朱静
- 作品数：43 被引量：159H指数：8
- 供职机构：北京大学第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目面向21世纪教育振兴行动计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 组织因子对结直肠癌细胞肺转移作用的研究被引量：2
- 2005年
- 目的探讨组织因子表达对结直肠癌细胞血行转移能力的影响。方法利用构建有正义/反义组织因子cDNA(TFcDNA)的真核表达载体pcDNA3.1/Zeo,以脂质体法转染LOVO细胞,采用Western印迹分析检测转染成功LOVO细胞的组织因子蛋白表达水平。18只裸鼠(Babl/cnu/nu)随机分成3组,分别将转染了正义/反义TFcDNA的LOVO细胞及未转染的LOVO细胞通过尾静脉接种至裸鼠体内。8周后观察裸鼠发生肺转移的数目,以肺转移的数目反映LOVO细胞的转移能力。结果转染了正义TFcDNA的LOVO细胞的组织因子表达水平及肺转移数目较未转染的LOVO细胞升高(P<0.05,P<0.01);转染了反义TFcDNA的LOVO细胞的组织因子表达水平及肺转移数目较未转染的LOVO细胞相比则降低(P<0.05,P<0.01)。结论组织因子可以增加人类结直肠癌细胞的体内血行转移能力。
- 戎龙万远廉刘玉村姚宏伟汪欣吴涛潘义生朱静
- 关键词：结肠直肠肿瘤LOVO细胞肺转移结直肠癌细胞真核表达载体PCDNA3.1蛋白表达水平
- 化学治疗药物对大肠癌细胞端粒酶活性的影响被引量：3
- 2002年
- 目的研究常用化学药物对大肠癌细胞HT 2 9端粒酶活性的影响。方法利用端粒酶重复扩增实验 (TRAP)结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法 ,测定HT 2 9细胞经过几种化学药物(顺铂、阿霉素、吡柔比星、丝裂霉素、5 FU)不同浓度和时间作用后端粒酶活性的变化。结果当各种药物大剂量处理细胞 4h后再祛除药物培养 2 0h ,顺铂对酶的活性完全抑制 ,丝裂霉素 ,吡柔比星 ,阿霉素和 5 FU无明显抑制作用 ;而未经 2 0h再培养则无作用 ;小剂量药物处理细胞 6d ,其结果同大剂量相似。结论顺铂对大肠癌HT 2 9细胞端粒酶活性有明显抑制作用 。
- 鞠晓明徐文怀万远廉朱静王智勇
- 关键词：化学疗法HT29细胞端粒酶活性大肠癌
- Pyk2在胃癌组织中的表达及其意义被引量：9
- 2005年
- 目的:研究Pyk2(proline richtyrosinekinase 2)在正常胃黏膜组织与胃癌组织中表达的差异, 探讨其意义。方法:应用免疫组织化学的方法检测59例正常胃黏膜组织标本和52例胃癌组织标本中Pyk2的表达情况。结果:免疫组织化学结果显示,Pyk2在正常胃黏膜组织中的表达阳性率为86. 44% (51 /59),在胃癌组织中表达阳性率为19. 23% (10 /52),两者差异具有统计学意义(P<0. 05);在高分化胃癌中表达阳性率为47. 37% (9 /19),而在中、低分化胃癌中表达阳性率为3. 03% (1 /33),两者差异具有统计学意义(P<0. 05 )。Pyk2表达阳性率在不同TNM分期胃癌中分别为:Ⅰ期66. 67% (6 /9),Ⅱ期30% (3 /10),Ⅲ期3. 45% (1 /29),Ⅳ期0% (0 /4),差异具有统计学意义[ (Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ)νⅠ,χ2 =15 767,P<0. 05) ]。结论:本研究观察到Pyk2在正常胃黏膜组织中有表达,在胃癌组织中低表达或几乎无表达,并且其表达随着胃癌恶性度和TNM分期的增加而逐渐降低。提示Pyk2可能在胃癌的发生、发展过程中起重要作用。
- 郭宏杰汪欣刘玉村万远廉尹洪芳李挺朱静
- 关键词：PYK2胃癌组织胃黏膜组织癌组织标本高分化恶性度
- 携带Pyk2基因的shRNA质粒构建及其在Lovo结肠癌细胞系中的表达
- 2010年
- 目的:构建重组质粒PGCsi-Pyk2shRNA,并检测所引起的Pyk2mRNA和蛋白在Lovo结肠癌细胞系中的表达.方法:设计合成3对Pky2基因shRNA序列,形成双链后将其依次连入带有U6启动子并含有潮霉素B的pGCsi空载体,构建成能产生Pyk2短发卡RNA的质粒;采用双酶切和测序分析鉴定插入基因的序列;脂质体介导重组质粒pGCsi-Pyk2shRNA稳定转染Lovo细胞系并通过潮霉素B筛选,获得比较单一的转染细胞;分别采用RT-PCR、Westernblot等检测转染前后Pyk2的水平表达.结果:酶切鉴定和测序分析表明重组表达质粒pGCsi-Pyk2shRNA构建无误;绿色荧光照相及PCR表明质粒转染成功;RT-PCR和Westernblot均表明,与转染空质粒PGCsi组和转染仅含免疫荧光基因组细胞相比,转染重组表达质粒pGCsi-Pyk2shRNA细胞中Pyk2mRNA及蛋白表达水平均明显降低.结论:成功构建重组质粒pGCsi-Pyk2shRNA,并证明他能降低Pyk2在Lovo细胞株系中的表达,为进一步研究Pyk2如何调控Hic-5/ARA55,Paxillion等下游靶基因的表达和参与结肠癌表观遗传学发生机制奠定了基础.
- 胡刚汪欣郑启军万远廉刘玉村朱静
- 关键词：PYK2结肠癌小发夹RNA
- 组织因子对大肠癌细胞肝转移能力的作用被引量：7
- 2006年
- 目的探讨组织因子(TF)表达对大肠癌细胞血行转移能力的影响。方法利用构建有正义／反义组织因子cDNA(TFcDNA)的真核表达载体pcDNA 3.1／Zeo,以脂质体法转染LoVo 细胞,经验证转染成功的LoVo细胞采用Western blot检测组织因子的蛋白表达水平,再将24只裸鼠(BALB／C nu／nu)随机分成3组,分别将转染了正义／反义TFcDNA的LoVo细胞及未转染的Lo- Vo细胞通过脾接种至裸鼠体内。6周后观察裸鼠发生肝表面转移灶的数目,以肝表面转移灶的数目反映LoVo细胞的转移能力。结果与LoVo细胞相比,转染了正义TFcDNA的LoVo细胞的 TF表达水平升高,而转染了反义TFcDNA的LoVo细胞的TF表达水平则降低(F=33．9,P< 0．01)。转染了正义TFcDNA的LoVo细胞组比LoVo组的肝转移灶的数目多,而转染了反义TFcD- NA的LoVo细胞组则比LoVo组的肝转移灶的数目少(F=52．1,P<0．01)。结论组织因子可以增加人类大肠癌细胞的体内血行转移能力。
- 戎龙万远廉刘玉村姚宏伟汪欣吴涛潘义生朱静
- 关键词：大肠癌裸鼠
- Hic-5／ARA55抑制大肠癌细胞生长的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的研究Hic-5／ARA55对大肠癌细胞生长的影响及其机制。方法流式细胞仪检测已稳定转染Hic-5／ARA55的大肠癌细胞系（Lovo-Hic-5／ARA55组）的细胞周期，用未转染质粒（Lovo组）和转染空质粒的Lovo细胞（Lovo-Vector组）作为对照。Western blot方法检测各组细胞之间主要细胞周期蛋白的表达差异，Luciferase Assay进一步研究Hic-5／ARA55与细胞周期蛋白的作用机制。建立裸鼠皮下种植瘤模型，7周后切取瘤体并称重，应用免疫组织化学方法检测各组皮下种植瘤的Hic-5／ARA55及相关细胞周期蛋白的表达差异。结果Lovo-Hic-5／ARA55组细胞由G0／G1期进入S期明显延迟，并且细胞周期蛋白P27表达升高，Lueiferase Assay证明Hic-5／ARA55在转录水平上调P27的表达。Lovo-Hic-5／ARA55组皮下种植瘤质量[（0．33±0．23）g]明显低于Lovo组[（1．20±0．39）g]和Lovo-Vector组[（1．30±0．49）g]，差异有统计学意义（P〈0．05）。Lovo-Hic-5／ARA55组种植瘤Hic-5／ARA55和P27均高表达，而Lovo组和Lovo-Vector组均低表达或阴性表达，差异有统计学意义（P〈0．05），并且Hic-5／ARA55和P27的表达呈正相关（r=0．816，P〈0．05）。结论Hic-5／ARA55在体外和裸鼠体内均通过在转录水平上调细胞周期抑制蛋白P27的表达来抑制大肠癌细胞的生长。
- 武颖超汪欣刘玉村万远廉朱静
- 关键词：结肠直肠肿瘤肿瘤生长P27
- 热疗联合组织因子靶向治疗对人大肠癌细胞增殖及凋亡的影响被引量：4
- 2012年
- 目的探讨热疗联合组织因子(TF)靶向治疗在体内和体外对人大肠癌细胞增殖及凋亡的影响。方法用RNA干扰的方法敲低大肠癌LOVO细胞系中TF的表达,MTT法、流式细胞术、Western blot方法测定热疗联合TF敲低对LOVO细胞体外增殖抑制及细胞凋亡的影响。将人大肠癌细胞注射到裸鼠腹股沟皮下建立裸鼠皮下移植瘤模型,观察不同治疗方法对肿瘤生长的影响。结果用RNA干扰的方法可以有效降低大肠癌LOVO细胞系中TF的表达。与单独热疗和单独TF敲低相比,联合治疗能够明显抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的发生(P<0.05)。热疗联合TF敲低能够有效抑制裸鼠体内的肿瘤生长。结论热疗和TF敲低联合应用能够抑制大肠癌细胞增殖并且诱导其凋亡,热疗联合TF靶向治疗是一个潜在的治疗大肠癌的新策略。
- 李辉张静汤坚强万远廉于歌汪欣朱静
- 关键词：结直肠肿瘤凝血致活酶细胞凋亡热疗
- 下调paxillin高表达对结直肠癌细胞SW480细胞信号转导及超微结构的影响
- 2013年
- 目的:探讨下调paxillin高表达对结直肠癌细胞SW480细胞信号转导及超微结构的影响.方法:设计两种siRNA片段并用其转染高表达paxillin的结直肠癌细胞SW480细胞系,以空质粒作为阴性对照,构建稳定转染细胞系.NC组为转染空质粒的细胞系,SW545组是稳定转染针对paxillin545-565靶基因位点的siRNA片段的细胞系,SW782组是稳定转染针对paxillin782-802靶基因位点的siRNA片段的细胞系.Western blot检测SW480、NC、SW545及SW7824组细胞系中paxillin、FAK、ERK1/2及AKT1/2/3的表达及特异位点磷酸化水平.利用培养细胞制备切片,透射电镜下观察几组细胞系的超微结构.结果:SW545细胞paxillin的高表达无明显改变,SW782细胞paxillin的高表达被显著下调,SW782细胞paxillin(Tyr118)磷酸化水平也显著降低.SW782细胞ERK1/2的表达水平无明显变化,但是ERK1/2(Thr202/Tyr204)磷酸化水平显著降低.SW782细胞AKT1/2/3及FAK的表达及特异位点磷酸化水平均无明显变化.与SW480细胞相比,NC组细胞无明显超微结构改变,但是SW782细胞却发生了显著的超微结构变化,具有明显增多的微绒毛、微丝微管束与溶酶体以及明显减少的线粒体.结论:下调paxillin高表达能够逆转SW480细胞典型的恶性转化细胞的超微结构特征,paxillin高表达可能通过磷酸化激活paxillin及ERK1/2信号转导通路从而在结直肠癌发生发展中起着非常重要的作用.
- 郑建伟尹洪芳汪欣刘玉村万远廉朱静
- 关键词：桩蛋白细胞信号转导超微结构
- 组织因子促进人类大肠癌细胞的侵袭及与基质金属蛋白酶类的相关性研究被引量：13
- 2005年
- 目的:探讨组织因子促进人类大肠癌细胞侵袭的机制,研究其与MMP 2和MMP 9的相关性。方法:获取转染正义/反义TFcDNA的人类大肠癌HT 29细胞系/LoVo细胞系裸鼠皮下种植瘤标本,应用Westernblot和RT PCR技术,检测转染组和对照组肿瘤组织中MMP 2和MMP 9的蛋白和mRNA表达水平;同时采用明胶酶谱法检测转染反义LoVo细胞系培养上清中的MMP 2和MMP 9活性的变化。结果:与对照组相比较,转染正义TFcDNA的HT 29细胞系成瘤标本TF表达升高,其所对应的MMP 9和MMP 2蛋白水平和mRNA水平表达也明显升高; 转染反义TFcDNA的LoVo细胞系成瘤标本中的TF,MMP 9和MMP 2蛋白和mRNA水平表达明显低于对照组,转染反义TFcDNA的LoVo细胞系培养上清液中的MMP 9和MMP 2活性较对照组低;MMP 9和MMP 2表达与组织因子表达具有相关性。结论:组织因子促进人类大肠癌细胞的侵袭,其部分机制可能与组织因子上调MMP 9和MMP 2的表达有关,组织因子可能是大肠癌细胞分泌MMPs的内在激动剂。
- 汤坚强万远廉刘玉村戎龙汪欣吴涛潘义生叶京明姚宏伟朱静
- 关键词：基质金属蛋白酶类HT-29细胞系MMP-9活性转染反义皮下种植瘤明胶酶谱法
- 组织因子/凝血因子Ⅶ在大肠癌中的异位表达及其临床意义被引量：5
- 2009年
- 目的:探讨凝血因子Ⅶ(coagulation factorⅦ,FⅦ)和组织因子(tissue factor,TF)在大肠癌中的表达情况及其与临床病理因素的关系。方法:应用免疫组织化学法及Western blot对FⅦ蛋白在大肠癌组织中的表达情况进行研究;应用实时荧光定量PCR技术检测FⅦ和TF基因在45例结直肠癌患者癌及相应癌旁正常黏膜的表达。结果:(1)免疫组织化学及Western blot结果均显示FⅦ蛋白在大肠癌组织中存在异位高表达现象,癌旁正常黏膜不表达FⅦ蛋白;(2)免疫组织化学方法证实FⅦ蛋白定位表达于肿瘤细胞的胞浆和胞膜,大肠癌Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期的FⅦ表达阳性率分别为33.3%,40.0%,64.7%及80.0%(P=0.001);(3)实时荧光定量PCR方法显示大肠癌肝转移组FⅦmRNA表达明显高于非转移组,肝转移组表达量为5.33±2.88,无转移组为1.47±0.51(P=0.03),FⅦmRNA表达与肿瘤大小、分化、浸润深度、有无淋巴结转移及TNM分期无关,Spearman相关分析显示FⅦ在mRNA和蛋白水平表达呈一定的相关性,相关系数为0.58(P=0.03);(4)TF mRNA表达与大肠癌淋巴结转移、肝转移及TNM分期均有关,Logistic多因素回归分析影响肝转移的因素,结果表明TF表达是肝转移发生的重要因素(P=0.001)。结论:大肠癌组织可异源性地表达和分泌FⅦ,TF高表达是大肠癌发生肝转移的重要因素,肿瘤细胞周围高FⅦ的微环境可能促进大肠癌的转移。
- 汤坚强樊庆万远廉刘玉村汪欣吴涛潘义生吴问汉朱静
- 关键词：结直肠肿瘤凝血致活酶肿瘤转移
