张纬
- 作品数：9 被引量：30H指数：3
- 供职机构：广西医科大学附属肿瘤医院更多>>
- 发文基金：广西省自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- PAI-1对卵巢癌上皮细胞SKOV3生物学行为的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨PAI-1基因在体外实验中对卵巢癌细胞SKOV3生物学行为的影响。方法将PAI-1基因转到入人卵巢癌细胞SKOV3中,通过细胞生长曲线、细胞克隆形成实验、流式细胞仪检测细胞周期,测定细胞侵袭迁移黏附能力,研究PAI-1基因在卵巢癌上皮细胞SKOV3中的功能。结果 PAI-1基因被转入靶细胞中并稳定表达,Western blot能检测到PAI-1基因蛋白在靶细胞中的表达;在细胞生长周期的测定和克隆形成实验中,转导入PAI-1基因后的细胞(SKOV3-PAI-1)较未转导PAI-1基因的SKOV3细胞增殖能力明显增强;经流式细胞仪检测,转导PAI-1基因的SKOV3细胞增殖能力亦明显增强;PAI-1基因的表达显著增强了SKOV3细胞的体外侵袭迁移黏附能力。结论 PAI-1的表达增强了SKOV3卵巢癌上皮细胞增殖和体外侵袭、迁移及黏附能力,PAI-1可能在肿瘤细胞侵袭和转移中起着双重作用。
- 覃捷张洁清李力黎丹戎张纬
- 关键词：卵巢癌PAI-1基因转染生物学行为
- 卵巢恶性肿瘤组织中uPA PAI-1蛋白表达与其临床病理因素的关系被引量：2
- 2008年
- 目的:最近研究表明尿激酶型纤溶酶原激活因子(urokinase-type plasminogen activator,uPA)及其1型抑制因子(PAI-1)在恶性肿瘤的发生、发展及转移过程中起重要作用,且其过度表达与预后差有关。本研究从蛋白水平探讨uPA及PAI-1表达与卵巢肿瘤发生、发展及预后的关系。方法:采用SABC免疫组织化学方法检测40例卵巢恶性肿瘤(Ⅰ～Ⅱ期14例,III～IV期26例)、20例良性肿瘤及20例正常卵巢组织uPA及PAI-1蛋白的表达。结果:1)uPA、PAI-1在恶性肿瘤中的表达率为52.5%及67.5%,明显高于良性肿瘤及正常组织,差异均有显著性(P<0.05),而良性肿瘤与正常组织无明显差异(P>0.05)。2)uPA、PAI-1在恶性卵巢肿瘤中表达与病理类型、腹水多少、有无淋巴结转移无关。3)uPA、PAI-1在III～IV期的表达率明显高于Ⅰ～Ⅱ期,大网膜及肝有转移者明显高于无转移者;uPA表达与肿瘤分化程度呈负相关,PAI-1与残存灶大小呈正相关。4)uPA阴性表达者的平均总生存期(49.0个月)明显高于阳性者(29.3个月);PAI-1阴性表达者的平均总生存期(52.2个月)明显高于阳性者(31.8个月),(P均<0.01)。5)COX模型分析显示PAI-1蛋白表达可作为独立的预后指标。结论:uPA、PAI-1与卵巢肿瘤的发生、恶化有关,可作为估计肿瘤转移潜能及预后的重要指标。
- 张洁清凌丹李力黎丹戎张纬
- 关键词：卵巢肿瘤纤溶酶原激活因子
- uPA基因的克隆
- 2011年
- 目的：构建uPA真核细胞表达质粒。方法根据GenBank中uPA的序列，利用RT—PCR从人卵巢癌组织进行扩增uPA基因全长片段，将其克隆人真核表达质粒pcDNA3．1／myc—his（-）B，建立uPA的表达质粒pcDNA3．1-uPA，后并对克隆的全长片段进行DNA序列测定。结果经与GenBank分布的序列进行分析比较证实，构建的真核表达重组质粒pcDNA3．1-uPA含有uPA全长cDNA编码序列。结论uPA能被成功地从人卵巢癌组织中克隆，构建了真核细胞表达质粒pcDNA3．1-uPA，测序表明其携带有uPA的全长序列，为进-步研究uPA在卵巢癌侵袭转移中的作用打下基础。
- 覃捷张洁清李力黎丹戎张纬
- 关键词：CDNA分子克隆质粒
- RNA干扰抑制ERCC1基因对肺癌细胞A549药物敏感性影响的研究被引量：10
- 2009年
- 目的:用RNA干扰技术下调肺癌细胞系A549切除修复交叉互补基因(ER-CC1)的表达,以提高肺癌细胞对化学药物的敏感性。方法:首先构建针对ERCC1基因的SiRNA真核表达载体;其次将载体转染肺癌细胞A549,采用RT-PCR和蛋白质印迹法技术证实转染细胞中ERCC1基因沉默效果良好;最后采用MTT法检测构建真核表达载体转染细胞对顺铂药物毒副反应的影响。结果:成功构建针对ERCC1基因的siRNA真核表达载体;将其转染肺癌细胞A549,可以抑制细胞中ERCC1基因表达,转染细胞较亲本细胞ERCC1基因表达降低48.3%,P<0.05;RNA干扰的A549细胞较亲本细胞对顺铂的敏感性升高了2.93倍。结论:RNA干扰是一种沉默ER-CC1表达的理想方法。沉默ERCC1表达可以提高肺癌细胞的化疗敏感性,它可能是一种有潜质的肺癌辅助治疗新方法。
- 潘泓左传田李力茅乃权张纬唐步坚
- 关键词：细胞系ERCC1基因小分子干扰
- 多基因蛋白表达判断早期非小细胞肺癌术后化疗疗效的价值被引量：11
- 2008年
- 目的 探讨多基因蛋白表达联合检查判断早期非小细胞肺癌（NSCLC）术后化疗疗效的价值。方法采用组织芯片与免疫组织化学技术（二步法）相结合的方法，对86例NSCLC组织中caspase-3、Fas、bax、bcl-2、survivin、PCNA、Ki67、MGMT、p53、p63、p73、p16、p27、VEGF、nm23、P-gP、MRP、LRP、GST-π、TopoⅡ、c-myc、cyclinD1、Her-2、Cox-2、Ku70、Ku80、DNA-PKcs、ERCC1、MSH2和BCRP等30种化疗相关蛋白进行检测，并分析其表达与早期NSCLC术后化疗疗效的关糸。结果30种化疗相关蛋白在肺癌组织中的表达阳性率在279％-91．9％间。经过单因素分析，与早期NSCLC术后化疗效果密切相关的基因有8个，即survivin、P-gP、LRP、Ki67、p53、ERCC1高表达和bax、VEGF低表达的NSCLC患者术后化疗效果差。通过Logistic回归分析显示，ERCC1、survivin、bax和VEGF等4个基因联合检测对早期NSCLC术后化疗疗效的预测特异度达96．5％。结论ERCC1、survivin、bax和VEGF是一组判断早期NSCLC术后辅助化疗效果、指导早期NSCLC的术后治疗的分子指标。
- 潘泓李力左传田茅乃权陈发龙张纬唐步坚
- 关键词：非小细胞肺癌组织芯片免疫组织化学基因蛋白辅助化疗
- PAI-1基因的克隆
- 2007年
- 目的构建PAI-1真核细胞表达质粒。方法根据GenBank中PAI-1的序列，利用RT—PCR从人卵巢癌组织中进行扩增PAI-1基因全长片段，将其克隆人真核表达质粒pcDNA3．1／myc—his（-）B，建立PAI-1的表达质粒pcDNA3．1-PAI-1，并对克隆的全长片段进行DNA序列测定。结果经与GenBank分布的序列进行分析比较证实，构建的真核表达重组质粒pcDNA3．1-PAI-1含有PAI-1全长cDNA编码序列。结论PAI-1能成功地从人卵巢癌组织中克隆，构建了真核细胞表达质粒pcDNA3．1-PAI-1，测序表明其携带有PAI-1的全长序列，为进一步研究PAI-1在卵巢癌侵袭转移中的作用奠定了基础。
- 覃捷张洁清李力黎丹戎张纬
- 关键词：CDNA分子克隆质粒
- SYBR荧光实时定量PCR检测NSCLC中ERCC1基因表达被引量：2
- 2008年
- 目的:建立检测核苷酸切除修复基因ERCC1 mRNA的SYBR GreenI实时定量PCR的方法,了解肺癌组织及其癌缘肺组织中ERCC1的表达水平,研究肺癌组织中ERCC1的表达水平与各种临床病理特征之间的关系。方法:应用SYBR荧光实时定量PCR(Real-time PCR)技术检测30例肺癌组织和离肿瘤边缘5cm处正常癌旁组织中的ERCC1 mRNA表达水平,同时分析ERCC1表达水平在不同肺癌临床分期和病理类型各组间的关系。结果:肺癌中ERCC1 mRNA的表达(5.16±2.51)低于正常癌旁组织(11.17±4.79)(P<0.05)。但在不同肺癌临床分期、组织类型各组之间差异均无统计学意义。结论:所建立的SYBR GreenI实时定量PCR方法可以成功地检测ERCC1基因的表达量。
- 潘泓茅乃权李力左传田张纬唐步坚
- 关键词：NSCLCERCC1基因荧光实时定量PCR
- uPA和PAI-1基因克隆及真核表达载体的构建及鉴定
- 2009年
- 目的:克隆人卵巢上皮癌组织uPA和PAI-1基因cDNA全长,构建表达uPA和PAI-1基因的真核表达载体。方法:采用RT-PCR技术从人卵巢上皮癌组织总RNA中逆转录uPA和PAI-1基因的cDNA全长,克隆到pGEM-TEasy Vector上,通过酶切和测序进行鉴定;酶切后与真核表达载体pcDNA3.1/myc-his(-)B连接,酶切及测序再次鉴定;采用脂质体法将重组质粒DNA转染至卵巢癌上皮细胞SKOV3细胞;采用有限稀释法和G418分别加压筛选并培养SKOV3-uPA和SKOV3-PAI-1细胞及对照细胞;Western blot法检测转染前后SKOV3细胞uPA和PAI-1基因的表达。结果:成功扩增出uPA和PAI-1基因的cDNA的全长,并克隆入T载体,DNA测序证实序列正确,通过连接成功构建含正确目的基因的表达载体pcDNA3.1-uPA和pcDNA3.1-PAI-1,Western blot能检测到uPA和PAI-1基因蛋白分别在SKOV3-uPA和SKOV3-PAI-1细胞中的表达。结论:成功构建了uPA和PAI-1表达基因的真核表达载体,为进一步研究uPA和PAI-1基因在卵巢癌侵袭转移中的作用提供了实验基础。
- 覃捷李力张洁清张纬黎丹戎
- 关键词：卵巢上皮癌UPA真核表达载体
- A549/DDP耐药肺癌细胞系的建立及其与SP细胞的关系被引量：3
- 2010年
- 目的:建立耐顺铂(DDP)人肺癌耐药细胞系A549/DDP,初步探讨耐药细胞与肿瘤SP(sidepopulationcell)细胞的关系。方法:以DDP为诱导剂,采用高浓度反复间歇诱导法诱导建立人肺癌耐药细胞系A549/DDP,用MTT法测定药物敏感性,最后将耐药细胞和亲本细胞分别行Hoechst33342染色,用流式细胞仪检测SP细胞含量。结果:成功建立DDP耐药细胞系A549/DDP,对DDP的耐药指数为5.957;耐药谱分析表明其是一个多药耐药细胞系;Hoechst33342染色分析显示:A549和A549/DDP中SP细胞含量分别为1.09%和0.31%。结论:建立了稳定的人肺癌多药耐药耐药细胞系A549/DDP,耐药细胞中SP细胞含量无明显变化。
- 潘泓谢彤茅乃权张纬唐步坚
- 关键词：抗药性多药耐药SP细胞
