杨晶焰
- 作品数：19 被引量：103H指数：5
- 供职机构：云南出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：昆明市科技计划项目云南省自然科学基金国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- pBAD原核高效表达VSV N蛋白群特异性抗原的研究
- 花群义徐自忠徐维加董俊杨晶焰杨云庆贾建军
- 1、该项目进行了VSV蛋白基因的克隆、序列分析、表达及在ELISA中的应用。成功构建了水泡性口炎病毒编码群特异性抗原N基因重组表达载体。经L-Arabinose诱导表达，可稳定、高效地表达N蛋白抗原。其表达产量约占菌体总...
- 关键词：
- 关键词：特异抗原水泡性口炎病毒动物病毒
- BTVVP7抗原基因的表达及抗原性研究
- 花群义徐自忠徐维加董俊杨晶焰杨云庆贾建军
- 该项目研究应用基因工程技术，将BTVVP7蛋白基因克隆到pBAD/Thio-TOPO表达载体中，构建的BTVVP7蛋白基因表达重组质粒，获得了BTVVP7蛋白稳定、高效表达的工程菌株，建立起基因工程生产BTVVP7蛋白抗...
- 关键词：
- 关键词：抗原基因淋巴细胞杂交瘤蓝舌病病毒动物检疫
- 猪传染性胃肠炎病毒分子生物学研究进展被引量：8
- 2000年
- 阐述了猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)的基因结构、基因表达方式、结构蛋白及其功能、非结构蛋白、病毒的抗原性及免疫、分子生物学诊断技术和基因工程疫苗研究现状及有待深入研究解决的问题。
- 花群义周晓黎杨晶焰
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒分子生物学免疫学
- 蓝舌病病毒vp7基因的表达及其产物在c-ELISA中的应用被引量：3
- 2004年
- 获得稳定、高效的具有良好抗原性的蓝舌病毒(Bluetonguevirus,BTV)vp7基因重组抗原。将BTV编码群特异性抗原VP7的S7基因片段克隆至pMD18-T质粒载体中,构建S7克隆重组质粒,进行核苷酸序列分析。与已报道的多株BTV编码VP7的基因比较后发现,所测定毒株的核苷酸序列与BTV10型的S7基因同源性高达98.7%,推测的氨基酸同源性为99.3%,证实为BTV的S7基因。然后亚克隆插入pBAD/ThioTOPO表达载体,转化LGM194细胞,经抗性培养、PCR、限制性内切酶分析、测序鉴定,筛选获得BTVS7基因片段正向插入、有正确读码框的阳性克隆,成功构建了BTV群特异性抗原VP7的重组表达载体。经L-araboinose诱导表达,可稳定、高效地表达VP7蛋白抗原。SDS-PAGE、ELISA试验表明,表达蛋白为融合蛋白,具有反应原性,分子量约54.5kD,重组蛋白的获得率为1.52mg/g湿菌,其表达产量约占菌体总蛋白的12%左右,相当于93.5mg/L菌液。融合蛋白中含有BTVVP7特异性蛋白抗原,可作为c-ELISA包被抗原,为蓝舌病的免疫血清学诊断试剂的制备和分子生物学研究打下了坚实基础。
- 花群义肖荣海徐自忠杨云庆董俊杨晶焰贾建军
- 关键词：蓝舌病病毒VP7C-ELISA
- 水泡性口炎病毒核蛋白基因的表达及初步应用被引量：10
- 2004年
- 将水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因片段克隆至pMD18 T克隆载体质粒中 ,构建N基因克隆重组质粒 ,进行核苷酸序列分析。然后亚克隆插入pBAD ThioTOPO表达载体 ,经PCR限制性内切酶分析、测序鉴定 ,筛选获得N基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆 ,成功构建了水泡性口炎病毒N基因重组表达载体。经L Arabinose诱导表达 ,可稳定、高效地表达N蛋白抗原。SDS PAGE、Westernblotting及间接ELISA试验结果表明 ,表达蛋白为融合蛋白 ,质量约 6 3 5kD ,其表达产量约占菌体总蛋白的 16 % ,相当于 92mg L。融合蛋白中含有水泡性口炎病毒群特异性的核蛋白抗原 ,应用表达的VSV核蛋白抗原建立了酶联免疫吸附试验 ,通过对 186份山羊、豚鼠实验动物人工感染VSV的血清样品和参考血清样品的检测 ,并与微量血清中和试验进行了比较 ,结果表明 :以表达的VSV核蛋白为包被抗原的酶联免疫吸附试验是一种特异性强、敏感性高、快速、简单、安全的检测方法 ,抗原制备成本低。
- 花群义金宁一徐自忠杨云庆董俊杨晶焰周晓黎
- 关键词：水泡性口炎病毒核蛋白基因克隆
- 赤羽病病毒N基因硫氧还蛋白融合表达载体的构建与表达被引量：19
- 2003年
- 为获得赤羽病病毒 (Akabanevirus ,AKAV )的核蛋白重组抗原 ,根据其基因序列(SmRNA)设计合成了 1对特异性引物 ,对AKAVN基因进行RT PCR扩增 ,产物大小约为 6 96bp ,回收纯化后 ,将其克隆至 pMD18 T质粒载体中 ,经核苷酸序列分析 ,与已报道的多株AKAV编码核衣壳蛋白N的SmRNA基因比较后发现 ,所测定毒株的核苷酸序列与TIN毒株的同源性高达 98.3% ,推测的氨基酸同源性为 97.6 % ,证实为AKAV的N基因。将该基因片段亚克隆插入pBAD/ThioTOPO表达载体 ,转化TOP10细胞 ,成功地构建了AKAVN基因重组表达载体。经L araboinose诱导表达 ,可稳定、高效地表达AKAV核蛋白抗原。表达蛋白为融合蛋白 ,分子质量约 4 2 .5ku ,其表达产量约占菌体总蛋白的 2 8% ,融合蛋白中含有AKAV特异性核蛋白抗原 。
- 花群义杨云庆董俊杨晶焰贾建军周晓黎徐自忠
- 关键词：赤羽病病毒N基因核蛋白基因基因序列
- 水泡性口炎病毒核蛋白基因的克隆和序列分析
- 本文克隆了编码群特异性抗原的N基因,并进行核苷酸序列测定.为VS的血清学、分子流行病学调查和新型疫苗构建奠定基础.
- 花群义杨云庆董俊杨晶焰周晓黎徐自忠
- 关键词：水泡性口炎病毒核蛋白基因克隆
- 文献传递
- 水泡性口炎病毒核蛋白基因的克隆和序列分析被引量：5
- 2004年
- 目的 对水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因进行PCR扩增、克隆和序列分析。方法 将水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因片段克隆至pMD18 T载体中 ,构建N基因重组质粒载体。进行PCR及限制性内切酶分析 ,筛选获得N基因插入的阳性克隆。经核苷酸序列分析 ,并与Genbank中的VSV编码核衣壳蛋白N基因序列进行比较。结果 该序列与VSVNewJersey型的 0 9/ 82 HD B株同源性最高 ,核苷酸和推测氨基酸的同源性分别为 98.9%和 98.8% ,有 13个核苷酸差异 ,伴有 5个氨基酸改变 ,第 72位的酪氨酸变为组氨酸 ,第 89位的缬氨酸变为异亮氨酸 ,第 183位的天冬氨酸变为天冬酰胺 ,第 2 0 5位的苯丙氨酸变为亮氨酸 ,第 4 18位的丙氨酸变为缬氨酸 ;与In diana型各株的同源性较低 ,与Glasgow株相比 ,核苷酸和氨基酸的同源性分别为 6 7.9%和 71.6 %。结论 已成功地克隆了水泡性口炎病毒N基因 。
- 花群义徐自忠金宁一杨云庆董俊杨晶焰周晓黎
- 关键词：水泡性口炎病毒核蛋白基因克隆免疫血清学分子生物学
- BTV VP7抗原基因的表达及抗原性研究
- 花群义徐自忠徐维加董俊杨晶焰杨云庆贾建军周晓黎肖荣海
- 该项目研究成果是应用基因工程技术，将BTV VP7蛋白基因克隆到pBAD/Thio-TOPO表达载体中，构建的BTV VP7蛋白基因表达重组质粒，获得了BTV VP7蛋白稳定、高效表达的工程菌株，建立起基因工程生产BTV...
- 关键词：
- 关键词：抗原基因蓝舌病毒
- 赤羽病病毒N基因硫氧还蛋白融合表达载体的构建与表达
- 为了探讨AKAV N基因结构及其与功能的关系,本文采用pBAD/TOPO原核表达系统首次对AKAV病毒核蛋白进行了表达,核蛋白以硫氧还蛋白融合蛋白的形式在大肠杆菌细胞周质空间中,以可溶性形式高效表达,融合蛋白有完全生物学...
- 花群义杨云庆董俊杨晶焰贾建军周晓黎徐自忠
- 关键词：赤羽病病毒融合蛋白基因克隆
- 文献传递
