李慎涛
- 作品数：41 被引量：96H指数：4
- 供职机构：首都医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金北京市教委科技发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 稀有密码子影响人RNaseH-Apaf1融合蛋白原核表达被引量：2
- 2015年
- 通过限制性内切酶克隆法构建两个pET-28a-TAT-RNaseH-Apaf1重组质粒,其中一个质粒经过稀有密码子的优化。将两个重组质粒分别转化原核表达宿主菌BL21(DE3)和Transetta(DE3),通过SDS-PAGE观察相应融合蛋白诱导表达的情况,并用His标签抗体和Apaf1抗体通过Western Blotting鉴定诱导蛋白。菌液PCR和测序证明经稀有密码子优化和未经稀有密码子优化的人源RNaseH-Apaf1序列成功重组到pET-28a-TAT载体中;经稀有密码子优化的重组质粒成功地在大肠杆菌宿主菌中表达RNaseH-Apaf1融合蛋白,并用Western Blotting检测到该融合蛋白。结果表明,稀有密码子可影响人RNaseH-Apaf1融合蛋白的原核表达。
- 兰泓孔劭凡李慎涛张玉祥
- 关键词：稀有密码子原核表达
- 核心蛋白聚糖与肝纤维化研究进展被引量：1
- 2008年
- 该文综述了核心蛋白聚糖(Decorin,DC)的结构、功能以及其来源方式,并且介绍了核心蛋白聚糖与胶原纤维和细胞因子的作用、肝纤维化的机制以及核心蛋白与肝纤维化的关系,及其临床应用前景。
- 熊丽丽祁雅慧李慎涛马怀安
- 关键词：核心蛋白聚糖肝纤维化转化生长因子-Β
- 人VEGF在NIH3T3细胞中的基因转移和表达被引量：1
- 2008年
- 目的研究人血管内皮细胞生长因子(human VEGF)在体外培养的小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)中的基因转移及表达,为血管化组织工程、缺血性疾病的治疗奠定实验基础。方法应用脂质体介导的基因转移技术,将含有人VEGF165编码序列的真核表达载体pcDNA/V转染至体外培养的NIH3T3细胞系中。G418筛选出稳定表达重组质粒的细胞克隆,转接于细胞瓶中,培养72 h,同时以G418筛选的pcDNA3.1(+)阳性细胞克隆和未转染的NIH3T3细胞为阴性对照,取细胞培养上清及细胞裂解液样品进行Western blotting检测。用细胞免疫组织化学染色检测人VEGF165基因在NIH3T3细胞中的表达情况,不着色者为阴性,细胞胞质着色呈棕黄(褐)色者为阳性。结果Western blotting结果显示在转染pcDNA/V质粒的NIH3T3细胞培养上清中,可以检测到相对分子质量为22 000的反应条带,与预计的人VEGF165单体蛋白的相对分子质量相符。细胞免疫组织化学染色检测结果显示,转染pcDNA/V质粒的NIH3T3细胞呈阳性。结论人VEGF165能够在NIH3T3细胞中有效表达,并获得了稳定表达人VEGF165基因的NIH3T3细胞株。
- 王雅梅李慎涛温铭杰孙丽翠司杨闫豫东祁雅慧
- 关键词：血管内皮细胞生长因子真核表达载体基因表达
- 猪肌生成抑制素基因原核表达载体的构建及其表达
- 从猪肌生成抑制素(MSTN)编码序列中设计引物,去除其信号肽的编码序列,扩增出MSTN cDNA片段,所获片段全长1225bp,包含猪MSTN基因的编码序列.将所得片段与pMD18-T载体连接,转化到JM109大肠杆菌中...
- 李慎涛欧阳红生张玉静张锐廖晓萍孙博兴张永亮
- 文献传递
- 猪肌生成抑制素(MSTN)cDNA的克隆被引量：14
- 2001年
- 从猪的肌生成抑制素 ( MSTN)编码序列中设计引物 ,以军牧一号猪肌细胞总 RNA为模板 ,利用 RT-PCR和嵌套 PCR技术 ,扩增出 MSTN c DNA片段。该片段全长 1 2 77bp,包含猪 MSTN基因的全部编码序列。将所得片段与 p MD1 8-T载体连接 ,转化到 JM1 0 9大肠杆菌中 ,成功地筛选到阳性克隆 ,其质粒测序结果与文献报道的一致。经 Eco R 和 Pst 酶解分析 ,c DNA片段与 p MD1 8-T载体之间既有正向插入的克隆 ,也有反向插入的克隆 ,所得到的 MSTN c
- 李慎涛孙博兴欧阳红生张玉静廖晓萍张锐张永亮吴文甲
- 关键词：肌生成抑制素基因克隆
- 人核心蛋白聚糖的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的在大肠杆菌中高效表达人核心蛋白聚糖,并建立适当的纯化方法,制备重组蛋白。方法根据GenBank中人核心蛋白聚糖的序列设计特异性引物,从人肝cDNA文库中PCR扩增核心蛋白聚糖的编码序列,克隆到原核表达载体pET42 a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,获得以高效表达的目的重组蛋白;用SDS-PAGE和质谱鉴定重组蛋白。结果重组蛋白主要以包涵体形式表达,SDS-PAGE显示其分子质量与预期结果相符;经质谱鉴定,表达的重组蛋白为人核心蛋白聚糖。结论成功地在大肠杆菌中高效表达了人核心蛋白聚糖,并纯化得到人核心蛋白聚糖蛋白,经鉴定,纯化所得到的蛋白为人核心蛋白聚糖。
- 王利民温铭杰李慎涛
- 关键词：核心蛋白聚糖原核表达蛋白纯化质谱鉴定
- OPG-HSP65重组蛋白的原核表达及其生物学活性研究被引量：1
- 2009年
- PCR扩增OPG-HSP65基因,构建原核重组表达载体pET-28a-OPG-HSP65,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达产生包涵体形式的目的蛋白。对重组蛋白进行Western blot检测表明,重组蛋白能与抗His-Tag单克隆抗体及鼠抗人OPG单克隆抗体特异性结合。对重组蛋白进行尿素洗涤纯化,进而透析、复性。经破骨细胞生长抑制实验和抑炎实验表明,重组蛋白能减少破骨细胞生成及减轻迟发型超敏反应小鼠模型炎症反应。
- 张月刘舒马静李慎涛王炜张权庚赵文明
- 关键词：骨保护素热休克蛋白65重组蛋白
- 全骨髓培养法扩增小鼠内皮祖细胞
- 2012年
- 背景:对于小型实验动物,通过分离骨髓单个核细胞进行内皮祖细胞培养、扩增的方法较为繁琐。目的:探讨采用全骨髓培养方式扩增小型动物内皮祖细胞的可行性。方法:采用全骨髓培养分离C57BL/6小鼠内皮祖细胞,培养第7天行DiL-acLDL和FITC-UEA-1双荧光染色检测,并利用流式细胞仪检测其CD34、FLK-1表达情况。同时检测其体外血管生成能力,黏附、增殖和迁移能力。设立骨髓单个核细胞培养法为对照。结果与结论:全骨髓培养至第2天便可见早期内皮祖细胞集落形成,第7天时可见大量短梭状内皮祖细胞,其具有吞噬DiL-acLDL及结合FITC-UEA-1的能力,内皮祖细胞在基质胶上同样能够形成血管样结构,培养至第2周晚期内皮祖细胞集落出现,迅速生长形成典型的铺路石样,并能够在体外传代培养,细胞数量、细胞表面CD34、FLK-1表达、体外黏附、增殖和迁移能力及晚期集落出现时间与对照组差异无显著性意义(P>0.05)。说明采用全骨髓培养的方式能够实现小型动物内皮祖细胞的筛选扩增,且操作简便。
- 刘俊峰杜忠东陈植关云谦李慎涛
- 关键词：骨髓内皮祖细胞小鼠扩增单个核细胞
- 猪肌生成抑制素基因的克隆和序列测定被引量：32
- 2001年
- 根据文献报道的猪肌生成抑制素基因 c DNA序列 ,分别从第 1、第 2和第 3外显子中设计引物 ,以大约克猪染色体 DNA为模板 ,分段扩增出含内含子和外显子的序列。将所得各序列回收、克隆到 p GEM-easy T载体中 ,然后进行序列测定。合并所有测得的猪肌生成抑制素基因序列 ,共获得 6 kb连续序列。分析结果表明 ,猪肌生成抑制素基因第 1内含子长 1 80 9bp,第 2外显子长 374 bp,第 2内含子长 1 978bp。所测得的外显子序列与已发表的 c DNA序列同源分析比较 ,没有出现引起氨基酸改变的突变。表明瘦肉型猪 (大约克猪 )肌生成抑制素基因仍很完整 。
- 欧阳红生孙燕张永亮李慎涛张锐廖晓萍张玉静赵建军赵凤云
- 关键词：肌生成抑制素基因克隆
- 人乳头瘤病毒16型(新疆株)E6基因的原核表达
- 2002年
- 根据人乳头瘤病毒 16 (新疆株 ) E6基因编码序列设计引物 ,从含有 HPV16 E6基因的质粒中扩增出含 HPV16 E6基因的 DNA片段 ,该片段全长 4 5 0 bp,将所得片段与 p MD18- T载体连接 ,转化到 JM10 9大肠杆菌中 ,筛选的阳性克隆扩增后 ,提取质粒 DNA,用 Bam H I和 Sal I酶切 ,回收 4 5 0 bp的目的片段 ,定向克隆到 p ET2 8a中 ,转化 JM10 9受体菌 ,从 JM10 9受体菌中提出质粒 ,再转化到 BL2 1(DE3)中 ,筛选出转化体 ,用 IPTG诱导表达 ,在 PAGE上见到所表达的18k D的特异性的 HPV16 (新疆株 ) E6蛋白条带。
- 李慎涛庞海张富春
- 关键词：人乳头瘤病毒16型E6基因原核表达SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳基因表达
