李磊
- 作品数：46 被引量：223H指数：7
- 供职机构：安徽省立医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- VPS4B显性负性突变体抑制乙型肝炎病毒复制
- 2011年
- 目的观察细胞液泡蛋白质分选因子4B(VPS4B)显性负性突变体VPS4B-K180Q在体外抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制的效应。方法用不同剂量野生型VPS4B真核表达质粒pXF3H-VPS4B和K180Q突变型真核表达质粒pXF3H-K180Q与pHBV1.3共转染Huh7细胞,时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)定量检测细胞培养上清中的HBsAg和HBeAg含量,Southernblot分析细胞内HBV核衣壳相关DNA水平,实时定量PCR检测HBV相关mRNA水平变化。结果野生型VPS4B可抑制HBsAg和HBeAg的分泌,对细胞内HBV核衣壳相关DNA和mRNA的抑制作用较弱;低剂量突变型VPS4可显著抑制HBsAg和HBeAg的分泌,对细胞内HBV核衣壳相关DNA和mRNA的抑制作用较强,且均呈剂量依赖的抑制效应。结论 VPS4B及其显性负性突变体可在体外表现出抗HBV的作用,突变型VPS4B抑制HBV能力高于野生型VPS4B。
- 王维鹏夏剑波李磊郝友华杨东亮
- 关键词：乙型肝炎病毒
- 亚太肝病研究学会丙型肝炎病毒感染的诊断与治疗共识被引量：14
- 2007年
- 李磊樊和斌杨东亮
- 关键词：丙型肝炎病毒感染肝病慢性丙型肝炎病毒性肝炎肝细胞癌
- MELD相关评分系统对肝衰竭患者生存情况的评估价值被引量：4
- 2012年
- 目的比较MELD、MELD-Na、I-MELD评分系统对肝衰竭患者短期(90 d)生存预后的判定价值。方法回顾分析33例肝衰竭患者的资料,计算确诊时MELD、MELD-Na、I-MELD评分,将患者分为生存组和死亡组,用受试者工作曲线(ROC)曲线下面积比较3种方法对结局的预测能力,获取MELD、MELD-Na、I-MELD判断预后的最佳界值点,根据最佳界值点分组,比较组间的病死率。结果生存组患者MELD、MELD-Na、I-MELD评分分别是(26.16±8.76)分、(27.26±8.81)分和(37.17±8.76)分;死亡组分别是(28.49±12.53)分、(30.67±13.00)分和(50.92±13.28)分。3种方法的曲线下面积分别是0.595<0.609<0.768;95%的可信区间分别是0.384～0.807、0.381～0.838和0.579～0.957。3种评分系统最好的界值点分别是21.41、21.74和42.56。同MELD和MELD-Na评分系统相比较,I-MELD评分同前者差异有统计学意义(P<0.05)。结论 I-MELD评分相对于MELD、MELD-Na评分系统,能更好地预测肝衰竭患者的短期生存情况。
- 金坤李磊李宜高人焘
- 关键词：肝衰竭MELDMELD-NA受试者工作曲线
- 土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒的构建、原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的构建土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒并进行原核表达、抗体制备。方法应用基因工程技术将编码截短型土拨鼠肝炎病毒核心蛋白(WHcAg1～149aa)的基因片段装入原核表达载体pQE60上,在JM109菌内进行诱导表达,使用切胶回收及Ni-NTA柱两种方法纯化目的蛋白。将纯化蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附实验、免疫组织化学及Western blot检测抗体的灵敏度和特异性。结果成功地构建了含截短型土拨鼠肝炎病毒核心区基因的质粒并获得表达,经纯化得到了分子量约为16.5kD的重组核心蛋白,免疫家兔获得了高效价的特异性多克隆抗体,而且与HBcAg有交叉反应。结论获得的重组截短型土拨鼠肝炎病毒核心抗原(1～149aa)纯度高,免疫原性强。获得的兔抗-WHc效价高,特异性好,与HBcAg有交叉反应。
- 张振华田拥军李磊王宝菊孟忠吉陆蒙吉杨东亮
- 关键词：土拨鼠肝炎病毒核心蛋白原核表达多克隆抗体
- 乙肝病毒核心区与“a”决定簇嵌合基因的体外表达及抗原性分析
- 目的评价乙肝病毒核心区与“a”决定簇嵌合基因表达产物的抗原性。方法应用基因工程技术将编码截短的乙型肝炎病毒核心抗原的主要免疫显性区替换为表面抗原“a”决定簇的基因片段,将嵌合基因装入原核表达载体pRESET-B内,在体外...
- 李磊田拥军张振华杨东亮
- 文献传递
- 血小板衍生生长因子在肝纤维化发生中的作用被引量：5
- 2007年
- 肝纤维化常常伴随于肝脏的各种慢性炎症病变过程中,是发生肝硬化的必经阶段。肝星状细胞(HSC)是细胞外基质的主要合成细胞,在肝纤维化的发生发展中起重要作用。多种细胞因子介质参与了肝星状细胞功能的活化和调节,其中血小板衍生生长因子是目前已知的多肽生长因子中对HSC作用最强的有丝分裂原,多种因素通过这一途径发挥作用。但其具体作用方式目前还不太清楚,本文就血小板衍生生长因子的作用机制、来源、结构、分类、在肝纤维化的临床诊断和治疗中的应用作一综述。
- 李磊杨东亮
- 关键词：肝纤维化肝星状细胞血小板衍生生长因子
- 重叠延伸PCR法构建VPS4B基因定点突变真核表达载体被引量：5
- 2011年
- 目的构建含液泡蛋白质分选因子4B(VPS4B)基因定点突变的真核表达载体。方法用RT-PCR法从HuH-7细胞中扩增VPS4B基因,并克隆到真核载体pXF3H上。采用重叠延伸PCR定点突变技术,构建K180Q和E235Q两种突变质粒,经DNA测序确证定点突变的结果,再将VPS4B及两种突变载体转染HepG2细胞,western blot检测融合蛋白表达。结果克隆了VPS4基因,构建了真核载体pXF3H-VPS4B,经重叠延伸PCR得到突变体。DNA测序结果显示,编码180位氨基酸的538～540位碱基由AAG突变为CAG;编码235位氨基酸的703～705位碱基由GAA突变为CAA,其他碱基均无突变。VPS4B及两种突变载体转染HepG2细胞可检出HA-VPS4B融合蛋白表达。结论成功构建了VPS4以及K180Q和E235Q两种突变的真核表达载体。
- 王维鹏夏剑波李磊郝友华杨东亮
- 关键词：重叠延伸PCR定点突变真核表达载体
- 四种基于MELD的评分系统对慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者短期生存的预测价值分析被引量：23
- 2018年
- 目的比较终末期肝病模型(MELD)及其衍生模型iMELD、MELD-Na和MESO对乙型肝炎相关性慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者12周生存预后的评估价值。方法按照现行中国肝衰竭诊治指南的诊断标准纳入67例HBV-ACLF患者,收集患者诊断成立时的相关实验室检测指标,分别计算MELD、iMELD、MELD-Na和MESO模型评分,应用Med Calc 15.8软件分析比较受试者工作特征曲线(ROC),确定MELD及其衍生评分系统对ACLF患者12周死亡风险预测的最佳截断点和约登指数,以评价不同评分预测ACLF患者短期生存的效能。结果在治疗12周内,在67例HBV-ACLF患者中,死亡45例(67.2%);入组时,生存组MELD、iMELD、MELD-Na和MESO评分分别为(22.12±3.24)、(41.59±5.30)、(22.55±4.07)和(1.64±0.24),显著低于死亡组【分别为(30.47±9.01)、(51.88±11.09)、(32.35±11.58)和(2.28±0.70),P<0.01】;MELD、i MELD、MELD-Na和MESO模型预测患者12周生存的ROC曲线下面积分别为0.814、0.802、0.806和0.817,其最佳截断点分别为22.70、47.76、22.16和1.69,约登指数分别为0.5040、0.5535、0.4808和0.4818,提示四种模型的预测效能比较,均无显著性差异(P>0.05)。结论MELD、i MELD、MELD-Na和MESO四种评分系统对于HBV-ACLF患者12周生存情况均具有良好的预测能力,可根据实际情况,选择应用。
- 李磊胡辉郑晓玮江守伟沈强
- 关键词：慢加急性肝衰竭乙型肝炎终末期肝病模型
- 14株抗乙型肝炎表面抗原单克隆抗体与变异表面抗原的反应模式及应用
- 2007年
- 目的 制备抗乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）的单克隆抗体，检测单克隆抗体与15种变异HBsAg的反应模式。用筛选出的单抗建立快速检测变异HBsAg的ELISA实验方法，并做初步评价。方法 用中国乙型肝炎病毒感染者血清中分离的HBsAg免疫BALB／c小鼠，通过杂交瘤细胞融合技术制备抗．HBs单克隆抗体。检测不同单克隆抗体与野生及变异HBsAg的反应性。筛选出两种可以较好识别变异HBsAg的单克隆抗体McAb2和McAb3，建立两种抗体ELISA检测HBsAg的方法。结果 制备了14株抗-HBs单抗。经过初筛，有4种可以较好识别包括G145R在内的大多数变异HBsAg。优化了McAb2和McAb3检测HBsAg的条件，检测HBsAg的灵敏度较好，检测变异HBs舷的能力优于2种现行国产HBsAg检测试剂盒。结论 用本实验制备的单抗可以很好地识别包括G145R在内的大多数变异HBsAg。
- 田拥军张振华张正茂李磊覃莉龚劲松杨东亮陆蒙吉
- 关键词：乙型肝炎病毒乙型肝炎表面抗原单克隆抗体
- HBV感染性克隆长度对其复制能力的影响被引量：1
- 2010年
- 目的比较不同长度HBV感染性克隆复制能力的差异,为HBV复制相关研究提供依据。方法采用分子克隆的方法体外分别扩增HBV基因组的相应片段,并进行连接,分别构建含1.1、1.2、1.3倍HBV基因组的可复制性克隆。体外转染Huh7细胞系评价抗原分泌和病毒复制情况,使用高压水注射建立急性感染小鼠模型评价病毒分泌情况以及抗原在小鼠肝脏内的表达情况。结果所构建的克隆体外转染Huh-7细胞后均可分泌高浓度的HBsAg,而1.3倍HBV基因组的可复制性克隆HBeAg的分泌能力明显强于其他克隆,转录水平也最高。高压尾静脉注射小鼠后肝组织内均可检测到HBcAg的分布,血清中可以检测到HBV DNA并随时间发生动态变化。其蛋白表达水平和病毒分泌能力均以1.3倍HBV基因组的可复制性克隆较高。结论所构建的克隆在体外及体内均可进行复制,其中含HBV全基因组1.3倍体的可复制性克隆的复制能力最强,可以较好反映来源病毒株的天然复制能力。
- 李磊嵇小琴李宜高人焘
- 关键词：乙型肝炎病毒感染性克隆动物模型
