吴健
- 作品数：19 被引量：68H指数：5
- 供职机构：北京大学肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肿瘤及胚胎组织特异表达蛋白65与低密度脂蛋白受体相关蛋白关联蛋白的结合被引量：1
- 2005年
- 目的:寻找与肿瘤及胚胎组织特异表达蛋白65(cancerandembryoexpressionprotein65,CEP65)相互结合的蛋白分子,为研究CEP65在肿瘤发生中的作用机制提供线索。方法: 以CEP65为诱饵蛋白,通过酵母双杂交方法, 筛选人胚胎组织cDNA表达文库。将获得的阳性克隆cDNA片段分别克隆到原核和哺乳细胞表达质粒,通过GSTpull down和免疫共沉淀对相互作用蛋白作进一步验证。结果: 筛选到能与CEP65相互结合的低密度脂蛋白受体相关蛋白产关联蛋白(lowdensitylipoproteinreceptor relatedprotein associatedprotein1,RAP)。将分别在原核和哺乳细胞中表达的RAP与CEP65进行GSTpull down实验,结果显示,原核表达的GST RAP可以与His CEP65相互结合,而在哺乳细胞共表达的GST CEP65和Myc RAP也能相互结合。结论:RAP可以和CEP65相结合,CEP65有可能通过与RAP相互作用,在肿瘤的浸润、转移及增生中发挥其功能。
- 靳更林张建芝苏荣刘晓颖吴健孟麟寿成超
- 关键词：低密度脂蛋白受体相关蛋白胚胎组织CDNA表达文库哺乳细胞CDNA片段诱饵蛋白
- 早期乳腺癌患者手术、化疗后血清HER-2/neu ECD水平变化被引量：3
- 2006年
- 目的:探讨乳腺癌患者手术或化疗后血清HER-2/neuECD水平变化的临床意义。方法:双抗体夹心ELISA法检测早期乳腺癌患者及其配对手术、化疗前后血清HER-2/neuECD水平,进行统计分析。结果:82例乳腺癌患者手术后,血清HER-2/neuECD水平90.24%(74/82)下降,3.66%(3/82,C.V≤5%)未变化,6.10%(5/82)升高;46例乳腺癌患者化疗后HER-2/neuECD水平升高组(15/46)对化疗的反应率73.33%(11/15)与HER-2/neuECD水平非升高组(HER-2/neuECD水平下降或不变,C.V≤5%,31/46)对化疗的反应率77.42%(24/31)无差别(P>0.05)。结论:检测乳腺癌患者血清HER-2/neuECD水平变化对预后可能具有一定的临床提示意义。
- 刘彩云吴健杨蔚孙素莲寿成超
- 关键词：血清HER-2/NEU乳腺癌ELISA手术化疗
- 血管内皮细胞生长因子受体Flt-1结合小肽的融合表达及活性鉴定被引量：3
- 2002年
- 血管内皮细胞生长因子 (VEGF)通过结合其酪氨酸激酶受体KDR、fms样酪氨酸激酶 1(Flt 1)调节新生血管形成 ;筛选能封闭VEGF结合Flt 1的小肽 ,可以通过阻断肿瘤血管形成 ,抑制实体瘤生长 .将从噬菌体 12肽库中筛选获得的 2个能与Flt 1结合的阳性噬菌体克隆 (F5 6和F90 )十二肽DNA(36bp)克隆到表达载体pQE4 2中 ,在大肠杆菌M15中稳定表达二氢叶酸还原酶融合蛋白(DHFR F5 6 F90 ) ,经变性、复性后得到纯度达 90 %的可溶性蛋白 .ELISA检测表明 ,DHFR F5 6 F90能结合可溶性受体sFlt 1和血管内皮细胞 ;12 5I VEGF竞争抑制实验显示 ,DHFR F5 6能竞争抑制VEGF同可溶性受体sFlt 1结合 .结果提示 ,F5 6可能是VEGF受体Flt 1的有效拮抗剂 。
- 雷和田吴健杨峻山寿成超
- 关键词：血管内皮细胞生长因子受体VEGFR小肽VEGFR-1活性鉴定
- 肿瘤及胚胎组织特异表达蛋白CEP65相互作用蛋白的筛选与鉴定
- 2004年
- CEP6 5蛋白 (cancerandembryoexpressionprotein 6 5 )为肿瘤单克隆抗体 3H11所识别的抗原分子 ,RT PCR及RNA印迹检测表明 ,CEP6 5蛋白表达于肿瘤及胚胎组织 .为了研究CEP6 5在肿瘤发生中的作用机制 ,以CEP6 5为诱饵蛋白 ,通过酵母双杂交体系筛选人胚胎组织cDNA表达文库 .从 5 2× 10 6个克隆中筛选得到 14个阳性克隆 ,并在酵母体系中通过不同方法得到验证 .在此基础上 ,选取在双杂交中作用明显的 5 1号克隆 ,与CEP6 5作GSTpull down实验 ,结果证明 ,CEP6 5与 5 1号阳性克隆蛋白确能相互作用 .生物信息学分析发现 ,CEP6 5与 5 1号阳性克隆蛋白相互作用 。
- 靳更林孙玉宁张建芝马泓孟麟吴健寿成超
- 关键词：单克隆抗体酵母双杂交体系相互作用
- 利用生物芯片技术探讨支原体与胃癌的关系被引量：15
- 2002年
- 目的 探讨支原体感染与胃癌的相关性以及胃癌细胞感染支原体后基因表达的变化。方法 建立组织芯片制备体系 ,制备包含 10 5例胃癌组织、10 1例胃癌手术切缘正常组织和 6 2例胃良性疾患的组织芯片。以猪鼻支原体特异抗体PD4为一抗 ,利用免疫组织化学的方法对组织芯片进行染色 ,判断猪鼻支原体感染的分布情况。借助基因芯片分析人胃癌细胞系MGC80 3细胞被支原体感染后基因表达水平的变化。结果 被测标本中 ,5 4 1% (5 3 98)的胃癌组织存在猪鼻支原体感染。胃癌标本正常切缘组织感染率 5 1 7(45 87)。而胃良性疾患组织感染率仅为 15 8% (9 5 7) ,与胃癌组织相比差异有显著意义 (P =0 0 0 1)。感染率与肿瘤细胞分化程度成正比。人胃癌细胞MGC80 3细胞在感染支原体后 ,在被检测的 4 80 0 0个基因位点中共有 4 0 9个基因的表达水平发生明显改变。部分凋亡、细胞粘附相关基因的表达受到抑制。结论 胃癌组织中猪鼻支原体的感染率明显高于胃良性疾患组织 ,提示猪鼻支原体感染与胃癌的发生发展可能存在一定的相关性。猪鼻支原体的感染明显影响胃癌细胞的基因表达 ,提示猪鼻支原体的感染可能会影响胃癌细胞的生物学行为。
- 张霁王怡寿成超徐光炜陈欣吴健谢玉泉李吉友苏启深季加孚
- 关键词：生物芯片技术支原体胃癌
- 抗人p185^(erbB2)人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建表达及活性测定被引量：3
- 2004年
- 目的 :HER2 /neu过度表达见于多种恶性肿瘤。作为肿瘤抗原 ,p185 erbB2 是一个理想的肿瘤治疗靶点。本实验在既往工作基础上 ,构建嵌合型抗p185 erbB2 单克隆抗体 (单抗 )的真核表达载体 ,并在CHO dhfr-细胞中表达 ,从而降低鼠源性抗体的免疫原性 ,为进一步的应用研究奠定基础。方法 :RT -PCR扩增p185 erbB2 单抗 1 2的轻、重链可变区基因 ,插入嵌合抗体真核表达载体pWSD2中 ,脂质体转染CHO dhfr-细胞。经RT -PCR、间接ELISA、Westernblot检测人 -鼠嵌合抗体的表达水平 ,用ELISA、免疫沉淀方法对嵌合抗体的亲和力和特异性进行初步鉴定。此外 ,采用MTT比色法检测嵌合抗体对高表达p185 erbB2 的乳腺癌细胞系SKBR3的生长抑制作用。结果 :用RT -PCR、间接ELISA、Westernblot方法证明人 -鼠嵌合抗体在CHO dhfr-细胞中表达 ;ELISA检测提示嵌合抗体与高表达p185 erbB2的细胞反应阳性 ,与低表达p185 erbB2 的细胞反应阴性 ;免疫沉淀结果表明嵌合抗体可与p185 erbB2 分子特异性结合 ;MTT比色法检测表明嵌合抗体对过表达p185 erbB2 的乳腺癌细胞SKBR3的生长有抑制作用。结论 :CHO dhfr-细胞表达的人 -鼠嵌合抗体可与p185 erbB2 特异性结合 ,并可抑制高表达p185 erbB2 的肿瘤细胞生长 ,表明抗人p185 erbB2 人
- 姜北海刘文斌孟麟吴健寿成超
- 关键词：人-鼠嵌合抗体CHOHER2/NEU重链可变区
- 人血清HER-2/neu胞外域蛋白检测方法的建立被引量：7
- 2006年
- 目的建立乳腺癌患者血清HER-2/neu胞外域蛋白(ECD)水平检测方法,为乳腺癌治疗及预后判断提供参考。方法以识别HER-2/neu不同抗原表位的2种抗HER-2/neu单克隆抗体(McAb)为基础,建立可定量检测血清HER-2/neuECD水平的双抗夹心酶联免疫吸附试验法(ELISA)。结果本研究建立的HER-2/neuECD水平检测ELISA所用试剂[包括抗HER-2/neuMcAb5A12包被的酶标板、辣根过氧化物酶(HRP)标记的HER-2/neuMcAb1-2及HRP底物四甲基联苯胺(TMB)溶液]在1年内保持稳定;批内、批间变异系数分别为3·6%±4·2%、6·9%±3·3%;与HER-2ECD同源性很高的人表皮生长因子受体(EGFR/HER-1)ECD不发生交叉反应。自制ELISA试剂盒与BenderMedsystems试剂盒检测人血清HER-2ECD水平的相关性较好(r>0·75)。健康人群(20名)与乳腺癌患者(140例)血清HER-2ECD阳性率之间的差异无统计学意义(P>0·05),但与转移乳腺癌患者(10例)血清HER-2ECD阳性率之间差异有统计学意义(P<0·01)。结论本研究建立的HER-2/neuECD双抗夹心ELISA检测方法特异、稳定、可靠,可定量检测乳腺癌患者血清HER-2/neuECD水平。
- 刘彩云杨蔚杜红吴健孙素莲寿成超
- 关键词：乳腺肿瘤酶联免疫吸附测定
- 猪鼻支原体P37蛋白相互作用蛋白的筛选与鉴定被引量：4
- 2004年
- 既往工作表明 ,胃癌组织中有较高的猪鼻支原体感染率 ,猪鼻支原体的主要膜蛋白P37能够诱导外周血单核细胞释放肿瘤坏死因子 (TNF) .为了深入研究P37的作用机制 ,利用酵母双杂交系统筛选与P37蛋白相互作用的蛋白质分子 .首先 ,将编码P37全长的cDNA克隆到 pGBKT7载体中 ,构建“诱饵”表达载体 pGBKT7 p37,以此筛选人胎盘组织cDNA表达文库 .在 2 6× 10 6个克隆中 ,筛选到一株能与P37相互作用的阳性克隆 ,序列测定表明 ,该阳性克隆编码人视网膜色素上皮细胞蛋白 (Norpeg蛋白 ) .在此基础上经GST PullDown实验 ,进一步证实Norpeg蛋白确能与P37相互作用 ,为进一步研究P37对细胞的作用机制奠定了基础 .
- 孙玉宁靳更林张建芝吴健寿成超
- 关键词：酵母双杂交
- 血管内皮生长因子受体Flt-1结合小肽抑制肿瘤生长的实验研究被引量：5
- 2002年
- 目的 检测从十二肽库中筛选获得的能与血管内皮细胞生长因子 (VEGF)受体Flt 1结合的小肽的生物学活性。方法 免疫细胞化学方法检测小肽融合蛋白DHFR F5 6 /F90与人脐静脉内皮细胞的结合活性 ;鸡胚尿囊膜血管增生抑制实验检测DHFR F5 6 /F90能否抑制鸡胚新生血管形成 ;裸鼠成瘤实验检测DHFR F5 6 /F90对荷瘤裸鼠中肿瘤的生长抑制 ;免疫组织化学方法检测DHFR F5 6 /F90能否定位于肿瘤组织。结果 小肽融合蛋白DHFR F5 6 /F90能与人脐静脉内皮细胞结合 ,DHFR F5 6能抑制鸡胚尿囊膜新生血管的形成 ,且DHFR F5 6能与肿瘤细胞结合 ,促进肿瘤组织坏死及显著抑制肿瘤生长。结论 十二肽F5 6是VEGF结合Flt 1的有效拮抗剂 ,具有抑制VEGF诱导的新生血管形成而抗肿瘤生长和转移的潜在应用前景。
- 雷和田寿成超吴健刘晓颖何洛文刘美生郭琦姜北海
- 关键词：血管内皮生长因子受体血管内皮肽库肿瘤血管生成FLT-1抑瘤作用
- 免疫脂质体与人胃癌细胞的相互作用被引量：1
- 1991年
- 我们把抗人胃癌细胞M85的单克隆抗体3Hll插入脂质体的脂双层做成免疫脂质体,研究了这些免疫脂质体与M85细胞的相互作用.结果表明,M85细胞对免疫脂质体的吸收与温育时间、温度密切相关.在37℃温育10小时,细胞吸收的免疫脂质体的量是在4℃时的7倍左右.37℃温育5小时,靶向脂质体结合在M85靶细胞上的量是非靶向脂质体的2倍多;与非靶细胞—人皮肤成纤维细胞Fb32的结合量只有与M85靶细胞结合量的1/6.游离单抗3Hll能够抑制靶向脂质体与靶细胞的结合,而专一性与3Hll抗体不同的单抗3G9则不能.NH_4Cl和NaN_3等内吞作用抑制剂使靶细胞吸收免疫脂质体的量分别减少58%和79%.与此同时,NH_4CI还能抑制包入脂质体的ADM,而不能抑制游离ADM的细胞毒作用.因此我们的结论是,3Hll免疫脂质体能够与靶细胞专一地结合,并把所荷载的物质主要经内吞作用输送到细胞内,杀伤靶细胞.用荧光显微镜对与荧光免疫脂质体温育的M85细胞进行的形态观察也支持上述结论.
- 胡兰荣温伟郑昌学吴健董志伟
- 关键词：免疫脂质体胃癌癌细胞
