吴发兴
- 作品数：127 被引量：725H指数：13
- 供职机构：中国动物卫生与流行病学中心更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划科技基础性工作专项广西壮族自治区科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 兔源猪瘟脾淋苗与牛源猪瘟细胞苗的鉴别引物和鉴别方法
- 本发明提供了一种兔源猪瘟脾淋苗和牛源猪瘟细胞苗的鉴别引物和鉴别方法，本发明利用兔和牛线粒体具有种属特异性的特点，筛选出特异性的4种引物序列，建立相应的PCR方法，鉴别方法如下：提取猪瘟疫苗样品的DNA；PCR反应体系为2...
- 李晓成张志吴发兴刘爽董雅琴邵卫星
- 文献传递
- 健康猪体内塞尼卡病毒的分离和鉴定被引量：4
- 2019年
- 塞尼卡病毒(SVA)属于小核糖RNA病毒科塞尼卡病毒属,可以引起猪的水泡样病变、跛行和新生仔猪突然死亡等。为了解SVA的特性,本研究将从健康猪体内鉴定的SVA阳性样品接种BHK-21细胞分离SVA,采用PCR扩增其VP1基因,并分析其遗传变异特点。结果显示,10份SVA阳性样品中有2份(GXT91和GXT94)能够在BHK-21细胞增殖并产生明显的细胞病变,可达10^7.6TCID50/mL,其VP1基因与SVA参考株NC_011349的核酸同源性为90.2%~90.6%,推导氨基酸同源性为96.7%~97.1%,进化树显示新分离的GXT91和GXT94病毒株属于流行分支II。本研究为SVA的疫苗研制奠定了基础。
- 张志张丽丽张美晶刘爽张峰董雅琴张慧崔进吴发兴李晓成
- 动物RNA病毒反向遗传学操作技术及应用进展被引量：3
- 2016年
- 本文简述了反向遗传操作技术的基本原理以及近年来动物RNA病毒基因复制与表达调控机理、病毒与宿主间的相互作用,以及构建新型病毒载体和研发新型疫苗等方面的研究进展。
- 孙玉章倪雪霞李金明吴发兴王永玲
- 关键词：反向遗传学病毒拯救新型疫苗
- 猪圆环病毒3型实时荧光定量PCR方法的建立和应用被引量：8
- 2018年
- 猪圆环病毒3型（PCV3）是近两年报道的一种新病毒,为实现快速检测PCV3的目的,笔者以我国PCV3全基因组为模板设计合成了1对引物和1条TaqMan探针,建立了检测PCV3的实时荧光定量PCR方法。经过标准曲线分析、敏感性、特异性和重复性等一系列试验,表明该方法具有特异性强、敏感性高以及重复性好的特点。试验结果表明,阳性PCV3标准品DNA稀释10-8后（浓度为50 copies/L）仍然可以被检出,不同浓度的组间和组内重复性试验结果显示变异系数均小于3%,最后用36份临床样品进行了应用性评价,结果从中检测出9份阳性样品,表明所建立的方法是一种高效的可用于PCV3的分子诊断技术。
- 张志郝占武张美晶吴发兴刘爽李晓成王树双
- 关键词：TAQMAN探针
- 我国部分省份猪流行性腹泻的流行病学监测被引量：26
- 2014年
- [目的 ]为摸清我国猪群流行性腹泻的感染状况,[方法 ]从2011年底到2014年3月,对云南、广西等29个省份开展了猪群腹泻疫情流行病学调查,采集、收集了发生腹泻症状的发病猪群样品(新鲜粪便、肠道组织等),进行了猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等多种病原检测。[结果 ]在7021个调查猪场中,出现腹泻的阳性猪场4060个(57.83%)。在收集的1383份腹泻样品中,利用RT-PCR方法检测到PEDV阳性样本686份(49.58%),其中腹泻发病猪样品中PEDV的检出率为67.82%,675份组织样品共检测出PEDV阳性样本86份(12.75%)。[结论 ]这表明我国猪场PEDV的感染十分普遍。对S基因进行分子流行病学分析发现,我国PEDV流行毒株与已有PEDV毒株可以分为2个完全不同的进化分支G1和G2,G1以CV777和DR13等疫苗株和早期毒株为主,G2则以2011-2013年流行毒株为主,流行毒株之间的同源性为97.8%-100%,与疫苗株CV777之间的同源性为94.3%-94.5%。
- 张志董雅琴刘爽吴发兴邵卫星李晓成
- 关键词：猪流行性腹泻流行病学调查
- 华东部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因变异分析被引量：2
- 2019年
- 为了解2014年和2015年华东部分地区(山东省和福建省)猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)流行毒株的变异情况,试验收集来自华东部分地区猪场的疑似猪繁殖与呼吸综合征样品41份(山东省19份,福建省22份),采用RT-PCR方法分别进行PRRSV、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)检测。对检测出的阳性样品进行PRRSV的分离鉴定和ORF5基因测序,对测得序列进行遗传进化分析和推导氨基酸序列变异分析。结果表明:山东地区PRRSV检出率为74%,其中HP-PRRSV检出率为21%;福建地区PRRSV检出率为56%,其中HP-PRRSV检出率为42%。用Marc-145细胞从疑似猪繁殖与呼吸综合征病料中分离到16株PRRSV,其中10株为福建毒株,6株为山东毒株;测序获得的16株分离株中12株分布于美洲型的4个亚群,4株处于亚群之间的特殊进化位置。16株分离株以点突变为主,未见插入突变,糖基化位点30,44,51aa处保守,32~35aa处变异频繁。说明山东和福建地区流行的毒株不断变异,NADC30亚群毒株已经在山东地区出现,福建地区流行毒株仍以高致病毒株为主,但个别毒株已位于特殊进化位置。
- 高许雷范玉凤邹敏吴发兴
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因遗传进化分析
- 基于N蛋白的牛冠状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用被引量：2
- 2022年
- 为建立牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)抗体间接ELISA检测方法,对BCoV的N基因进行克隆,利用原核表达制备重组N蛋白,以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,建立ELISA检测方法,并对随机收集的奶牛血清样本进行检测。结果显示,重组N蛋白大小为50 ku,经Western blot鉴定重组N蛋白具有良好的反应原性;建立的ELISA检测方法抗原包被量为1.5μg/mL,血清以1∶50稀释,酶标二抗以1∶10000稀释,临界值为0.256。用该方法检测牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、口蹄疫病毒阳性血清均无交叉反应;当BCoV标准阳性血清1∶2560稀释时检测结果仍为阳性,灵敏性较好;批内和批间变异系数分别为1.83%~5.80%和2.34%~7.45%。对陕西省部分牛场收集的296份牛血清进行检测,BCoV抗体阳性率为18.24%。建立了一种快速检测BCoV抗体的间接ELISA方法,为BCoV的实验室诊断和流行病学调查提供了技术支持。
- 李晨露吴发兴徐海玲许信刚张琪
- 关键词：牛冠状病毒N蛋白酶联免疫吸附试验
- CSFV陕西分离株SXCDK全基因的克隆与分析被引量：4
- 2011年
- 【目的】分离猪瘟病毒（CSFV）SXCDK株,测定其全基因组序列,研究其分子特性及与其他毒株的亲缘关系,为猪瘟病毒分子流行病学研究积累材料。【方法】从陕西省西安市采集疑似猪瘟病料进行病毒分离,获得猪瘟病毒SXCDK株。根据GenBank上发表的猪瘟病毒全基因序列及相关参考文献,合成11对引物,应用RT-PCR技术分11段扩增CSFV分离株SXCDK基因,拼接后获得其全基因组（GenBank登录号：GQ923951）。利用DNAstar、ClustalX1.83和Mega 4.1等软件,对分离株SXCDK与其他猪瘟病毒毒株的核苷酸和氨基酸序列进行比较分析。【结果】CSFV陕西分离株SXCDK基因组全长12 296 nt,由373 nt的5′非翻译区、编码3 899个氨基酸的11 697 nt开放阅读框和226 nt的3′非翻译区组成。分离株SXCDK和其他毒株的核苷酸序列同源性为83.6%~96.2%,氨基酸序列的同源性为91.3%~97.8%。从进化的角度来看,分离株SXCDK与台湾分离株96TD的亲缘关系最近,两者之间的进化距离为0.038,分离株SXCDK与2006年陕西省分离株SXYL2006进化距离较远,两者之间的进化距离为0.065。CSFV SXCDK株属于2.1a亚群毒株。【结论】分离株SXCDK是我国内地首株已确定全基因序列的猪瘟病毒2.1a亚群毒株,与同亚群的96TD亲缘关系最近。
- 李玲伟张志吴发兴程伟杨若松张燕霞刘爽郑辉李晓成陈德坤
- 关键词：猪瘟病毒全基因
- 对山东某猪场一起仔猪腹泻的流行病学调查被引量：1
- 2014年
- 本文针对发生腹泻疫情的某猪场开展了实验室检测和流行病学调查,实验室检测表明该疫情的病原为猪流行性腹泻病毒。流行病学调查显示,此次腹泻疫情于2013年11月份开始暴发,2014年3月份结束,发病猪的种类具有明显的次序,育肥猪首先发生,其次是母猪,新生仔猪最后发病;发病率和死亡率与猪的种类、日龄密切相关,育肥猪和母猪发病后仅出现腹泻症状而不死亡,仔猪发病后腹泻症状明显而且死亡率随着年龄的增长急剧下降,3日龄以下仔猪死亡率可达100%,1周龄仔猪死亡率降至72.73%,12日龄仔猪死亡率仅有10%。对猪场风险因素分析表明,饲料车辆直接进入猪场、卖猪车辆与饲养人员接触、粪便通道没有封闭、饲养人员流动等是影响此次腹泻疫情的高风险因素,通过降低高风险因素很好地控制了疫病。
- 张志董雅琴刘爽吴发兴邵卫星李晓成
- 关键词：猪流行性腹泻流行病学调查
- 辽宁省部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒流行株ORF_(5-7)基因遗传变异分析被引量：7
- 2007年
- 根据GenBank发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ATCC VR-2332全基因序列,设计并合成2对引物,采用RT-PCR技术,对辽宁省站送检的病料进行分离扩增,分别获得相应的目的片段,将其分别克隆入pMD18-T载体中,并送上海生工测序。应用DNAStar软件分析所测序列,并与ATCC VR-2332、CH-1a、BJ-4、LV-M96262及疫苗株的ORF567基因进行序列比较,通过核苷酸序列分析表明这5株流行株与VR-2332、CH-1a、BJ-4等代表株的同源性为89.5%～95%,与LV-M96262的同源性为54%～58.3%.氨基酸序列分析表明这5株流行株与VR-2332、CH-1a、BJ-4等代表株的同源性为82.8%～94.7%.
- 尹国友吴发兴郭爱英李晓成王洪斌黄保续张燕霞
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
