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刘永东: 作品数：57 被引量：79H指数：6; 供职机构：中国科学院过程工程研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>; 相关领域：生物学化学工程医药卫生理学更多>>

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聚乙二醇-葡激酶偶联物及其制备方法和应用: 本发明涉及生物制药领域，具体地，本发明涉及一种聚乙二醇-葡激酶偶联物及其制备方法和应用。所述偶联物是葡激酶N端连接有聚乙二醇共价偶联物，其中，通过聚乙二醇修饰剂将聚乙二醇共价连接到葡激酶的N端，所述的聚乙二醇修饰剂优选为...; 苏志国马光辉王俊刘永东胡涛; 文献传递

聚乙二醇20k修饰与转铁蛋白偶联睫状神经营养因子的生物活性对比研究被引量：1: 2017年; 为了延长重组睫状神经营养因子在体内的保留半衰期,基于CNTF中天然的游离半胱氨酸残基,在前期工作中采用聚乙二醇修饰和转铁蛋白偶联的两种方式对CNTF进行了改造。此后又采用常规分析手段对PEG20k-CNTF和Tf-PEG5k-CNTF进行对比表征。高效凝胶过滤和动态光散射分析结果显示两者拥有相近的表观分子体积。细胞试验结果显示两种耦合物的活性分别下降至未修饰CNTF的50.6%和65.8%。抗体CNTF抗体亲和力结果显示PEG20k修饰后亲合力下降至原蛋白的3.8%,转铁蛋白偶联后保留89.9%原蛋白亲合力。药代动力学结果显示PEG20k-CNTF和Tf-PEG5k-CNTF在SD大鼠血液中的保留半衰期分别为5.34±0.26和8.65±0.60小时,与未修饰rh CNTF相比延长了约21.4倍和34.6倍。药效学结果显示在每周两次每次1.0 mg/kg(rh CNTF等量)的给药频率和剂量下,PEG20k-CNTF比Tf-PEG5k-CNTF更显著地降低实验小鼠体重。; 迟胜男李增兰张纯殷爽冯翠王祺王祺刘永东; 关键词：聚乙二醇修饰睫状神经营养因子减轻体重

疏水层析分离正确折叠与错误折叠的复合干扰素被引量：2: 2005年; 采用疏水层析纯化重组复合干扰素,成功去除了复性过程中产生的错误折叠体、聚集体及杂蛋白,并考察了配基类型、盐浓度、pH值和流速对疏水层析纯化效果的影响,结果表明采用ButylSepharose 4FastFlow、硫酸铵初始浓度0 8mol L、缓冲液pH值8 3、线流速为90cm h时疏水层析纯化效果最佳,最终目标蛋白反相高效液相色谱检测纯度达到99 6 % ,还原及非还原型SDS PAGE电泳均呈单一条带,其比活为2 3×10 9IU mg,回收率为36 7%。; 赵荣志刘永东王芳薇李京京夏新苏志国

聚乙二醇-多孔聚（甲基丙烯酸环氧丙酯-二乙烯基苯）微球作为蛋白质复性介质的应用: ＜正＞多孔共聚物聚甲基丙烯酸环氧丙酯-二乙烯基苯[Poly（Glycidyl Methacrylate-Divinylbenzene）, P（GMA-DVB）]微球,由于聚合物的疏水骨架,特别是苯基,与蛋白质之间存在有强...; 陈净刘永东苏志国; 关键词：聚乙二醇溶菌酶复性; 文献传递

重组人血清白蛋白生产工艺研究进展被引量：13: 2003年; 人血清白蛋白是一种重要的临床药物 ,人源血浆白蛋白可能会传染病原体将逐步被重组白蛋白所代替。对用巴斯德毕赤酵母生产重组人血清白蛋白的表达系统、发酵方法。; 刘永东王云山苏志国; 关键词：巴斯德毕赤酵母重组人血清白蛋白发酵分离纯化

白蛋白结合肽-多柔比星耦合物的设计、制备、表征及初步评价: 2017年; 为了改善多柔比星在血液中的循环半衰期,基于白蛋白在血浆中含量丰富、性质稳定、半衰期持久的特点,通过大肠杆菌体系重组表达了源于细菌表面蛋白中白蛋白结合肽段,并建立了纯化工艺,获得了纯度高于95%的重组白蛋白结合多肽,并证明重组多肽在体外能够迅速地与人血清白蛋白结合。通过与DOXO-EMCH分子化学耦联,制备获得重组白蛋白结合肽-多柔比星耦合物。A549细胞毒力实验结果显示耦合物的IC50浓度升高,药代动力学结果显示重组白蛋白结合肽能够显著延长多柔比星在血液中的循环半衰期,相对于多柔比星或DOXO-EMCH分别提高了5.6倍和3.8倍。荷瘤小鼠肿瘤生长抑制实验结果显示耦合物的抗肿瘤效力得到提升。证明了基于白蛋白结合机制可为小分子药物长效设计提供新的思路。; 刘立平张纯殷爽王祺张耀余蓉刘永东苏志国; 关键词：多柔比星血清白蛋白长效性抗肿瘤

EV71多表位抗原亲和纯化及类病毒颗粒胞外自组装被引量：1: 2016年; 利用肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白优势表位肽段构建融合蛋白抗原能有效抑制病毒感染,有望成为继灭活病毒后更为安全有效的疫苗品种。该融合蛋白能通过原核体系有效表达但形成无序包涵体,采用常规层析介质难以实现目标蛋白与宿主杂质的有效分离,阻碍了对该抗原蛋白进行全面临床前活性及安全性评价。在原有融合蛋白抗原N端插入组氨酸标签,对形成的包涵体变性溶解后直接采用镍金属螯合亲和介质进行分离纯化,获得了纯度大于95%的抗原纯品,目标蛋白收率46.8%。采用透析方式脱除纯化样品中高浓度脲,发现直接透析至无脲的缓冲液中蛋白质大量沉淀,而先稀释至2mol/L脲的缓冲液中然后用G25脱盐柱完全脱除脲则无任何沉淀形成,获得近100%的蛋白质收率。透射电镜分析最终样品发现融合蛋白形成了10nm左右粒径均一的类病毒蛋白颗粒,且在p H 8.0的磷酸盐缓冲液中保持稳定。该研究结果为将EV71融合蛋白抗原发展为安全有效且低成本的手足口疫苗奠定了基础。; 薛玲刘江宁张耀张纯王祺秦川刘永东苏志国; 关键词：肠道病毒71型

转铁蛋白-PEG-睫状神经营养因子的制备及其生物活性评价被引量：3: 2016年; 为了实现在体内更持久的药效作用,根据睫状神经营养因子CNTF第17位为游离半胱氨酸残基,而转铁蛋白Tf无游离半胱氨酸的特点,采用N-羟基琥珀酰亚胺-聚乙二醇5K-马来酰亚胺(NHS-PEG5k-MAL)作为偶联剂,实现了两者定点偶联,然后结合蛋白自身特性制定纯化方法,制备获得纯度高于90%的转铁蛋白-聚乙二醇5k-睫状神经营养因子(Tf-PEG5k-CNTF)耦合物。高效凝胶色谱和动态光散射分析显示耦合物的表观分子体积大于两蛋白之和。细胞试验结果显示耦合物的活性下降至原蛋白的65.8%。大鼠药代动力学试验显示Tf-PEG5k-CNTF耦合物在体内的代谢半衰期延长至8.2小时,与CNTF原蛋白相比提高了约17倍。小鼠动物试验显示在每周2次的给药频率,每次1.0 mg/kg的剂量下,Tf-PEG5k-CNTF能更为显著地影响小鼠对食物摄入量和减轻体重。因此,转铁蛋白偶联技术可用于脑部靶向蛋白药物的长效递送。; 殷爽冯翠张纯王祺王健余蓉刘永东苏志国; 关键词：转铁蛋白睫状神经营养因子减肥

一种复合干扰素的纯化方法: 本发明提供一种复合干扰素的纯化方法，包括如下步骤：将经常规方法发酵并收集的包涵体变性得到的复合干扰素，边搅拌边加入缓冲液D，然后在可以透过分子量50000以下的透析袋中，于缓冲液E中透析，进行复合干扰素蛋白质的复性；分出...; 刘永东李京京王芳薇苏志国; 文献传递

一种重组病毒样颗粒及其制备方法和用途: 本发明提供了一种重组病毒样颗粒及其制备方法和用途，所述方法包括如下步骤：将表达重组病毒衣壳蛋白的细胞进行发酵后收集发酵产物，采用2‑6M的脲溶液溶解解聚，胞外二次组装得到重组病毒衣壳蛋白的完整病毒样颗粒。本发明的重组乙肝...; 刘永东苏志国张耀; 文献传递

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