- NK4基因重组慢病毒载体的构建及在肝癌细胞中的表达被引量：4
- 2011年
- 目的构建共表达人NK4基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组慢病毒载体,转染人高侵袭转移肝癌细胞LM3(HCCLM3),观察其转染效率及表达情况。方法采用DNA重组技术,将NK4基因克隆至带EGFP的慢病毒表达载体pLenti6.3-内部核糖体进入位点序列(IRES)-EGFP中,并用脂质体介导法将慢病毒包装系统和带NK4基因的质粒pLenti6.3-NK4-IRES-EGFP共转染293T细胞,包装慢病毒并测定滴度。以不同感染复数(MOI)的重组慢病毒感染293T细胞,筛选最适MOI,以最适MOI重组慢病毒感染HCCLM3细胞,观察转染效率。Western blot法测定细胞中NK4蛋白表达水平。结果成功构建共表达NK4基因和EGFP基因的慢病毒载体pLenti6.3-NK4-IRES-EGFP,并对其包装、纯化及浓缩后测定病毒滴度为1.08×108 TU/mL。重组慢病毒感染HCCLM3细胞筛选其最适MOI为7。转染后HCCLM3细胞中可见明显的NK4蛋白表达,而未转染细胞中无NK4蛋白的表达。结论成功构建了NK4基因的重组慢病毒载体,有效地转染HCCLM3细胞后可高表达NK4蛋白。
- 李霏李松林尹元琴
- 关键词：NK4慢病毒载体基因转染
- 一种新型组合式骨髓涂片器
- 本实用新型属于医疗器械领域，尤其为一种新型组合式骨髓涂片器，包括涂片器以及滑动安装在所述涂片器内部的若干个涂片头，所述涂片头的两侧壁上固定安装有卡轨，且所述涂片头的后端开设有涂片头容腔，任意两个所述涂片头相互卡合至所述涂...
- 李霏
- 文献传递
- PD-1/PD-L1抑制剂治疗非小细胞肺癌的研究进展
- 目的 因为是综述，无目的、方法、结果、结论。具体详见全文--肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一，病死率居于所有恶性肿瘤的首位，其中非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌中80％-85％。
- 李霏高红李晓玲
- 关键词：非小细胞肺癌PD-1PD-L1免疫治疗
- 人白细胞介素32γ基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的构建人白细胞介素32γ(IL-32γ)基因重组腺病毒载体,并检测其在HEK293细胞中的表达。方法从表达质粒pDONR223中扩增目的片段IL-32γ,定向克隆至穿梭载体pShuttle-GFP-CMV获得pShuttle-(ΔGFP)-IL-32γ,经I-CeuI+I-SceI双酶切处理后转移至腺病毒载体pAdxsi,得到Ad-IL-32γ进行PCR鉴定及滴度测定。将Ad-IL-32γ转染至人胚肾细胞HEK293中,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)确定Ad-IL-32γ的转染效率,并通过Western印迹检测目的基因IL-32γ的表达。结果目的片段IL-32γ转入穿梭载体后,酶切鉴定pShuttle-(ΔGFP)-IL-32γ正确。酶切穿梭载体将目的基因片段克隆至腺病毒载体pAdxsi得到Ad-IL-32γ病毒载体,酶切鉴定证实构建成功。Ad-IL-32γ病毒滴度为2×1010pfu/ml。转染HEK293细胞通过观察GFP判断转染效率,并通过Western印迹证实其在HEK293中的表达。结论成功构建IL-32γ重组腺病毒载体并证实其能在体外有效表达IL-32γ蛋白,为进一步基于Ad-IL-32γ的基因治疗研究奠定基础。
- 李松林朱妍妍李霏尹元琴
- 关键词：腺病毒基因治疗
- 一种可控引流速度的引流袋装置
- 本实用新型属于引流装置领域，尤其为一种可控引流速度的引流袋装置，包括袋体和固定安装在所述袋体顶部的引流管，所述引流管外侧固定连接有第一螺旋夹，所述引流管外侧具有分流袋，所述分流袋顶端固定连接有出液管，所述出液管另一端与所...
- 李霏
- 文献传递
- 一种用于胸穿刺的积液引流装置
- 本实用新型属于医疗器械领域，尤其为一种用于胸穿刺的积液引流装置，包括引流针、负压引流袋、引流导管、操作固定块、充气块和气垫，所述引流针与所述负压引流袋通过所述引流导管密封连接，所述引流针靠近所述负压引流袋一端外壁滑动连接...
- 李霏
- 文献传递
- 一种腹腔穿刺引液用的恒压排液管
- 本实用新型涉及内科医疗器械领域，具体是一种腹腔穿刺引液用的恒压排液管，包括导液管、排液管和恒压球，所述恒压球的底部具有两个连接管，其中一个所述连接管与所述导液管连接，另一个所述连接管与所述排液管连接，所述恒压球的顶部固定...
- 李霏
- 文献传递
- 119例EGFR基因状态已知的晚期肺腺癌临床疗效及预后分析
- 目的分析EGFR 基因状态已知的晚期肺腺癌患者临床特点、治疗措施及影响预后的因素方法回顾EGFR 基因状态已知的119 例晚期肺腺癌患者临床特点、治疗措施。
- 郑建李晓玲高红洪成雨李霏
- 关键词：EGFR基因EGFR-TKIS化疗晚期肺腺癌
- NK4基因转染对裸鼠肝癌移植瘤生长的影响
- 2012年
- 目的:构建稳定表达NK4的LM3肝癌细胞系,建立裸鼠肝癌模型,观察肿瘤生长情况,并探讨NK4抑制肿瘤可能的机制。方法:构建携带NK4基因的慢病毒载体pLenti6.3-NK4-IRES-EGFP,转染LM3细胞构建稳定表达NK4的细胞系,分组建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型。测量肿瘤瘤体的体积,重量,采用免疫组化等方法观察肿瘤微血管密度,瘤体中MMP-9的表达。结果:接种肝癌细胞28天后,NK4组裸鼠移植瘤体积为(1.28±0.25)cm3,明显小于对照组与空载体组(2.15±0.58)cm3和(2.06±0.51)cm3(P<0.01)。NK4组瘤重为(1.17±0.78)g,显著低于对照组和空载体组(3.69±1.92)g和(3.52±1.68)g(P<0.01)。NK4转染组的肿瘤血管密度为(10.25±3.85),显著低于对照组和空载体组(2 6.5 6±7.6 2)和(24.37±8.34)。NK4组瘤体中MMP-9表达明显减少。结论:转染NK4基因可以显著抑制裸鼠肝癌移植瘤的生长,其作用机制可能是通过抑制肿瘤内新生血管的形成和肿瘤细胞的侵袭。
- 李松林刘新莉李霏尹元琴
- 关键词：肝癌移植瘤NK4裸鼠基因转染
- NK4基因转染对人乳腺癌细胞MDA-MB-231生物学特性的影响被引量：1
- 2013年
- 目的通过在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中转染携带有NK4基因的慢病毒载体,研究NK4对乳腺癌细胞的生物学特性影响及其作用机制。方法将NK4重组慢病毒载体pLenti6.3-NK4-IRES-EGFP转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹法(Western blot)检测转染细胞中NK4的基因和蛋白表达,检测在肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)存在的条件下磷酸化c-met受体(p-met)的表达。采用MTT、Transwell小室检测转染NK4基因对乳腺癌细胞的生长、侵袭的影响。结果转染NK4基因的乳腺癌细胞MDA-MB-231能够表达并分泌NK4,RT-PCR扩增出预期的453 bp片段,Western blot显示有50 kD的蛋白并且转染组与空载体组和对照组相比p-met的表达明显减弱。MTT结果显示转染NK4组细胞生长抑制率达(67±2.04)%,较其他两组抑制率高(P<0.01),Transwell结果显示转染NK4基因能够显著抑制由HGF诱导的乳腺癌细胞的侵袭(P<0.01)。结论 NK4通过竞争性抑制HGF诱导的乳腺癌细胞中c-met受体的磷酸化从而抑制了乳腺癌的生长、侵袭。
- 李松林李霏刘新莉尹元琴
- 关键词：NK4乳腺癌慢病毒载体
