施前
- 作品数：16 被引量：51H指数：4
- 供职机构：复旦大学更多>>
- 发文基金：教育部科学技术研究重点项目国家高技术研究发展计划上海市教育发展基金会“曙光计划”项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 凝血因子IX的体外检测方法研究被引量：1
- 1996年
- 凝血因子ＩＸ的检测是血友病Ｂ基因治疗研究中的重要工作，在实验室原有基础上，发展和完善了凝血因子ＩＸ在蛋白质水平上的检测系统，为基因治疗血友病Ｂ提供了更为直观可靠的依据．首先，建立了以鼠抗人ＦＩＸ单克隆抗体Ａ－７为一抗的检测活性ＦＩＸ蛋白量的ＥＬＩＳＡ法，为检测活性ＦＩＸ提供了快速简便的方法．其次，实现了用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测转染细胞培养液上清中ＦＩＸ，确证了体外培养的转有人ＦＩＸｃＤＮＡ的细胞表达有人ＦＩＸ蛋白．最后，用免疫组织化学方法，原位检测了转有人ＦＩＸｃＮＡ的细胞表达的ＦＩＸ蛋白，展现了在细胞水平上ＦＩＸ表达的直观图象．
- 施前卢大儒王琪王宏伟薛京伦邱信芳
- 关键词：血友病B凝血因子IX免疫组织学基因治疗
- 非胰岛素依赖型糖尿病基因定位研究进展被引量：3
- 1996年
- 非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）易感性基因的定位研究是近年来的研究热点，由于ＮＩＤＤＭ的致病因素的多样性和临床表现的复杂性，使它的基因定位进展较慢．本文概述了ＮＩＤＤＭ的发病机理，对其易感性基因的研究现状，基因定位中常用的方法及其优缺点，我国在这方面的研究优势与现状进行了全面的综述，并对其研究前景提出展望．
- 施前
- 关键词：非胰岛素依赖糖尿病基因定位
- 中国人群DXS102座位多态性鉴定及其应用被引量：17
- 1998年
- 目的探讨中国人群中ＤＸＳ１０２座位的多态分布。方法应用ＰＣＲ扩增片段长度多态性（Ａｍｐ－ＦＬＰ）研究了无亲缘关系的２３４条Ｘ染色体。结果ＤＸＳ１０２座位等位片段有８个，核心单元ＡＣ二核苷酸重复数为１３～２１，频率分布在０．０１３～０．１５６之间，杂合度观察值和无偏估测值分别为０．８７和０．８０，多态信息含量（ＰＩＣ）０．８０，女性基因型数为２２个，男性基因型数为８个，该座位多态分布符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡定律。ＤＸＳ１０２座位在中国人群和欧洲人群的分布有明显的种族差异，在中国人群中发现了两个新的等位片段。应用ＤＸＳ１０２座位的短串联重复序列多态性对一接受基因治疗的血友病Ｂ家系进行分析和携带者筛查。结论ＤＸＳ１０２座位连锁分析有望成为一种有效的血友病Ｂ基因诊断的方法。
- 卢大儒施前徐红岩邱信芳薛京伦
- 关键词：遗传多态性血友病B
- 肌细胞途径血友病B基因治疗高表达载体的构建及表达研究被引量：2
- 1998年
- 构建了以ＭＣＫ（肌肉肌酸激酶）增强子增强、β－ａｃｔｉｎ启动子启动的、反向插入载体Ｇ１Ｎａ的Ｇ１ＮａＰＡＩＸｉ′ＢＡＭ。在与同一系列的、仅内含子元件有差异的载体Ｇ１ＮａＭＢＡＩＸ和Ｇ１ＮａＭＢＡｉＩＸ的体外体内表达比较证明，反向载体是表达最高最稳定的。进一步的二次体内注射研究表明，此载体是国内已报道的最适于肌细胞途径血友病Ｂ基因治疗的反转录病毒载体。
- 施前卢大儒包云陈煜华邱信芳薛京伦
- 关键词：基因治疗血友病B成肌细胞内含子
- 胃癌侧群细胞检测分选及其增殖能力的初步分析被引量：4
- 2009年
- 目的检测和分选胃癌细胞系中的侧群细胞(side population,SP),并对其体外增殖能力进行初步分析。方法选择3株不同分化程度的人胃癌细胞系MKN-28、SGC-7901、BGC-823,以Hoechst 33342/碘化丙啶(propidium iodide,PI)荧光染料双染,维拉帕米拮抗对照,应用流式细胞仪荧光激活分选法检测SP细胞比例;通过细胞生长曲线(CCK-8法)对SP细胞体外增殖能力进行初步分析。结果3株胃癌细胞中均存在含量极少的SP细胞,比例在0.8%～2.7%之间;SP细胞比例随着胃癌细胞分化程度降低而下降(2.20%vs1.57%vs0.93%,P=0.023)。人胃癌细胞系MKN-28来源的SP细胞体外培养1周、2周后的增殖倍数分别为22.67和290,明显高于非SP细胞培养后的13.68和124。细胞生长曲线显示,SP细胞体外增殖能力明显强于non-SP细胞及未经分选的MKN-28细胞(P=0.044)。结论胃癌细胞系中存在比例相对稳定的SP细胞,SP细胞比例随着胃癌细胞分化程度增高而上升。胃癌SP细胞体外增殖能力明显高于非SP细胞。
- 李雪汪学非唐兆庆沈振斌孙益红施前汤其群秦新裕
- 关键词：胃癌侧群细胞肿瘤干细胞细胞生长曲线
- 人脑胶质瘤标志物GFAP自身抗体及其用途
- 本发明属生物技术和医学领域。涉及人脑胶质瘤标志物，具体涉及一种能区分人脑胶质瘤的蛋白标志物GFAP自身抗体的检测及其用途。本发明应用纯化的GFAP蛋白进行ELISA分析，检测正常人和各级脑胶质瘤病人血清中的GFAP自身抗...
- 施前危平张伟杨柳松
- 文献传递
- 一种人肿瘤标志物-Tim17多肽及其用途
- 本发明属生物技术和医学领域，涉及新的人肿瘤标志物-Tim17多肽，编码Tim17的多核苷酸序列和经重组技术产生该蛋白的方法。本发明还涉及Tim17蛋白及其编码序列的用途，以及含Tim17蛋白拮抗剂的药物组合物。经实验显示...
- 施前徐晓恩乔萌张扬
- 基于ELISA的神经胶质酸性蛋白自身抗体的血清含量测定及其在脑胶质母细胞瘤诊断中的应用
- 2011年
- 目的发展基于ELISA的血清神经胶质酸性蛋白(glial fibnillary acidic protein,GFAP)自身抗体含量测定方法,用于脑胶质瘤患者的诊断。方法克隆GFAP基因至pGEX-6p-1载体,使用大肠埃希菌中纯化得到的GFAP重组蛋白包被96孔板,经封闭后依次孵育稀释的血清样本和偶联HRP的羊抗人二抗,最后加入TMB底物显色,硫酸终止显色反应,测定各孔吸光度。结果 pGEX-6p-1-GFAP质粒在大肠埃希菌Rosetta菌株中表达产生了大量GFAP重组蛋白,所得蛋白经洗脱纯化后用作ELISA反应底物。ELISA实验中,脑胶质瘤患者血清D值明显高于正常人,差异有显著统计学意义。结论使用GFAP作为抗原的ELISA实验可作为应用GFAP自身抗体进行脑胶质瘤患者血清诊断的一种候选方法。
- 张伟危平施前
- 关键词：脑胶质瘤ELISA实验
- 一种人少突神经胶质瘤标志物MAP2蛋白及其用途
- 本发明属生物技术和医学领域。涉及人少突神经胶质瘤标志物，具体涉及一种能区分临床上具有化疗敏感的、1P等位基因杂合性缺失的人少突神经胶质瘤的蛋白标志物MAP2蛋白及其用途。本发明通过iTRAQ-LC-MS/MS技术，确定了...
- 施前杨柳松徐晓恩
- 文献传递
- 生物素标记法分析MCF-10A细胞质膜蛋白质被引量：2
- 2010年
- 目的优化细胞膜蛋白分离纯化技术,以期实现快速、高效分析细胞膜蛋白质。方法本文以乳腺细胞系MCF-10A为模型,用sulfo-NHS-LC-biotin标记完整的活细胞,使细胞表面蛋白生物素化,细胞裂解后利用链亲和素对膜蛋白进行分离富集,再洗脱膜蛋白,达到分离纯化的目的。利用液相层析偶合串联质谱技术(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)鉴定提取得到MCF-10A膜蛋白。结果 sulfo-NHS-LC-biotin浓度为0.2 mg/mL时得到的标记纯化膜蛋白最多,可作为标记最适浓度。利用这种方法鉴定出256个蛋白质,生物信息学分析表明其中膜蛋白占63%,比传统膜蛋白分离纯化方法得到的结果好。结论这种方法省去常规分离膜蛋白时所需的超速离心,具有操作简单、可行性高、平行性高的特点,有望用于规模化肿瘤膜蛋白的差异比较,为肿瘤早期诊断及治疗提供新的靶标。
- 路静施前
- 关键词：蛋白质组生物素化
