廖晓东
- 作品数：11 被引量：25H指数：2
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 与Atrophin-1同源的人类新基因的克隆和定位
- 1999年
- 将齿状核红核苍白球路易氏体退行性病变(DRPLA)致病基因(Atrophin-1)cDNA序列对EST数据库进行同源性比较,得到与(Atrophin-1显著相似的EST 25个,依EST间的相互关系构建5个EST重叠群。根据其中的3个EST重叠群设计引物,对cDNA文库扩增,PCR法制备探针,筛选人cDNA和gDNA文库。cDNA克隆经测序,拼接,获得含完整编码区的cDNA序列4.6kb(命名为Atrophin样基因,Atrophinlike gene),其中有一个3036bp的阅读框架。基因编码区由9个外显子构成。基因组DNA克隆,经荧光原位杂交定位于1p36。人、鼠Atrophin-1基因家族各成员的比较分析显示,均为亲水性较强的蛋白质,其C端保守性较强,有2个酸性与碱性氨基酸交替区。DRPLA,Haw River综合征与Atrophin-1中CAG的过度重复相关,而人类Atrophin样蛋白中不含长的多聚谷氨酰胺残基(其基因中只有3次CAG的重复)。
- 夏家辉刘春宇王德安阮庆国崔峰谢微潘乾廖晓东戴和平邓汉湘
- 关键词：致病基因基因克隆基因家族
- 中国人基因组YAC文库的构建及首批克隆鉴定被引量：1
- 1996年
- 本文采用PJS97/PJS98及TPH 274载体主宿系统构建中国汉族男性基因组YAC文库,在初探基础上不断改进方法,通过控制脉冲条件的原位筛选去除小片段DNA分子,用多胺溶液防止68℃对大片段DNA分子的破坏作用,并采用Agarase消解低熔点胶。转化获克隆10000余个,采用甘油一步到位法保存8000余个。对其中一批克隆进行鉴定。转化子阳性率为95％,其中75％的片段介于100～200kb间,10％为200～600kb,10％为600～1600kb,该批转化子平均片段230kb。克隆片段平均大小略高于回收到的目的片段的下限而低于它的平均大小。
- 黎伶俐夏家辉潘乾廖晓东龙志高李麓芸邓汉湘杨智勇匡达人
- 关键词：中国人克隆鉴定
- 一例智力低下患者7q^+标记染色体的来源鉴定被引量：11
- 1996年
- 以人类染色体显微切割、PCR技术构建的现有人类染色体特异性和染色体区带特异性探针池作为绘画探针,采用正向染色体绘画技术,结合染色体筛查方法,查明了一例7q^+标记染色体患者的染色体附加片段来源于3q26→3qter。确定该患者的核型为46,XX,-7,+der(7)t(7;3)(7pter→7q32::3q26→3qter)。应用这个策略,能够快速有效地鉴定标记染色体的来源。
- 傅俊江夏家辉龙志高杨毅潘乾廖晓东夏希陈胜湘
- 关键词：智力低下儿童标记染色体
- 人神经元电压门控钙通道γ-3基因的克隆被引量：2
- 2000年
- 将小鼠Ｃａｃｎｇ２基因的编码区与ＥＳＴ数据库进行同源性分析，得到一个与小鼠Ｃａｃｎｇ２基因在 ４３５ ｂｐ中有 ７５％同源的 ＥＳＴ（ＧｅｎＢａｎｋ： Ｗ２９０９５）．在该 ＥＳＴ中设计引物与 ｃＤＮＡ文库载体臂上引物行巢式 ＰＣＲ和 ＲＡＣＥ反应，在人脑前叶皮质 ｃＤＮＡ文库和人脑 Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ中获得 ｃＤＮＡ序列 １５４５ ｂｐ，其中包含一个 ９４８ ｂｐ的可读框，编码 ３１５个氨基酸．该可读框经确证命名为 ＣＡＣＮＧ３．ＣＡＣＮＧ３基因与大规模测序中定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１的ＢＡＣ克隆ＡＣ００４１２５完全一致，从而将该基因定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１，并由此获得它的基因组结构，编码区由４个外显子组成．经ＲＴ－ＰＣＲ分析，ＣＡＣＮＧ３在成人脑和胎脑有表达．运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ在视网膜色素变性家系、视网膜色素变性伴耳聋和癫痫家系进行突变检测，未检测到突变．
- 夏家辉张华莉唐冬生汤熙翔戴和平潘乾龙志高廖晓东
- 关键词：克隆SSCP癫痫
- 人类M6b基因一种剪接型cDNA的分子克隆被引量：2
- 1999年
- 蛋白脂蛋白（PLP）基因突变导致Pelizaeus－Merzbacher病（PMD）和部分X-连锁的痉挛性截瘫。Olinsky等克隆了M6b的部分序列（U45955），该基因认为是PLP基因家族成员之一。我们以巢式PCR得到一约300hp的片段，测序为与U45955的5′端局部重叠的新序列，拼接后得到1．642kb的序列，其中含有可编码265个氨基酸的开放阅读框。此阅读框经对脑cDNA文库PCR产物的测序确证（命名为M6ba）。M6ba的CDNA序列及其编码氨基酸序列与小鼠中M6b基因和蛋白质序列显著相似（分别为91．2％和93.4％一致）。Northern杂交的结果及cDNA文库PCR扩增、EST数据库分析的结果提示M6b基因至少存在3种剪接形式。M6ba基因与PLP基因显著相似，并且两蛋白质在所有疏水区高度保守。M6ba基因结构的分析，显示此基因编码区由7个外显子构成。
- 夏家辉刘春宇阮庆国潘乾廖晓东傅俊江崔峰邓汉湘
- 关键词：PLP分子克隆蛋白脂蛋白
- 人Oligophrenin 1样(OPHN1L)基因的克隆被引量：1
- 2000年
- 将人Oligophrenin 1(OPHN1)基因编码区2406 bp与EST数据库进行同源性分析,得到一个363 bp的EST AA035622与OPHN1基因编码区一致性为62％,该EST与一个cDNA序列AB014521完全匹配。在AB014521中设计引物与cDNA文库载体臂上引物行巢式PCR扩增并进行5′RACE,在胎盘cDNA文库中获得cDNA序列606bp,与AB014521拼接成一个6906 bp的cDNA序列,其中包含一个2442 bp的开放阅读框,编码813个氨基酸。该cDNA序列的GenBank登录号为AF141884,并经GDB命名委员会命名为OPHN1L基因。OPHN1L基因3′端与大规模测序的BAC克隆AC005348及AC004782完全匹配,从而将该基因定位于5q21.2～q21.3,并由此获得它的部分基因组结构。
- 夏家辉汤熙翔唐冬生崔峰禹宽平潘乾戴和平廖晓东龙志高
- 关键词：基因克隆同源性分析基因编码EST数据库
- 人类间隙连接蛋白β-5基因的克隆、表达及突变分析
- 2000年
- 利用同源筛选与巢式PCR的方法克隆了编码人类间隙连接蛋白-5的基因GJB5, 确定了基因组结构, FISH将其定位于1p33-p35. 经RT-PCR分析, GJB5在胎儿皮肤、成人皮肤、胎盘中有表达. 采用直接测序的方法对142个感觉神经性听力下降患者及36个其他遗传性疾病家系(5个变异性红皮肤角化病家系, 13个Charcot-Marie-Tooth病家系, 4个上睑下垂家系和14个视网膜色素变性伴耳聋家系)患者进行了GJB5的突变分析. 在两个感觉神经性耳聋患者(M1883, M1589)中发现了两种错义突变(686A→G, H229R; 25C→T, L9F); 在3个遗传性听力下降的耳聋家系中发现了一种位于内含子剪接受体位点的18 bp的杂合缺失, 其中一个家系(娄底家系)中伴有一种错义改变(R265P), 18 bp的杂合缺失和错义改变在家系中均不与突变共分离. 对缺失携带者进行RT-PCR 分析, 未能在皮肤组织中发现任何异常的mRNA, mRNA的表达量也未见明显异常. 群体分析时发现, 199个正常人中有两例此18 bp缺失的携带者.
- 郑多夏家辉黄蕾夏昆唐冬生戴和平潘乾龙志高廖晓东
- 关键词：克隆突变分析MRNA
- 人神经性耳聋多肽因子样基因克隆和表达分析被引量：5
- 2000年
- 目的 克隆一个新的耳聋相关基因。方法 应用生物信息分析技术、RACE以及cDNA文库筛选。结果 克隆了人的进行性肌萎缩 /神经性耳聋多肽因子样基因 (dystonia/deafnesspeptidelike ,DDPL)。DDPL定位在 11q2 2 .1 2 2 .2 ,具有二种不同的组织剪接形式的mRNA(GeneBank接受号 :DDPL2AF16 5 96 7) ,分别编码 83个氨基酸及 5 1个氨基酸。DDPL在多种组织中表达。在Xq2 5 2 6上有一个假基因DDPLφ ,与DDPL1的一致性为 382bp(96 .9% )。 结论 DDPL位于 11q2 2 .1 2 2 .2的D11S939与D11S1347之间约 5 .4Mb的范围内 。
- 夏家辉何云贵曾志红唐冬生戴和平潘乾龙志高廖晓东
- 关键词：神经性耳聋克隆
- 人体细胞遗传学技术的推广和应用被引量：2
- 2000年
- 细胞遗传学研究的主要对象是染色体,染色体是基因的载体,染色体异常所致的疾病称为染色体病。 1972年,夏家辉就在国内最先引进和改良了瑞典科学家 Caspersson 1970年发现的人类染色体显带技术,并于1974年最先提出了中国人G显带染色体模式图,在国内最先开设了染色体病遗传咨询门诊。
- 夏家辉戴和平李麓芸龙志高潘乾廖晓东邓汉湘
- 关键词：细胞遗传学FISH产前诊断
- 荧光原位杂交法定位人类染色体8q24.1单拷贝探针被引量：1
- 1996年
- 运用基因组DNA文库筛选法和荧光原位杂交法成功地定位了来自人类染色体8q24.1显微切割文库中的两个单拷贝探针,结果证明这两个探针确实来自于所切割区域,从而为进行遗传病的RFLP分析和人类基因组分析提供了有意义的遗传标记。
- 阮庆国邓汉湘潘乾黄蕾廖晓东夏家辉
- 关键词：基因组染色体分子遗传学
