刘忠英
- 作品数：14 被引量：69H指数：4
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程自动化与计算机技术生物学更多>>
- 人表皮生长因子受体Ⅲ型突变体胞外区的克隆表达和鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的构建含表皮生长因子(EGF)受体Ⅲ型突变体胞外区基因(vⅢECD)的重组质粒并进行表达和鉴定。方法应用PCR方法扩增EGFRvⅢ ECD片段,将其T-A克隆和测序,再将目的基因插入GST融合表达载体pGEX-4T-1中进行表达。采用双酶切鉴定插入序列的正确性,用SDS-PAGE及Western blotting分析融合蛋白的表达。结果测序结果证实插入DNA序列与EGFR胞外区序列完全一致;双酶切鉴定表明,EGFRvⅢ ECD序列已经正确克隆到GST融合表达载体中。SDS-PAGE电泳显示融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中以包涵体形式表达,重组融合蛋白GST-vⅢECD的表达量占菌体总蛋白的15%以上。Western blotting分析证实重组融合蛋白可以被EGFR特异性抗体所识别。结论成功构建了融合表达载体(pGEX-4T-1/vⅢECD),并进行了融合蛋白的诱导表达和鉴定,可进一步用于EGFRvⅢ功能及免疫学研究。
- 张兴梅石玉生刘忠英
- 关键词：表皮生长因子受体胞外区原核表达融合蛋白
- PLGA复合有序多孔胶原蛋白支架制备人工神经修复大鼠坐骨神经缺损被引量：2
- 2017年
- 目的利用聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）复合有序多孔胶原蛋白支架制备人工神经并探讨其修复大鼠坐骨神经缺损的效果。方法通过真空冷冻干燥及定向拉制方法制备有序多孔胶原蛋白支架用以模拟神经束膜，使用PLGA制备导管用以模拟神经外膜，然后在体视显微镜下将有序多孔胶原蛋白支架装入PLGA导管（5：1）制备人工神经。将制备好的64只坐骨神经缺损模型大鼠按随机数字表法分为4组：人工神经组、单纯PLGA组、同种异体神经组、对照组，每组16只，其中人工神经组、单纯PLGA组、同种异体神经组分别用制备的人工神经、PLGA空导管及同种异体坐骨神经桥接缺损神经，对照组则不做移植处理。术后11周时对各组大鼠进行行为学、神经电生理检测及荧光金逆行束路示踪。术后12周时采用苏木素染色及四甲基罗丹明-α-银环蛇毒素（TMR-α-BTX）染色观察靶区肌组织（腓肠肌），采用NF200免疫组化染色观察再生轴突及采用Nissl荧光染色观察再生脊髓前角运动神经元。结果术后11周时同种异体神经组、人工神经组、单纯PLGA组和对照组大鼠运动功能（前后脚间距、脚掌与前进方向的夹角）恢复情况依次变差，各组间差异均有统计学意义（P〈0．05）；神经电生理检测显示，无论是潜伏期还是复合动作电位波幅，均以同种异体神经组的恢复效果最好，人工神经组次之，而单纯PLGA组的潜伏期最长、复合动作电位波幅最小，各组间差异均有统计学意SO（P〈0．05）。术后12周时各组大鼠间肌肉湿重比及肌纤维横截面积比、运动终板面积比较差异均有统计学意义伴0．05），其中人工神经组大鼠的腓肠肌萎缩程度较单纯PLGA组有显著改善，但尚未达到同种异体神经组的水平；NF200免疫组化染色显示．人工神经组移植区可见大量的NF200阳性轴突，但数量略少于同�
- 陈一菁王祥海潘梦婕钱长晖李振林路艳蒙周志涛刘忠英郭家松
- 关键词：人工神经聚乳酸-羟基乙酸共聚物
- Tau蛋白过度表达促进细胞重新进入细胞周期
- 2011年
- 目的探讨tau蛋白过度表达对细胞重新进入细胞周期的影响。方法采用免疫印迹和免疫荧光细胞化学的方法,分别检测稳定转染质粒pcDNA3.1-tau和空载体pcDNA3.1的HEK293细胞(HEK293/tau和HEK293/vec)中tau的表达,用细胞周期抑制剂Aphidicolin处理细胞抑制细胞周期,在Aphidicolin处理20h和撤药6h时应用流式细胞术检测细胞周期。结果 tau蛋白在HEK293/tau细胞中过度表达;Aphidicolin作用20h使62.33%的HEK293/tau和69.98%的HEK293/vec细胞停留在G0/G1期,两者之间差异没有统计学意义;撤药6h时,与HEK293/vec细胞相比,HEK293/tau细胞处于G0/G1期的比率显著减少,处于S期的比率显著增多。结论 Tau蛋白过度表达促进细胞重新进入细胞周期。
- 王海红张琳董为人刘忠英张磊李妍
- 关键词：TAU蛋白细胞周期阿尔茨海默病
- RhoA在损伤脊髓内表达的时空分布(英文)被引量：4
- 2013年
- 目的研究脊髓损伤后不同时期RhoA在脊髓不同部位各种细胞中的表达。方法建立小鼠脊髓全横断性脊髓损伤模型,术后1,3,7,14,28,56,112 d后取材制备脊髓冰冻切片,利用RhoA/NF200、RhoA/GFAP、RhoA/CNPase和RhoA/IBA1双荧光标记免疫组织化学分别显示RhoA在神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞及小胶质细胞中的表达,并对各种细胞中RhoA阳性细胞百分率及RhoA阳性细胞的荧光强度进行定量分析。结果在正常小鼠脊髓内,只有极少数神经元或少突胶质细胞呈RhoA弱阳性表达。脊髓损伤后,神经元、星型胶质细胞及少突胶质细胞中的RhoA阳性率及荧光强度均显著增高并在损伤后第7天达到峰值,随后又逐渐降低,在损伤后112 d接近正常水平。小胶质细胞中RhoA的表达方式略有不同,RhoA阳性率及荧光强度均在第14天达到峰值,随后虽降低但在第112天仍保持较高的水平。结论创伤不仅导致脊髓神经元中RhoA阳性细胞数的明显增加和RhoA表达强度的提高,还可不同程度地增强各种胶质细胞中的RhoA表达。在不同时间段,不同部位及不同细胞内RhoA表达的方式均有不同。
- 康晓宁文锦坤王祥海潘梦婕张玮玮占小多刘忠英吴武田郭家松
- 关键词：脊髓损伤星形胶质细胞少突胶质细胞小胶质细胞RHOA
- 广东省人群α和β地中海贫血的遗传学分析及其预防的研究
- 徐湘民莫秋华廖灿周玉球罗桂香周沫陈培院覃才华谭金荣李莉艳贾世奇钟梅欧阳鸿刘忠英肖维威
- 该项目通过大人群分子流行病学调查，首次详细阐明了广东省人群的地贫携带率、基因频率和突变基因构成比；以广州市妇婴医院和四会市7家医院为平台，在国内率先组织实施了基于医院和行政区模式的前瞻性的人群地贫监控和预防计划，杜绝了7...
- 关键词：
- 关键词：地中海贫血遗传学分析
- 外周血基质干细胞培养鉴定及其向施万细胞的诱导分化被引量：2
- 2010年
- 目的研究体外分离培养大鼠外周血基质干细胞(PBMSCs)并诱导分化为施万细胞的潜能。方法从SD大鼠取血分离培养PBMSCs,采用流式细胞术和免疫细胞化学法对其细胞表面抗原进行检测与鉴定,并用免疫细胞化学法检测BrdU作用4h后BrdU的阳性率。PBMSCs经β-巯基乙醇、全反式维甲酸及复合条件培养基等三个步骤向施万细胞定向诱导后,用免疫细胞化学法检测S-100和P75的表达。结果流式细胞术显示培养获得的PBMSCs中CD11b、CD29、CD45、CD49d、CD90及CD106的阳性率分别为19.97%、99.96%、46.62%、5.46%、71.22%和10.76%。免疫细胞化学法显示PBMSCs呈CD34阴性,而BrdU阳性率为(34.1±4.3)%。PBMSCs经定向诱导后S-100和P75的阳性率分别是(75.2±4.1)%和(78.9±4.6)%。结论从外周血分离获得的干细胞符合基质干细胞的特性,这些细胞在特定的条件下可诱导分化成为施万细胞。
- 戴翔占小多江沿文汤银娟张丽华刘忠英董为人郭家松
- 关键词：外周血基质干细胞施万细胞分化
- 大鼠磷脂酶C-γ1前体mRNA剪接的初步鉴定
- 2007年
- 目的探讨在大鼠中是否存在磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)选择性剪接变异体的表达及其可能意义。方法针对在人中已发现的选择性剪接位点(即第30内含子的3'末端与第31外显子交界处)自行设计引物,将大鼠RNA逆转录为cDNA后,再用该对引物进行PCR扩增及序列测定。用此方法初步筛查了大鼠包括胚胎时期、出生早期、成年时期6种脏器组织心、肝、肺、肾、脑和眼球样品共21份。结果在大鼠中未发现与人相似的第一种剪接方式PLC-γ1a(NM_002660)。结论(1)由于不同物种之间的差异,在大鼠中可能不存在与在人类中已发现的PLC-γ1前体mRNA相似的选择性剪接方式,在大鼠中PLC-γ1转录后的剪接主要以与人类相似的第二种剪接方式(PLC-γ1b)为主。(2)在大鼠中PLC-γ1的选择性剪接位点可能与人不同而位于其他位点。
- 刘忠英罗深秋赵永忠
- 关键词：磷脂酶C-Γ1选择性剪接MRNA
- 探讨阿糖胞苷在原代大鼠海马神经元培养中的纯化方法被引量：6
- 2015年
- 目的探讨阿糖胞苷(Ara-C)在原代大鼠海马神经元早期纯化培养中的优化方法。方法新生1d SD大鼠海马神经元原代培养48 h后,不同浓度(0、2.5、5.0、7.5、10 mmol/L)Ara-C处理0、6、12、24 h,光镜下观察细胞形态,采用MTT检测细胞活性,并通过细胞形态学分析神经元纯度,筛选出最优纯化浓度与时间;采用免疫荧光及Western blot技术检测微管相关蛋白2(MAP2)进一步检测神经元纯度,台盼蓝染色分析神经元存活率。结果大鼠原代海马神经元培养48 h,5 mmol/L Ara-C处理24 h得到的神经元纯度及活性最佳;MAP2免疫荧光染色结果显示,Ara-C处理组神经元纯度为(74.28±10.13)%,显著高于对照组(34.82±8.15)%(P=0.000);Western Blot结果显示Ara-C处理组MAP2蛋白水平显著高于对照组(P=0.008);台盼蓝染色显示Ara-C处理组与对照组间海马神经元存活率无差异,分别为(93.2±3.82)%和(95.6±2.37)%(P=0.109)。结论在大鼠原代海马神经元的早期培养过程中,5 mmol/L Ara-C处理24 h得到的海马神经元的纯度与活性最佳。
- 李昂晏芳李振林刘忠英张琳董为人牛红心王海红
- 关键词：阿糖胞苷海马神经元纯化培养存活率
- 磷脂酶C-γ1在大鼠发育过程中的mRNA表达及其前体mRNA剪接的初步探讨
- 该实验首先以大鼠为研究模型,利用半定量逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测及分析大鼠在胚胎时期、出生后早期、成年时期各重要脏...
- 刘忠英
- 关键词：磷脂酶C-Γ1逆转录聚合酶链反应信号转导选择性剪接
- 文献传递
- 基于网络的数字组织切片在组织学实验教学中的应用被引量：30
- 2009年
- 近年来,随着计算机技术、网络技术,在形态学的实验课教学方面,显微数码互动教学给显微镜下微观世界教学带来了革命性的变革,在一定程度上实现了信息资源的共享。但这种共享的教学模式是局限于实验室里的共享,缺乏延伸性,不能充分满足学生主体地位和创造性的发挥。而基于网络的数字切片(或称虚拟的显微镜术)克服了显微数码互动教学系统固有的缺陷,给传统的形态学教学带来全新模式,突破了显微互动系统时间和空间上的局限性。若能将显微互动系统和基于网络的数字切片浏览系统有效的结合,将能充分利用组织胚胎学实验教学过程中形态学科的特点,更大限度的发挥学生主体和主动精神,开拓素质教育资源。除此之外也能为临床诊断、科学的研究、数字信息管理等提供了有效工具和交流平台。
- 陈英华董为人俞新华汪棚生刘忠英张琳
- 关键词：形态学实验课教学数字切片
