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2024年7月5日星期五

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肿瘤抑制基因RECK在骨肉瘤组织及细胞系中表达的初步研究被引量：3: 2008年; 目的通过检测RECK基因在人骨肉瘤组织及人骨肉瘤细胞MG-63的高低转移亚系中的表达,探讨RECK基因在骨肉瘤发生及转移过程中的作用。方法采用免疫组化法检测18例骨肉瘤组织标本中RECK蛋白的表达,再分别应用RT-PCR方法检测细胞亚系中RECK mRNA的表达、明胶酶谱检测细胞MMP-2的活化水平、Matrigel侵袭实验检测肿瘤细胞侵袭能力。结果骨肉瘤组织中RECK蛋白的吸光度值为(0.31±0.07),明显低于正常骨组织(P<0.01),RECK的表达与肺转移、生存率有关(均P<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤大小、病理分级无关;高转移细胞组RECK mRNA的含量明显低于低转移组(P<0.01),而MMP-2活化水平、细胞侵袭力则明显升高(均P<0.05)。结论RECK基因异常低表达可能参与骨肉瘤侵袭、转移机制,RECK基因可能成为判断骨肉瘤患者预后新的分子标志物及肿瘤治疗的新靶点。; 徐亮杨述华郭君红刘冠军; 关键词：RECK基因骨肉瘤

骨髓间质干细胞体外分化软骨细胞的实验研究被引量：2: 2007年; 目的:应用转化型生长因子TGF-β1,体外诱导骨髓间质干细胞(MSCs)向成软骨细胞表型分化,探讨其作为组织工程化软骨种子细胞的可行性。方法:由大鼠骨髓中分离出MSCs,体外传代培养,取第3代细胞通过TGF-β1、地塞米松和维生素C诱导向软骨细胞分化。诱导后14d观察细胞形态变化,进行阿辛蓝染色检测软骨基质的分泌、免疫组化检测细胞Ⅱ型胶原的表达,采用Western-blot和RT-PCR检测诱导前后成软骨相关的SOX9、蛋白聚糖与Ⅱ型胶原的表达。结果:诱导后阿辛蓝染色示糖胺聚糖均匀分布于基质中,免疫组化染色示基质中Ⅱ型胶原表达阳性。RT-PCR检测示成软骨相关的SOX9、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA表达阳性。Western-blot印迹检测示细胞诱导后Ⅱ型胶原蛋白表达阳性。结论:MSCs在特定培养液的诱导下可向软骨细胞表型分化,并能分泌软骨细胞特异性基质,可成为软骨组织工程理想的种子细胞来源。; 徐亮杨述华田洪涛冯建军郑东梅荣成; 关键词：间质干细胞转化生长因子Β 软骨细胞

骨髓基质干细胞的单克隆培养和分化的实验研究被引量：1: 2007年; 目的:通过对骨髓基质干细胞(MSCs)的单克隆化培养、鉴定和扩增,获得从一个单细胞克隆扩增出的大量均质的MSCs,并通过对这种MSCs诱导分化的实验研究,进一步确定这种单克隆来源的MSCs的分化和"横向分化能力".方法:无菌条件下获取大鼠的骨髓细胞,将获得的细胞经过充分打匀和滤过后制成单细胞悬液,然后以低密度,1×103个细胞数接种于培养板中,待细胞出现单细胞生长的克隆后,通过显微操作挑出相应的单细胞克隆.将挑出的单细胞克隆与相应的饲养细胞混合培养,快速进行扩增,扩增后的细胞进行细胞表面标志的鉴定,并进一步进行增殖和细胞分化实验.结果:在含有特定饲养层细胞的培养条件下,单克隆来源的MSCs能在抑制分化的状态下进行大量扩增,并保持细胞的均质性;而且在这种培养条件下,MSCs的增殖能力明显的高于常规培养条件;同时,获得的这种均质MSCs能成功的被诱导向软骨,神经样细胞分化.结论:通过骨髓细胞的单克隆培养,获得了均质和具有多向分化潜能的MSCs,这也为进一步更精确的研究MSCs的生物学特性提供了基础.; 郑东杨述华冯勇杨操李进梅荣成唐欣徐亮; 关键词：骨髓基质干细胞克隆细胞横向分化

TGF-β_3、DBM联合诱导BMSC修复软骨缺损的实验观察被引量：1: 2007年; 将兔骨髓基质干细胞(BMSC)和脱钙骨基质(DBM)在体外混合培养21 d后分组,实验组中加入生长转化因子β3(TGF-β3),对照组中不加TGF-β3。分别于7、14、21 d取出DBM块,RT-PCR检测型原骨胶原[COL(Ⅱ)]、X型原骨胶原[COL(X)]和蛋白聚糖(Aggrecan)的表达量;第21天取出的DBM晾干后称重,计算净增长重量。将培养7 d的DBM植入兔的软骨缺损模型中,分别于3、6、9周时处死取材,进行观察。实验组的软骨增加量约为对照组的7倍,COL(Ⅱ)、COL(X)和Aggrecan也明显增加,实验组的软骨修复效果明显好于对照组。认为TGF-β3联合DBM能极大促进BMSC向软骨分化的能力,并显著提高软骨修复能力。; 郑东杨述华冯勇梅荣成唐欣徐亮; 关键词：脱钙骨基质软骨修复软骨分化

同种异体骨支撑架结合自体骨和DBM治疗股骨头坏死的生物力学研究被引量：11: 2007年; [目的]研究同种异体骨支撑架结合自体骨和脱钙骨基质(decalcified bone matrix,DBM)植入治疗股骨头坏死生物力学变化。[方法]建立羊双侧股骨头坏死模型,4周后分为4组:单纯行髓芯减压组(A组)、髓芯减压后植入自体松质骨和OSTEOSET(2DBM组(B组)、髓芯减压后植入同种异体骨支撑架/自体松质骨OSTEOSE(2DBM组(C组)和正常对照组。术后分别于5、10、20周对股骨头行影像学、组织学观察和生物力学测定。[结果]影像学和组织学检查结果显示C组在髓芯减压区骨缺损修复及成骨方面较B组略高,B、C两组都较同时期的A组明显增强。生物力学测试结果表明,术后5、10、20周时C组力学强度较A、B两组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),在10、20周时C组股骨头生物力学强度和正常股骨头己无明显差异。[结论]应用同种异体骨支撑架结合自体骨和脱钙骨基质治疗股骨头坏死,能有效加强股骨头的力学结构,促进坏死骨的修复,防止股骨头关节面的塌陷。; 梅荣成杨述华杨操李宝兴苏成忠李进邹利军徐亮郑东汪岚; 关键词：股骨头坏死自体骨脱钙骨基质生物力学

RECK基因在子痫前期患者胎盘的表达及其与MMP-2活化的关系被引量：1: 2009年; 目的通过检测RECK基因在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其与MMP-2活化的关系,探讨RECK基因在胎盘滋养细胞浸润机制中的作用。方法分别采用RT-PCR、Western blot检测正常妊娠孕妇(正常妊娠组,22例)、子痫前期孕妇(其中轻度22例,重度20例)胎盘组织中RECK mRNA和蛋白的表达;采用明胶酶谱法检测3组孕妇胎盘组织中MMP-2的活化比例。结果轻度、重度子痫前期组胎盘组织中RECK mRNA、蛋白的表达水平均明显高于正常妊娠组,且重度子痫前期组RECK mRNA、蛋白的表达水平均明显高于轻度子痫前期组,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.01);而轻度、重度子痫前期组MMP-2的活化比例均明显低于正常妊娠组,且重度子痫前期组MMP-2的活化比例明显低于轻度子痫前期组,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。正常妊娠组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组胎盘组织中RECK mRNA及其蛋白表达与MMP-2的活化比例均呈负相关关系(均P<0.01)。结论子痫前期孕妇胎盘组织中RECK表达异常升高,MMP-2活性受到抑制,可能参与了胎盘滋养细胞浅浸润过程。; 郭君红徐亮张文淼陈云琴周静程晓红黄引平; 关键词：RECK基因胎盘子痫前期基质金属蛋白酶

工程化生长转化因子β3促进软骨前体细胞向软骨分化的实验研究被引量：5: 2007年; 目的:构建LAP(latency associated peptide in TGF-beta,LAP)为潜伏作用,MMP(matrix metalloproteinase,MMP)酶切位点为导向作用,TGF-β3活性部分为治疗作用的具有靶向治疗功能的工程化TGF-β3蛋白,并转染软骨膜来源的软骨前体细胞(chondrogenic progenitor cells,CPCs),检验其特异性的靶向治疗作用。方法:将人工合成的编码MMP酶切位点氨基酸的正反义DNA序列经基因重组定向克隆插入真核表达载体pIRES-EGFP中,之后将大鼠的TGF-β3的LAP段和TGF-β3的活性片断(mature TGF-β3,mTGF-β3),分别插入到MMP的上游和下游,获pIRES-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3重组质粒。然后将其转染入软骨膜来源的CPCs,将转染后的CPCs在有MMP-1和无MMP-1的条件下进行球团培养,并分别检测胶原Ⅱ(COLⅡ),Aggrecan(Agc)和TIMP的表达。结果:经过测序和酶切鉴定,成功构建了pIRES-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3质粒,转染CPCs后,只有MMP酶存在的条件下才能有效的促进CPCs向软骨分化和软骨基质的合成。结论:通过基因工程构建的工程化TGF-β3具有靶向性促进软骨前体细胞修复软骨的应用前景。; 郑东杨述华冯勇唐欣梅荣成徐亮; 关键词：基因克隆软骨分化软骨修复

TGF-β3真核表达载体转染骨髓基质干细胞促进其向软骨分化的实验研究被引量：5: 2007年; [目的]构建生长转化因子(TGF-β3)含绿色加强绿色荧光蛋白的真核表达质粒pIRES2-EGFP-TGF-β3,然后用该质粒转染骨髓基质干细胞(Marrow stromal cells,MSCs)并促进MSCs向软骨方向分化。[方法]用RT-PCR法从大鼠的胚胎组织中提取TGF-β3的DNA全长,首先连接到pMDl8-T载体,扩增、纯化后经测序公司测序确定插入目的基因序列的正确性,然后再用带有EcoRI、PstI内切酶的引物,从pMD18-T将TGF-β3的全长再次扩增出来,最后将带有酶切位点的TGF-β3的全长插入到真核质粒pIRES2-EGFP中,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-TGF-β3。体外培养大鼠MSCs,应用阳性脂质体将pIRES2-EGFP-TGF-β3转染到MSCs中,24h后在荧光显微镜下观察蛋白的表达,流式检测MSCs的转染效率;Westen Blot检测TGF-β3蛋白的表达;之后进行MSCs细胞球团培养,分别于第7、14、21、28d检测软骨基质胶原Ⅱ,胶原X和Aggrecan的表达,同时用甲苯胺蓝检测蛋白聚糖(proteoglycan)的表达。[结果]测序结果和酶切鉴定结果表明成功的构建了pIRES2-EGFP-TGF-β3质粒,转染MSCs之后,转染的效率达30%。Westen Blot结果表明TGF-β3获得了成功的表达,在接下来的细胞球团培养过程中,转染后MSCs被成功诱导向软骨分化。; 郑东杨述华袁晓梅李进冯勇徐亮梅荣成; 关键词：软骨分化软骨组织工程软骨修复

生长分化生长因子-5在诱导小鼠骨髓间充质干细胞软骨分化中的作用被引量：3: 2006年; 生妊分化生长因子5（GDF-5）是调控肢体骨骼发育和关节形成的一个重要因子，参与细胞聚集和软骨分化等过程的调节。笔者采用重组GDF-5直接干预小鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）．观察其对细胞增殖和软骨分化的影响，为进一步探讨其在软骨发育的作用机制提供实验依据。; 张宇坤杨述华孙立杨操田洪涛徐亮; 关键词：骨髓间充质干细胞软骨分化生长分化小鼠 GDF-5 骨骼发育

RhoA／ROCK通路在转化生长因子-β1诱导骨髓基质干细胞向软骨分化中的作用: 2007年; 目的探讨RhoA／ROCK信号通路在转化生长因子-β1（TGF-β1）体外诱导骨髓基质干细胞（BMSCs）向成软骨细胞表型分化过程中的表达及作用。方法由小鼠骨髓中分离出BMSCs，体外传代培养，取第3代细胞通过TGF-β1诱导向软骨细胞分化。采用Western-blot和RT-PCR方法分别检测RhoA和ROCK1／2、Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达及应用Rho激酶抑制剂Y27632后的表达。结果 RhoA和ROCK1／2在分化过程中均有表达。Rho激酶抑制剂Y27632导致诱导后成软骨细胞相关的Ⅱ型胶原表达减少。结论 RhoA／ROCK信号通路可能在BMSCs分化为软骨细胞过程中起着重要调控作用。; 徐亮杨述华田洪涛; 关键词：骨髓细胞转化生长因子-Β1

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