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细胞角蛋白8真核表达载体的构建、表达及生物信息学分析: 2011年; 目的:构建人细胞角蛋白8(CK8)全长CDS序列真核表达载体,并转染人肝癌细胞SMMC7721,为研究CK8的生物学功能提供细胞模型。方法:RT-PCR扩增CK8全长CDS,克隆入pMD18-Tsimplevector质粒,鉴定正确后,亚克隆入质粒pEGFP-C1,构建真核表达载体pEGFP-CK8。脂质体介导转染SMMC7721细胞,荧光显微镜、realtimePCR和Westernblot检测CK8的表达。生物信息学软件分析CK8理化特性、信号肽及功能位点等。结果:PCR、酶切和测序结果均证实重组质粒含有人CK8全长CDS序列,转染实验表明CK8在SMMC7721细胞中发生了高表达。结论:成功地构建了人CK8全长CDS真核表达载体,并使其在SMMC7721细胞中获得高表达,为研究CK8的生物学功能奠定了实验基础。; 寻萌赵四海曹春霞薛欣邵明明李薇徐琨楚雍烈; 关键词：真核表达生物信息学分析

GRP78在全长丙肝病毒RNA转染细胞中表达的研究被引量：3: 2008年; 目的用蛋白质组学的方法研究全长丙肝病毒RNA转染细胞的差异表达蛋白,观察差异表达蛋白GRP78的表达变化。方法提取全长丙肝病毒RNA转染Huh-7细胞和未转染Huh-7细胞总蛋白,进行双向凝胶电泳和MALDI-TOF质谱分析,鉴定差异表达蛋白。应用RTQ-PCR检测GRP78的相对表达量。结果经双向凝胶电泳和质谱鉴定,共发现54个差异表达蛋白,其中包括GRP78蛋白。RTQ-PCR检测结果显示,在转染初期GRP78基因转录显著上调,转染24 h的相对表达率是未转染细胞的2.104倍,后随时间推移逐步下调。结论建立了重复性较好、分辨率较高的全长丙肝病毒RNA转染细胞2D图谱。GRP78蛋白的显著差异表达提示GRP78蛋白在丙肝的发生和发展中起一定的作用。; 寻萌赵四海楚雍烈曹春霞安润宋娟徐琨邵明明; 关键词：蛋白质组学丙肝病毒 GRP78

内质网应激与prion疾病被引量：1: 2011年; 1引言内质网（endoplasmic reticulum,ER）是真核细胞中钙离子贮存库,也是调节蛋白质合成及合成后加工、折叠和聚集的场所,是一种重要的细胞器。近年来,在生物医学研究领域中出现了一个新概念-＂内质网应激＂（ER stress）,即：在饥饿。; 徐琨楚雍烈; 关键词：内质网内质网应激朊病毒病细胞凋亡

人doppel蛋白及其类似蛋白PrPΔ32-121对SH-SY5Y细胞的细胞毒性作用被引量：1: 2010年; 目的体外观察细胞瞬时表达的人Dpl(doppel)蛋白对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用,并与其结构类似蛋白——截短型PrP(PrPΔ32-121)加以比较。方法通过PCR方法获得人PRND基因及截短型PRNP基因并克隆至真核表达载体,瞬时转染SH-SY5Y细胞后,观察蛋白表达及其定位情况;采用MTT实验检测转染细胞的生长状态;用流式细胞仪、Western blot等方法检测转染细胞的凋亡状态。结果两种蛋白均可在转染细胞中表达,并存在于细胞膜上;MTT结果显示,在转染24 h后均出现明显的细胞毒性作用;细胞凋亡相关实验发现,转染细胞AnnexinV/PI双染阳性细胞数量增多,pro-casepase-3和Bcl-2因子水平降低。结论瞬时表达的Dpl蛋白与截短型PrP可产生类似的神经细胞毒性作用,并诱导启动细胞凋亡过程。; 徐琨王新田婵石崧王桂荣石琦周瑞敏姜惠英楚雍烈董小平; 关键词：朊蛋白细胞毒性作用细胞凋亡

细胞浆中PrP蛋白的表达及其细胞毒性作用的研究被引量：1: 2008年; 为了探讨在胞浆中表达的PrP的理化特征以及对细胞活性的影响,我们构建了胞浆型PrP(CytoPrP)真核表达质粒,瞬时转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,通过蛋白酶敏感性实验检测CytoPrP及其蛋白酶抗性,利用MTT和Trypan Blue细胞计数检测CytoPrP的细胞毒性作用。结果显示,CytoPrP在胞浆内的存在受蛋白酶抑制剂的控制;与野生型PrP相比,CytoPrP具有相对较强的蛋白酶K(PK)抗性。MTT和细胞计数实验均显示,Cyto-PrP的存在可诱导明显的细胞毒性效应,而CytoPrP的细胞毒性作用受蛋白酶抑制剂含量的影响,呈剂量依赖关系。上述结果为研究CytoPrP在朊病毒病的发病机制中的意义提供了一定的科学数据。; 王新董辰方石琦石崧王桂荣雷艳君安润徐琨姜慧英韩俊赵玉军董小平; 关键词：朊病毒细胞毒作用

利用PMCA对PrPSc在外周组织复制和NADPH促进PrPSc扩增的研究: 可传播性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathies,TSEs),又称朊病毒病(prion disease),是一类由于中枢神经系统中的细胞型PrP发生错误折叠转变成为致...; 董小平石崧董辰方田婵周瑞敏张宝云徐琨石琦高晨韩俊; 文献传递

HCV全基因组培养细胞的比较蛋白组学研究被引量：3: 2008年; 利用比较蛋白质组技术研究了转染丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)全基因组的人肝癌细胞系Huh7细胞模型中蛋白质表达谱的变化,建立了Huh7-HCV的双向凝胶电泳蛋白质表达图谱和数据库.通过双向凝胶电泳分离和图像分析,对表达差异2倍以上蛋白质点进行了胶内酶解和MALDI-TOF MS鉴定.得到包括与细胞骨架蛋白、细胞周期、凋亡和信号转导等相关的14个蛋白质,并且用Western blot验证了热休克蛋白70的蛋白质组研究结果.利用HCV全基因组培养系统,采用蛋白质组学技术,为研究HCV病毒和宿主细胞相互作用提供了新的实验数据,为深入研究HCV病毒复制和分子致病机理奠定了基础.; 赵四海寻萌楚雍烈朱彤薛欣徐琨宋娟邵明明; 关键词：培养细胞丙型肝炎病毒蛋白质组学

小鼠胚胎显微操作针的制备方法被引量：6: 2007年; 本文结合我们自己制备用于小鼠胚胎显微操作的持卵针(holding pipette)和注射针(injection pipette)的经验,介绍其制备的一些方法和技巧。; 赵四海楚雍烈林燕张春芳徐琨刘恩岐; 关键词：胚胎

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徐琨