目的:探讨慢性乙型肝炎(乙肝)患者外周血CD4^(+)Th细胞内赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(histone lysine specific demethylase 1,LSD1)表达水平与Th1/Th2平衡的关系,初步探讨LSD1介导的组蛋白修饰对慢性乙肝患者CD4^(+)Th细胞分化的作用。方法:选择2017年6月至12月在南通大学附属医院感染科住院的慢性乙肝患者65例,分为丙氨酸转氨酶(ALT)高水平[>4×ULN(正常上限)]组与低水平(≤4×ULN)组,HBV-DNA高载量(≥10^(6)拷贝/mL)组与低载量(<106拷贝/mL)组。以同期在该院体检的30例健康人为对照。采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,免疫磁珠法分选CD4^(+)Th细胞;提取CD4^(+)Th细胞总蛋白,以Western印迹法检测LSD1表达水平。采用ELISA法检测血清中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)含量;用微粒子化学发光法检测血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)含量;用实时定量PCR法检测血清HBV-DNA载量。结果:慢性乙肝组患者外周血CD4^(+)Th细胞中LSD1表达水平高于健康人(0.52±0.21 vs 0.28±0.09,t=-7.49,P<0.001)。慢性乙肝患者中,CD4^(+)Th细胞中LSD1表达量在ALT高水平组(n=38)低于低水平组(n=27,0.39±0.18 vs 0.64±0.16;t=-5.79,P<0.001),在HBV-DNA高载量组(n=32)高于HBV-DNA低载量组(n=33,0.69±0.08 vs 0.35±0.16;t=10.80,P<0.001)。与健康人相比,慢性乙肝组血清IFN-γ含量降低、IL-4含量增高、IFN-γ/IL-4比值减小(P<0.05)。慢性乙肝患者外周血CD4^(+)Th细胞中LSD1表达量与其血清ALT水平(r=-0.590)、IFN-γ水平(r=-0.379)及IFN-γ/IL-4(-0.285)负相关(P<0.01),与HBV-DNA载量正相关(r=0.880,P<0.001),与血清IL-4水平无相关性(r=0.169,P=0.102)。结论:LSD1高表达可能是慢性乙肝患者体内Th1/Th2失衡、Th1反应水平下降的原因之一,并导致机体清除HBV能力减弱或抑制HBV复制能力减弱。
目的:探讨氧化苦参碱(OMT)联合复方茵陈颗粒(FYK)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肝BRL-3A细胞凋亡的抑制作用及其机制,为该联合用药抑制肝细胞凋亡提供更多的实验依据。方法:采用LPS诱导大鼠肝BRL-3A细胞建立细胞凋亡模型。应用CCK-8法测定BRL-3A细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测BRL-3A细胞中TLR4、P38、P-P38、JNK及P-JNK蛋白的表达;RT-q PCR法检测BRL-3A细胞中Bax、Bcl-2及Caspase-3 m RNA的表达。结果:CCK-8法结果显示,OMT可以减弱由LPS引起的细胞活力降低(P<0.05),OMT+FYK-M+LPS组及OMT+FYK-H+LPS组细胞活力高于OMT组(P<0.05);OMT预处理后细胞凋亡率低于LPS组(P<0.05),OMT+FYK-M+LPS组及OMT+FYK-H+LPS组细胞凋亡率低于OMT组(P<0.05)。Western blot结果显示,LPS组TLR4、P-P38/P38、P-JNK/JNK的表达较正常组增加(P<0.05);OMT可以下调TLR4、P-P38/P38、P-JNK/JNK的表达(P<0.01,P<0.05),OMT+FYK-M+LPS组及OMT+FYK-H+LPS组TLR4、P-P38/P38低于OMT组(P<0.05)。OMT+FYK-H+LPS组P-JNK/JNK低于OMT组(P<0.05)。RT-q PCR结果显示:LPS组Bax/Bcl-2及Caspase-3 m RNA表达较正常组明显增高(P<0.01)。OMT能够降低Bax/Bcl-2及Caspase-3 m RNA的水平(P<0.05)。OMT+FYK-M+LPS组、OMT+FYK-H+LPS组Bax/Bcl-2及Caspase-3 m RNA表达低于OMT组(P<0.05,P<0.01)。结论:OMT联合FYK预处理可通过TLR4/P38/JNK信号通路抑制BRL-3A细胞凋亡。
