李宝华
- 作品数：9 被引量：9H指数：3
- 供职机构：中山大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学经济管理更多>>
- 恶性疟原虫FCC1/HN株己糖激酶基因的扩增、克隆和序列分析(英文)
- 2004年
- 目的扩增恶性疟原虫FCC1/HN株的己糖激酶(HK)编码基因,构建其原核和真核表达重组质粒,测定其序列,比较它及它推导的蛋白质与恶性疟原虫其他株和人之间的差异.方法用PCR方法从FCC1/HN株基因组中扩增HK基因;将它分别定向克隆到原核表达质粒pET-30a(+)和真核表达质粒pcDNA3,分别转化大肠埃希菌BL21/DE3 和JM109感受态细菌;经酶切、PCR扩增鉴定筛选到阳性重组克隆,用双脱氧链末端终止法测定其序列,用生物信息学软件分析HK序列及进行同源性比较.结果 PCR扩增得到特异的FCC1/HN株HK基因,大小为1 482 bp,编码493个氨基酸.其氨基酸序列与3D7株完全相同,与K1株的同源性高达99.8%,但与人的4型HK的同源性只有23.2%～26.6%.结论获得恶性疟原虫FCC1/HN株的HK基因,成功构建了其原核和真核表达质粒,并测定了其序列;恶性疟原虫的HK在不同的分离株间高度保守,但与人的同源性很低,可能是一个潜在的药物靶标.
- 伍忠銮余新炳吴忠道徐劲陈守义李宝华
- 关键词：疟原虫己糖激酶克隆
- 恶性疟原虫海南FCC1/HN株嘌呤核酸磷酸化酶（PNP）基因的克隆和原核表达
- ＜正＞ 根据恶性疟原虫FCB株嘌呤核酸磷酸化酶（PNP）基因编码序列,设计一对引物,并分别引入EcoRⅠ和XhoⅠ内切酶位点,采用PCR技术从恶性疟原虫FCC/UN株基因组DNA中特异扩增PNP基因。纯化后扩增产物用Ec...
- 李宝华余新炳吴忠道徐劲陈守义伍忠銮
- 关键词：恶性疟原虫克隆
- 文献传递
- 恶性疟原虫FCC1/HN株HK、PK和PRS基因的扩增、克隆和序列分析
- ＜正＞ 为了扩增恶性疟原虫FCC1/HN株的己糖激酶（HK）、丙酮酸激酶（PK）和磷酸核糖焦磷酸合成酶（PRS）的编码基因,构建它们的原核和真核表达重组质粒,明确它们推导的氨基酸序列与恶性疟原虫其他株及人之间的差异。根据...
- 伍忠銮余新炳吴忠道徐劲陈守义李宝华
- 关键词：恶性疟原虫己糖激酶丙酮酸激酶克隆
- 文献传递
- 恶性疟原虫海南株PNP基因的克隆、表达及功能初步研究
- 疟原虫没有从头合成嘌呤的途径,依靠补救合成途径以利用现成嘌呤碱或嘌呤核苷.为满足红细胞内期疟原虫大量裂体增殖,嘌呤补救合成十分活跃.参与嘌呤补救合成的酶有腺苷脱氨酶、嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)等,其中PNP是关键酶.该研...
- 李宝华
- 关键词：恶性疟原虫克隆纯化
- 文献传递
- 日本血吸虫thioredoxin基因的克隆和表达被引量：3
- 2004年
- 目的结合分子生物学和生物信息学方法筛选鉴定日本血吸虫新基因。方法从日本血吸虫(Schistosomajaponicum,大陆株)成虫cDNA文库中获取表达序列标签(expressedsequencetag,EST),用电子拼接的方法延伸序列,用NCBI提供的BLASTx程序和Genbank数据库进行同源性分析以筛选基因;设计特异性引物从日本血吸虫成虫mRNA中扩增筛选基因并预测和分析;扩增产物克隆到原核表达载体并表达。结果筛选出日本血吸虫Thioredoxin全长基因并对其进行了序列分析,克隆全长cDNA至PET原核载体并表达成功。结论结合EST、电子延伸和传统的分子生物学方法是高效筛选S.japonicum功能基因的有效策略。
- 邵筱余新炳吴忠道王海梁柏年李宝华
- 关键词：日本血吸虫THIOREDOXIN基因克隆基因表达硫氧还蛋白
- 恶性疟原虫FCC1/HN株嘌呤核酸磷酸化酶(PNP)基因的克隆和原核表达
- 2004年
- 目的 从恶性疟原虫基因组中扩增、克隆恶性疟原虫嘌呤核酸磷酸化酶(PNP)基因,并进行原核表达产物。方法根据恶性疟原虫FCB株嘌呤核酸磷酸化酶基因编码序列,设计一对引物,引入EcoR I和Xho I。采用PCR技术从恶性疟原虫FCC/HN株基因组DNA中特异扩增PNP基因。纯化后扩增产物用EcoR I和Xho I双酶切后,定向克隆入原核质粒pET30a(+)和真核质粒pcDNA3,重组质粒pET30a(+)-PNP转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性重组子后,用PCR、EcoRI+Xho I双酶切和DNA序列测定鉴定。用IPTG诱导重组质粒pET30a(+)-PNP表达融合蛋白。结果 从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组中特异扩增出PNP基因,将扩增的目的基因亚向插入pET30a(+)和pcDNA3表达质粒的EcoR I和XhoI位点;重组子pET30a(+)-PNP在大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达中表达,表达融合蛋白分子量为31.4kDa。结论 从恶性疟原虫基因组中获取PNP基因,并成功构建pET30a(+)-PNP和pcDNA3-PNP重组质粒,获得PNP原核表达产物。
- 李宝华余新炳吴忠道徐劲陈守义伍忠銮
- 关键词：恶性疟原虫克隆
- 日本血吸虫(大陆株)成虫表达序列标签的获取及电子延伸被引量：3
- 2004年
- 目的获取日本血吸虫(Schistosomajaponicum,Sj)新基因。方法从Sj(大陆株)成虫cDNA文库中随机挑选单个重组克隆进行部分测序以获取表达序列标签(expressedsequencetag,EST),用其提供的BLAST程序和Genebank数据库进行序列比较和同源性分析;建立电子拼接的方法,对所获EST进行电子延伸,并对Sj延伸后序列进行同源性分析。结果在Sj成虫cDNA文库中,随机挑选182个单个重组克隆,获取53个有价值EST序列,并在Genebank中登录,获得53个EST的延伸序列及分析结果。结论Sj表达基因EST测序、同源性分析及EST的电子延伸是获取Sj新基因的有效对策。
- 邵筱余新炳吴忠道徐劲李焱刘翰腾李华文李宝华
- 关键词：日本血吸虫表达序列标签成虫生物信息学
- 宝洁公司新化妆品开发项目的时间管理及风险管理研究
- 在目前已有的项目管理方向的研究中，新化妆品开发项目几乎无人关注。本文以宝洁公司在中国从事的新化妆品开发项目为对象，对其项目时间及风险管理的理论和实践进行了研究。
研究的内容：首先论述了宝洁公司的项目管理体系、时间和...
- 李宝华
- 文献传递
- 恶性疟原虫FCC1/HN株丙酮酸激酶基因的扩增、克隆和序列分析(英文)被引量：3
- 2003年
- 目的 扩增恶性疟原虫海南株FCC1/HN的丙酮酸激酶 (PK)的编码基因 ,构建其原核和真核表达重组质粒 ,测定其序列 ,并了解它及它推导的蛋白质与恶性疟原虫 3D7和人PK基因之间的差异。 方法 根据 3D7的PK基因设计合成一对引物 ,用PCR从FCC1/HN株基因组中扩增PK基因 ;将它分别定向克隆到原核表达质粒PGEX 4T 1和真核表达质粒 pcDNA3 ,分别转化大肠杆菌JM 10 9感受态细菌 ;经酶切、PCR扩增鉴定筛选到阳性重组克隆 ,用双脱氧链末端终止法测定其序列 ,用生物信息学软件分析PK序列及进行同源性比较。 结果 PCR扩增得到特异的FCC1/HN株PK基因 ,大小为 2 2 3 5bp ,编码 744个氨基酸。其氨基酸序列与 3D7的同源性高达 99.9% ,与约氏疟原虫的同源性为 70 .2 % ,但与弓形虫和人的PK的同源性分别只有 2 0 .9%和 2 1.6%～ 2 5 .4%。 结论 从FCC1/HN株基因组中获取了PK基因 ,成功构建了其原核和真核表达质粒 ,并测定了其序列 ;它与 3D7的PK高度同源 ,但与人的PK基因同源性很低 ,可能是一个药物靶标。
- 伍忠銮余新炳吴忠道徐劲陈守义李宝华
- 关键词：恶性疟原虫丙酮酸激酶克隆细菌
