灵敏度和阴性预测值可达到100.00%。结论:随着宫颈病变细胞病理分级和组织病理学分级的升高,宫颈病变患者HPV癌基因E6/E7 mRNA和HPV DNA阳�
- 刘奇汤俊明
- 关键词：宫颈癌癌前病变癌基因信使核糖核酸脱氧核糖核酸
- 基于PGMY09/11引物的PCR法检测高危型HPV的效果观察被引量：1
- 2014年
- 目的评估基于PGMY09/11引物的PCR法检测高危型人乳头瘤病毒(HPV)效果。方法采用HC II试剂盒和基于PGMY09/11引物的PCR技术检测感染HPV16的50份样品和感染HPV18的50份样品,样品模板DNA分别按照1∶1、1∶2、1∶4、1∶8和1∶16倍比稀释,比较2种方法检测的敏感性和一致性。同时采用HC II试剂盒和基于PGMY09/11引物的PCR技术检测感染单纯疱疹病毒(HSV)和沙眼衣原体(CT)的20份样品及单一感染HPV16和HPV18的10份样品,评估基于PGMY09/11引物的PCR检测HPV的特异性。结果 HC II试剂盒和基于PGMY09/11引物的PCR对1∶1、1∶2稀释的HPV16和HPV18的检出率均为100%;HC II对1∶4稀释的HPV16和HPV18的检出率为36%和46%,但不能检出1∶8和1∶16稀释的HPV16和HPV18样品;基于PGMY09/11引物的PCR对1∶4、1∶8和1∶16稀释的HPV16检出率分别为100%、90%和32%,对1∶4、1∶8和1∶16稀释的HPV18样品检出率分别为100%、86%和40%。HC II试剂盒和基于PGMY09/11引物的PCR对HPV16检测的整体一致性为84.1%(Kappa值为0.674),对HPV18检测的整体一致性为81.7%(Kappa值为0.598)。基于PGMY09/11为引物的PCR方法不能检测HSV和CT合并感染。结论基于PGMY09/11为引物的PCR方法检测出高危型HPV具有较高的敏感性和特异性,与市售HC II试剂盒检测结果具有较高一致性,可用于HPV感染诊断。
- 杜筱英刘奇汤俊明赵彦平
- 关键词：人乳头瘤病毒HCIIPCR
- 慢性乙型肝炎患者阿德福韦酯耐药变异的检测
- 2011年
- 目的采用焦磷酸测序法检测有病毒学和生化学突破的慢性乙型肝炎(CHB)患者阿德福韦酯(ADV)耐药变异情况。方法选取ADV治疗出现病毒学和生化学突破的CHB患者,采用PCR产物焦磷酸测序法检测ADV耐药相关的rtA181V/T和rtN236T变异情况。结果 48例患者焦磷酸测序法检测共确认耐药变异患者14例,变异比例为29.2%(14/48)。ADV耐药变异患者中单独rtA181T/V、rtN236T变异的比例分别为64.3%(9/14)、21.4%(3/14);rtA181T/V、rtN236T混合变异比例为14.3%(2/14)。结论宜兴地区有病毒学和生化学突破的慢性乙型肝炎(CHB)患者阿德福韦酯(ADV)耐药变异以rtA181T/V变异为主,部分为rtN236T变异和tA181T/V、rtN236T混合变异。
- 钱小玉刘奇王学才周玉麟丁伟良
- 关键词：慢性乙型肝炎阿德福韦酯耐药性
- 高分辨率熔解曲线分析技术检测BRAF基因V600E突变方法的建立及初步临床应用被引量：2
- 2017年
- 目的建立高分辨率熔解曲线分析技术(high resolution melting,HRM)检测BRAF基因V600E突变的方法,并探讨其在临床检测中的应用价值。方法用所建方法检测16例甲状腺乳头状癌患者超声引导下细针穿刺抽吸活检标本,并与测序法结果进行比较分析。结果所建HRM检测方法 Ct值与Tm的CV值均较小,重复性好。HRM法BRAF基因V600E突变检测标本的结果与测序法相比较,突变检出率分别为43.75%和40.00%,敏感性为100.00%,特异性为90.00%。结论成功建立的HRM法检测BRAF基因V600E突变敏感性高,特异性强,重复性好,操作简便,节约时间,成本低,适合细针穿刺抽吸活检标本检测BRAF基因V600E突变。
- 汤俊明刘奇王学才乔国洪
- 关键词：甲状腺乳头状癌
- 再生丝素蛋白对小鼠骨髓来源树突状细胞分化、成熟的影响
- 2013年
- 体外研究再生丝素蛋白材料对小鼠骨髓来源树突状细胞分化、成熟的影响,探讨丝素蛋白的免疫原性及作为生物材料的意义。体外分离培养小鼠骨髓来源树突状细胞,接种于铺有再生丝素蛋白生物材料的细胞培养板中培养,在光学显微镜下观察细胞形态;FCM分析细胞表面相关分子的表达。同时用MTT法测小鼠骨髓来源树突状细胞细胞株DC2.4在所选各种材料表面的生长增殖情况。结果表明:(1)再生柞蚕丝素蛋白和家蚕丝素蛋白均可支持小鼠骨髓来源的DCs生长和聚集;(2)MTT结果表明再生柞蚕丝素蛋白与再生家蚕丝素蛋白相比可促进小鼠BM来源DC2.4的增殖;(3)再生柞蚕丝素蛋白和再生家蚕丝素蛋白上的小鼠BM来源DCs表面低表达CD11c、CD40、CD80、CD86、MHC-Ⅱ分子,与空白对照组DCs的表达谱相比无明显差别。再生柞蚕丝素蛋白与再生家蚕丝素蛋白相比,可较好地支持小鼠BM来源DC2.4的生长和增殖;再生丝素蛋白无刺激小鼠BM来源DCs成熟的生物学效应。
- 刘奇於葛华李明忠张学光汤俊明
- 关键词：丝素蛋白树突状细胞骨髓流式细胞术
- 类风湿关节炎患者CD4^+T细胞亚群4-1BB和CD28分子的表达及临床意义被引量：1
- 2009年
- 目的探讨类风湿性关节炎(RA)患者CD4+T细胞4-1BB和CD28的表达及其与疾病的关系。方法根据DAS积分将RA组分为活动期组和稳定期组,用多色荧光流式细胞技术检测CD28、4-1BB在RA组和正常对照组外周血T细胞上的表达。结果与对照组比较,RA组CD4+T细胞增高,CD8+T细胞降低,CD4+CD28-T细胞频数增高(P<0.05)。RA组4-1BB在CD4+T细胞和CD4+CD28-T细胞上的表达明显高于对照组(P<0.05)。活动期组CD4+CD28-T细胞频数和4-1BB在CD4+T细胞上的表达高于稳定期组(P<0.05)。结论共刺激分子CD28在RA患者自身免疫性T细胞中表达减少,而4-1BB表达相应增高,这可能与此类自身免疫反应细胞组织损伤活性增强。
- 赵进良王勤张学光沈静霞刘奇汤俊明
- 关键词：4-1BBCD28
- 构建皮肤组织中特异表达HPV16-E6基因的小鼠模型
- 2015年
- 目的:构建特异在皮肤表达乳头瘤病毒(HPV16)E6基因的真核表达载体,并鉴定其在转基因小鼠体内的表达。方法:通过PCR方法扩增皮肤特异启动子p INV及HPV16-E6,将以上片段通过酶切连接,插入去掉CMV启动子的pc DNA3.1(-)载体,获得dpc DNA3.1(-)-p INV-E6载体;并显微注射制备其转基因小鼠,利用RT-PCR、Western blot及免疫组化技术检测获得的阳性小鼠体内E6的表达水平。结果:dpc DNA3.1(-)-p INV-E6载体测序正确;经鉴定31只实验小鼠中,有2只小鼠携带外源基因,将其与野生型小鼠交配获得的F1代中又有2只阳性小鼠;且在获得阳性小鼠的皮肤组织中RT-PCR检测有E6的转录本,Western blot检测有E6蛋白表达,且免疫组化检测结果显示有E6在皮肤表达且引起皮肤微增生。结论:成功构建了p INV-E6转基因模型小鼠,HPV16-E6基因在小鼠皮肤中特异表达,为进一步研究HPV16-E6在癌症中的作用奠定了基础。
- 汤俊明赵彦平刘奇盛青松吴黎明乔国洪
- 关键词：特异表达
