刘成科
- 作品数：13 被引量：30H指数：4
- 供职机构：浙江大学农业与生物技术学院生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省科技厅资助项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 百合无症病毒单克隆抗体制备及快速检测方法的建立被引量：7
- 2005年
- 百合无症病毒(Lily symptomles virus,LSV)属于线形病毒科(Flexiviridae)、麝香石竹潜隐病毒属 (Carlavirus),是危害百合的主要病毒之一。LSV 的寄主范围很窄,只限于百合科(Liliaceae)植物, 单独侵染百合常为隐症,与其他病毒复合侵染时产生花叶、畸形、坏死斑等症状,严重影响百合切花的经济价值。近年来,我国百合种植规模不断扩大, 病毒病发生日趋严重。为了防止病毒随种球扩散与传播,迫切需要建立灵敏、快速的病毒检测方法。我们在百合病毒分子生物学研究的基础上,首次成功制备了LSV单克隆抗体,建立了以单抗为核心的间接抗原包被ELISA(ACP-ELISA)、三抗体夹心ELISA(TAS-ELISA)、免疫斑点法(Dot-ELISA) 和组织印迹法(Tissue blot-ELISA)等快速检测 LSV的方法。
- 刘成科吴建祥李燕宏洪健周雪平
- 关键词：百合无症病毒单克隆抗体ACP免疫斑点法病毒检测ELISA
- 蚕豆萎蔫病毒2号分离物PV131和P158侵染寄主植物的细胞病理比较观察被引量：4
- 2009年
- 透射电镜观察比较了蚕豆萎蔫病毒2号(BBWV-2)分离物PV131和P158侵染昆诺藜(Chenopodium quinoa)和蚕豆(Viciafaba)的细胞超微结构变化。结果显示:受PV131分离物侵染的昆诺藜叶肉细胞质中膜结构大量增生,形成有膜状结构、大小泡囊及电子致密物质的特殊膜增生区;病毒粒子散布在细胞质中,形成大块结晶体和管状结构,该管状结构直径约75nm,横切面由9个病毒粒子组成;受PV131侵染的蚕豆叶肉细胞中也形成膜增生区和管状结构,未见病毒结晶体。受P158分离物侵染的昆诺藜和蚕豆叶肉细胞病变情况与PV131分离物相似,形成膜增生区和相同的管状结构,在蚕豆叶肉细胞中也未观察到病毒结晶体。上述结果表明:2个BBWV-2分离物虽然在不同寄主植物上引起的细胞病变程度有差异,但其细胞病理学特征是由病毒基因结构所决定,与寄主的种类无关。
- 刘成科李燕宏王卫兵洪健周雪平
- 关键词：细胞病理学电子显微镜
- 内质网和细胞骨架在植物病毒细胞内转运中的作用被引量：2
- 2008年
- 植物病毒的侵染循环是一个病毒-寄主互作过程。内质网和细胞骨架在病毒细胞内转运中起着重要调节作用,不仅协助病毒从复制位点转运到细胞边缘胞间连丝处,还可能介导多余病毒因子的降解。针对植物细胞内质网和细胞骨架在烟草花叶病毒等植物病毒细胞内转运过程中所起的作用进行了综述。
- 刘成科洪健周雪平
- 关键词：内质网细胞骨架植物病毒
- 抗百合无症病毒的单克隆抗体及其用途
- 本发明公开了一种抗百合无症病毒的单克隆抗体及其用途。用提纯的百合无症病毒免疫的BALB/C鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合，经筛选克隆，获得4株能稳定传代并分泌抗百合无症病毒(LSV)单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞...
- 吴建祥洪健刘成科周雪平叶美琴
- 文献传递
- 蚕豆萎蔫病毒2号VP37蛋白在细胞内的定位
- 蚕豆萎蔫病毒2号(broad bean wilt virus 2,BBWV 2)属豇豆花叶病毒科(Comoviridea)蚕豆病毒属 (Fabavirus),二分体基因组分别编码两个多聚蛋白,最后由 RNA1编码的蛋白酶...
- 刘成科洪健
- 关键词：蛋白质定位
- 文献传递
- 单抗I-ELISA和TAS-ELISA检测百合无症病毒的研究被引量：7
- 2006年
- 以抗百合无症病毒(Lily symptom less virus,LSV)的单克隆抗体为核心,建立了间接ELISA(I-ELISA)和三抗体夹心ELISA(TAS-ELISA)的检测方法。I-ELISA检测体系中,病叶汁液和单克隆抗体腹水的工作浓度分别为1∶20和1∶6 000,对病叶汁液的检测灵敏度达到了1∶2 560,可检测到提纯病毒绝对量为1.35 ng。TAS-ELISA检测体系中捕获抗体和单克隆抗体腹水的工作浓度分别为1∶200和1∶6 000,检测病叶汁液的灵敏度达到了1∶5 120,对于提纯病毒可检测到0.68 ng。使用美国Agd ia公司双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测试剂盒对病叶汁液的检测灵敏度为1∶2 560,提纯病毒检出量1.35 ng。用3种ELISA方法检测了采自浙江省丽水市的46个田间样品,I-ELISA、TAS-ELISA和DAS-ELISA测出的阳性样品数分别为19、21和18个,阳性率为41%、46%和39%。灵敏度检测和田间样品检测结果显示,TAS-ELISA的灵敏度高于DAS-ELISA和I-ELISA。相同样品I-ELISA所测出的OD405值和P/N值普遍高于DAS-ELISA,表明LSV单抗比多抗具有更强的特异性和更高的灵敏度。
- 刘成科吴建祥洪健周雪平叶美琴
- 关键词：百合无症病毒TAS-ELISADAS-ELISA
- 蚕豆萎蔫病毒2号VP37蛋白在BY-2细胞内的定位被引量：2
- 2009年
- 将绿色荧光蛋白(GFP)连接于蚕豆萎蔫病毒2号(Broad bean wilt virus2,BBWV-2)VP37蛋白的N-端,构建融合基因GFP-VP37,用农杆菌法在BY-2悬浮细胞内进行表达,激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的分布。结果显示:GFP-VP37主要定位于细胞核的周围呈网络状,并在细胞边缘形成点状结构;ER-tracker标记显示VP37在细胞内与内质网共定位;电镜免疫金标记显示VP37蛋白主要定位在细胞质中;用BFA处理转染细胞后,VP37在细胞质及细胞边缘的定位受到抑制。推测内质网参与VP37的细胞内转运和分布。
- 刘成科洪健孟春梅叶露飞周雪平
- 关键词：绿色荧光蛋白细胞定位
- 烟草BY-2细胞和蚕豆叶肉细胞原生质体微丝骨架及latrunculin B处理对其分布的影响被引量：2
- 2010年
- 用酶解法分别制备烟草BY-2悬浮培养细胞和蚕豆叶肉细胞的原生质体,应用激光共聚焦显微镜观察经TRITC-鬼笔环肽荧光染色的2种原生质体的微丝骨架空间分布,以及观察用10和20μmol·L-1微丝抑制剂latrunculin B分别处理2种原生质体后对其分布的影响.结果表明:激光共聚焦显微镜清楚地显示出2种细胞原生质体中微丝精细排列的均匀网络结构;共聚焦显微成像显示了随latrunculin B处理时间的延长微丝解聚和微丝骨架分布的动态过程.建立原生质体制备、微丝骨架荧光染色、latrunculin B处理及激光共聚焦显微观察的实验体系为进一步研究植物微丝骨架的功能奠定了基础.
- 叶露飞刘成科孟春梅洪健
- 关键词：原生质体微丝骨架LATRUNCULIN激光共聚焦显微镜
- 百合无症病毒单克隆抗体的制备及检测应用被引量：10
- 2005年
- 用百合无症病毒(Lilysymptomlessvirus,LSV)免疫的BALBC鼠脾细胞与SP20鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得4株能稳定传代并分泌抗LSV单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞(2A2、5H9、5H2和5E12),并分别制备它们的单抗腹水。4株单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10-6,5H9和5E12的抗体类型及亚类均为IgG1,而2A2和5H2均为IgG3,4株单克隆抗体的轻链均为κ链。利用单克隆抗体建立了抗原包被间接ELISA(ACP-ELISA)检测LSV的方法。病叶作1300倍稀释、提纯LSV病毒浓度为18ngmL(每孔的病毒绝对量为1.8ng)时,该方法仍能检测到病毒。利用ACP-ELISA检测了田间样品,发现LSV在百合上发病很普遍。
- 吴建祥刘成科洪健刘文洪叶美琴
- 蚕豆萎焉病毒2号VP37:GFP融合基因构建及在植物内的瞬时表达
- 蚕豆萎焉病毒2号(Broad bean wilt virus 2,BBWV 2)的RNA2编码运动蛋白 VP37／53和外壳蛋白大亚基(LCP)、小亚基(SCP),在寄主体内以完整病毒粒子的形式通过VP37所形成的管状结...
- 刘成科洪健周雪平
- 文献传递
