杨敬
- 作品数：50 被引量：160H指数：7
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- 表达禽流感HA基因的重组马立克氏病病毒的构建
- 通过ApaⅠ和NotⅠ位点将HA基因亚克隆到表达LacZ基因的重组马立克氏病病毒的转移载体中,该转移载体的US片段内含有hCMV启动子和增强子控制的含LacZ和HA基因表达盒克隆,从而成功地构建了表达HA基因的马立克氏病...
- 李永清杨敬冯国民周雪媚陈小玲
- 关键词：禽流感病毒HA基因
- 钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL32基因的克隆和表达及其在ELISA检测中的应用
- 钩端螺旋体（钩体）病是一种全球性的人兽共患病,人类感染钩端螺旋体后表现出多种器官和系统病变,愈后不良;也可垂直传播感染胎儿,引起流产。动物中,犬钩端螺旋体的感染率较高,感染后,临床表现多样,大多呈隐性感染,不发病,但钩体...
- 范薇于长明杨敬隋丽华战大伟贺争鸣孙岩松
- 关键词：钩端螺旋体外膜蛋白克隆
- 文献传递
- 登革2型病毒04株5′和3′末端的序列分析被引量：1
- 2000年
- 目的 测定登革 2型病毒 0 4株 (D2 0 4)基因组 5′和 3′末端序列。方法 从D2 0 4感染的C6 / 36细胞中提取总RNA ,以该RNA为模板 ,利用RACE法 ,分别扩增D2 0 4株的 5′和 3′末端cDNA片段。将其分别与 pGEM T载体连接得到含有 5′端 5 35bp和 3′端 5 0 3bpcDNA的重组质粒 ,并测定上述cDNA插入片段的序列。将D2 0 4的 5′和 3′端非编码区的核苷酸序列与其它登革 2型毒株进行同源性比较。结果 D2 0 4株与JAM、NGC、S1、16 6 81和PDK 5 3株的同源性分别为98 96 % ,98 96 % ,93 75 % ,98 95 % ,97 92 %和 97 72 % ,97 80 % ,90 6 5 % ,94 2 6 % ,94 2 2 %。结论 D2 0 4株除与S1株的同源性略低外 ,其余株的同源性均在 94%以上。
- 杨敬杨佩英秦鄂德胡志君于曼欧武仝莉莉赵卫
- 关键词：登革热病毒基因
- 登革2型病毒04株基因组全序列的测定被引量：6
- 2000年
- 目的 对我国登革 2型病毒 0 4株 (D2 0 4)基因组进行全序测定及分析 ,为了解其基因组结构与生物功能的关系及研究开发登革病毒新型疫苗奠定基础。方法 根据登革 2型国际标准株NGC的序列 ,设计 13对重叠引物 ,通过RT PCR扩增出D2 0 4株不同的cDNA片段 ,分别克隆到pGEM T载体 ,转化受体菌DH5α ,挑取阳性克隆进行PCR、酶切鉴定及序列测定。结果 D2 0 4株的基因组全长 10 72 3个碱基 ,从 97到 10 2 6 9位为一个长的开放读码框 ,编码 3391个氨基酸。将它与其它登革 2型病毒株NGC、JAM、PR15 9(S1)、16 6 81及它的候选疫苗株PDK 5 3进行比较 ,其核酸序列同源性分别为 95 .0 %、97.6 %、89.8%、93.8%和 93.7% ,氨基酸序列的类似性分别为 97.8%、98.6 %、96 .7%、97.6 %和 97.5 %。结论 我国D2 0 4株的基因组全序列基本类似于已发表的其它登革 2型病毒株。在比较的 5株登革 2型病毒株中 ,D2 0 4株更类似于JAM株 ,其次是NGC株 ,与S1株的类似性略低。比较的结果表明 ,D2 0 4株与JAM株紧密相关 ,它们可能属于同一拓扑型。D2 0 4株全序的测定 ,对分析我国毒株来源及研制适于我国人群的登革疫苗具有一定意义。
- 杨敬杨佩英秦鄂德胡志君于曼欧武
- 关键词：登革2型病毒基因组CDNA
- 实验动物微生物、寄生虫抽样调查及分析被引量：19
- 2008年
- 目的监控实验动物微生物、寄生虫质量。方法细菌检测:常规培养、生化鉴定,免疫荧光试验(IFA)查抗体。病毒检测:酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫酶试验(IEA)、免疫荧光试验(IFA)、血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HAI)方法检测抗体。真菌检测:常规培养、镜检。寄生虫检测:涂片镜检、间接血凝试验(IHA)方法查抗体。结果五年来,SPF级动物检出了绿脓杆菌、嗜肺巴斯德菌、金黄色葡萄球菌、鞭毛虫,另外,泰泽病原体、小鼠细小病毒(MVM)、小鼠仙台病毒(M-SV)抗体阳性。清洁级动物检出了蠕虫,且泰泽病原体、大鼠仙台病毒(R-SV)、小鼠仙台病毒(M-SV)、小鼠肝炎病毒(MHV)抗体阳性。普通级动物检出了志贺菌、皮肤病原真菌、体外寄生虫、弓形虫,同时检出兔出血症病毒(RHDV)、犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、犬肝炎病毒(ICHV)未达抗体保护效价,犬布鲁杆菌、猕猴疱疹病毒Ⅰ型(BV)抗体阳性。不同生产企业动物质量差异很大,有的动物合格率达100%,有的则同一动物有多种病原感染。结论实验动物微生物、寄生虫质量控制有待加强。
- 隋丽华范薇杨敬耿志贤时彦胜邱业峰吴娜刘永梅李俊梅王冬平叶华虎张小飞曾林
- 关键词：实验动物微生物寄生虫
- 表达禽流感病毒M2基因的重组马立克氏病病毒的构建被引量：5
- 2007年
- 将禽流感病毒M2基因克隆于真核表达质粒pIRES-EGFP中,使其位于pCMV启动子的调控下,并与绿色荧光蛋白基因(EGFP)串联后,将上述串联基因插入到含MDV CVI988的非必需区US基因的重组质粒pUS2中,构建带标记的重组质粒,然后将此重组质粒转染感染了MDVCVI988的鸡胚成纤维细胞,利用同源重组的方法,筛选了表达禽流感病毒M2基因的重组病毒MDV1。经PCR、dot blotting,Western blotting等实验的结果表明,禽流感病毒M2基因的确插入到MDV1(CVI988)基因组中并获得表达。重组MDV1免疫1日龄SPF鸡21天后,用ELISA可检测到M2蛋白的特异性抗体。接种了重组病毒rMDV的鸡体内针对H9N2疫苗血凝素的抗体滴度(p<0.05)明显提高,以禽流感病毒AIVA/Chicken/Guangdong/00(H9N2)攻毒后进行病毒重分离试验的结果发现,重组病毒能有效地降低病毒的排出量(p<0.01),说明该重组病毒可以用于防制禽流感的免疫。
- 李永清杨敬罗长保周雪媚张莉章振华
- 关键词：禽流感病毒马立克氏病病毒
- 应用OE-PCR扩增犬瘟热病毒F蛋白缺失疏水区编码序列
- 根据犬瘟热病毒(CDV)Onderstepoort株的核苷酸序列,设计合成引物,通过RT-PCR,从CDVOnderstepoort株RNA中扩增出2197bp的CDV全长的F基因。将其与pGEM-T easy载体连接,...
- 高娃杨敬陈振文
- 关键词：F基因
- 文献传递
- 鸡补体因子C3d增强禽流感病毒M2的抗原性研究
- 为验证获得的鸡补体因子C3d生物学功能,分别将一个C3d基因、2个C3d基因同禽流感sM2基因(缺失跨膜区的M2基因)串联在一起,中间用柔性肽链Linker1(L1)、Linker2(L2)连接,构建表达了4个融合蛋白,...
- 章振华李永清杨敬谌南辉姜北宇陈小玲
- 关键词：抗原性
- 抗禽流感病毒M2蛋白单克隆抗体的研制
- 利用纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,以M2融合蛋白和GST分别作为ELISA抗原,对M2融合蛋白抗原检测强阳性、GST抗原检测阴性的杂交瘤细胞进行克隆筛选,制备出4株分泌抗禽流感病毒M2蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株...
- 李永清杨敬
- 关键词：禽流感病毒单克隆抗体
- 文献传递
- OE-PCR法扩增获得犬瘟热病毒缺失疏水区的融合蛋白基因片段被引量：1
- 2005年
- 根据犬瘟热病毒(CDV)O nderstepoort株的核苷酸序列,设计合成引物,通过RT-PCR,从CDV O nderstepoort株RNA中扩增出2 197 bp的CDV全长融合蛋白(F)基因。将其与pGEM-T easy载体连接,通过软件分析其序列中的疏水区后,以pGEM-T/F为模板,PCR扩增出约254 bp和1 017 bp的F蛋白疏水区外编码序列。以2个扩增产物为模板,以OE-PCR(overlap ex tens ion-PCR)扩增出约1 271 bp的缺失疏水区的F基因(dF),测序结果表明,dF的序列除在疏水区以4个甘氨酸序列替代外,其余部分与F基因的同源性为99.2%。这表明,OE-PCR扩增法已成功地使CDV F基因疏水区缺失。
- 乌仁高娃杨敬陈振文
- 关键词：F基因
