林敏
- 作品数：54 被引量：220H指数：10
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：重庆市教育委员会人文社会科学研究项目教育部留学回国人员科研启动基金广东省卫生厅资助课题更多>>
- 相关领域：医药卫生哲学宗教文化科学生物学更多>>
- 弓形虫DNA疫苗免疫鼠体内重组质粒分布的探讨被引量：6
- 2000年
- 目的 通过肌注弓形虫 DNA疫苗质粒 p BK- P30、p BK- P2 2直接免疫小鼠 ,观察重组质粒在鼠体内不同器官组织的分布。方法 疫苗 p BK- P30、p BK- P2 2经肌注免疫 BAL B/ c鼠 ,5周和 10周后 ,分别取免疫鼠的肺、心脏、肝脏、脾、肌肉、肾脏及血液 ,抽提组织 DNA,并以此为模板进行 PCR扩增 ,扩增的产物经琼脂糖凝胶电泳分析。结果 免疫后 5周 ,p BK- P30免疫组的上述各器官组织 DNA中均扩增出 P30基因片段 ,其大小 10 2 7bp,p BK- p30 & p BK- P2 2免疫组分别扩增出 P30和 P2 2基因片段 ,P2 2基因片段为 5 93bp,均与预期结果相符合。NS对照组和 p BK- CMV空质粒对照组未扩增出片段。免疫后 10周 ,仅免疫鼠血液扩增出上述特异性基因片段。结论 弓形虫 DNA疫苗免疫 BAL B/ c鼠 5周后 ,多个不同器官组织均可检测出重组质粒 ,免疫后 10周血液检测出重组质粒。
- 占国清吴少庭李国光高世同林敏郑春福
- 关键词：弓形虫DNA疫苗重组质粒小鼠
- 弓形虫p35蛋白的基因克隆及其分子特征被引量：5
- 2001年
- 目的 探讨 p35蛋白作为一个鉴别急性感染的诊断抗原和疫苗候选的应用价值。 方法 从弓形虫RH株分离总的RNA ,应用弓形虫EST基因库合成扩增p35基因片段引物 ,结合 5‘和 3‘末端cDNA快速扩增法进行 p35基因 5‘和 3‘末端cDNA的扩增 ,TA克隆RT -PCR产物及DNA顺序分析 ;用蛋白质分析软件解析 p35基因编码的氨基酸的亲水性和可能存在的T、B细胞的表位。结果 p35基因含有 15 37个碱基 ,编码 378个氨基酸 ,其氨基酸的亲水性区域分布在氨基酸的 2 0 1到2 2 5和 30 1到 340号 ,且含有多个T、B细胞的表位。结论 p35蛋白的C端区有高的亲水性 ,并含有T、B细胞的表位 ,显示了p35蛋白应用于诊断和疫苗开发的可行性。
- 张仁利吴少庭高世同林敏吕斌
- 关键词：弓形虫疫苗弓形体病
- 弓形虫表面抗原P30基因分枝杆菌-大肠杆菌穿梭表达重组质粒的构建及序列测定被引量：5
- 2000年
- 目的 构建编码弓形虫RH株表面抗原P30基因的分枝杆菌 -大肠杆菌穿梭表达重组质粒并进行其序列测定。方法 弓形虫RH株腹腔接种小鼠 ,收集腹水 ,酚 /氯仿法抽提基因组DNA ;根据基因库P30基因序列设计合成一对引物 ,采用PCR法扩增编码P30的基因片段 ,经低熔点琼脂糖法回收并纯化 ;将P30基因定向克隆到分枝杆菌 -大肠杆菌穿梭表达质粒 ,转化大肠杆菌DH5dα,在卡那霉素阳性LB培养基平板筛选阳性重组子 ,并经双酶切及PCR鉴定 ;最后对重组子进行序列测定。结果 PCR所扩增的P30基因片段为 10 37bp ,阳性重组质粒pBCG -P30经XbaI+KpnI双酶切 ,获得包含P30和热休克蛋白 (hsp70 )启动子的复合基因片段 ,此片段的大小为 1170bp ,与预期的理论值相符合。序列测定分析进一步表明所克隆的基因为编码P30抗原的基因片段。结论 成功构建编码弓形虫表面抗原P30基因大肠杆菌 -分枝杆菌穿梭质粒pBCG -P30。
- 占国清吴少庭李国光高世同林敏梁驹卿郑春福
- 关键词：弓形虫表面抗原P30基因重组
- 恶性疟原虫DNA疫苗在小鼠组织中的表达
- 2002年
- 目的 探讨恶性疟原虫 FCC- 1/ HN株环子孢子蛋白 (CSP) DNA疫苗在小鼠组织中的表达。 方法 用盐酸布比卡因对 BAL B/ c小鼠的骨骼肌进行了预处理 ,然后在同一部位注射重组真核表达质粒 p BK/ CSP。分别在免疫后 4周和 8周应用间接免疫酶法检测免疫小鼠注射部位肌肉组织中重组蛋白 CSP的表达。 结果 小鼠经 DNA疫苗免疫 4周和 8周后肌肉组织及其周围结缔组织均呈现特异性阳性反应。 结论 疟疾 DNA疫苗免疫小鼠后 ,肌肉组织及其周围结缔组织有重组 CSP蛋白的表达。
- 郑春福吴少庭陈雅棠高世同林敏
- 关键词：DNA疫苗恶性疟原虫环子孢子蛋白免疫组织化学基因表达
- 恶性疟原虫FCC1/HN株环子孢子蛋白基因在BCG中的表达被引量：3
- 2001年
- 郑春福吴少庭陈雅棠高世同林敏梁驹卿
- 关键词：疟原虫环子孢子蛋白疟疾疫苗重组疫苗
- 弓形虫表面抗原P30 DNA疫苗免疫小鼠诱导体液免疫应答及保护性的初步观察被引量：15
- 2001年
- 目的 观察弓形虫表面抗原 P30 DNA疫苗免疫 BAL B/ c小鼠诱导其体内产生的体液免疫应答及抗虫感染的免疫保护作用。 方法 重组质粒 p BK- P30用生理盐水稀释后 ,肌注免疫 BAL B/ c小鼠。分别于免疫后 5周和 10周 ,EL ISA测定 Ig G抗体滴度 ;取免疫鼠的血液、肺、心脏、肝脏、脾、肾脏及肌肉 PCR扩增 P30基因 ;免疫鼠腹腔注射弓形虫速殖子攻击感染。 结果 两次检测 ,均可测到特异性 Ig G抗体 ,且抗体的滴度随免疫时间的延长而增高 ;免疫后 5周 ,免疫鼠的上述组织均可扩增出 P30基因条带 ,但免疫后 10周仅血液扩增出特异 P30基因条带 ;弓形虫速殖子腹腔攻击感染 ,免疫组鼠的平均存活时间较对照组鼠延长 ,但统计学差异不显著 (P>0 .0 5 )。 结论 弓形虫表面抗原 P30DNA疫苗能诱导 BAL B/ c小鼠产生特异性体液免疫应答及部分抗虫免疫保护作用。
- 占国清吴少庭李国光高世同林敏郑春福
- 关键词：弓形虫体液免疫
- 聚合酶链反应掺入法制备标记地高辛探针检测间日疟原虫感染的初步研究被引量：1
- 1997年
- 根据间日疟原虫环子孢子蛋白基因设计合成特异性引物一对，采用ＰＣＲ技术，以Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ代替部分ｄＴＩＰ直接扩增并标记含间日疟原虫环子孢子蛋白基因中央重复序列的基因片段作为ＤＮＡ探针并用于检测间日疟原虫感染，结果表明：（１）采用ＰＣＲ法直接制备并标记地高辛探针的方法较ＰＣＲ扩增后再标记的方法更为快速、简便和经济；（２）探针只与间日疟患者血样核酸抽提物杂交阳性，而与其亲缘关系相近的三株恶性疟原虫、利什曼原虫、弓形虫及正常人血核酸抽提物杂交阴性，该探针可以检测出相当于１００μｌ感染血样中４４虫／μｌ的水平；（３）将该探针用于深圳地区及湖北随州地区收集的间日疟患者血样的检测，１４７份镜检阳性的血样中，１１３份杂交阳性，与镜检的符合率为７６．８７％，２０份正常人血杂交阴性。
- 高世同吴少廷陈观今陈观今林敏
- 关键词：DNA探针间日疟原虫疟疾
- 日本血吸虫疫苗候选分子Calpain的原位表达被引量：2
- 2002年
- 目的 探讨日本血吸虫疫苗候选分子———钙离子激活的中性蛋白激酶 (Calpain)在日本血吸虫体内的表达部位及其特征。方法 用重组纯化的Calpain抗原免疫大鼠 ,制备抗Calpain血清 ,从感染鼠灌流分离的日本血吸虫成虫被切片 ,用羊抗大鼠IgG抗体作为二抗进行免疫组织化学分析 ,观察Calpain蛋白在日本血吸虫成虫体内的表达部位。 结果 重组Calpain抗原免疫大鼠后 ,产生了一个极高的抗Calpain特异性抗体 ,并在日本血吸虫成虫切片上识别自然的日本血吸虫Calpain ,且大多数表达在成虫真皮层。结论 日本血吸虫钙离子激活的中性蛋白激酶 (Calpain)主要分布在成虫肌肉和真皮层 ,提示Cal pain可能是日本血吸虫的一个疫苗候选分子 ,并提示这个分子的重组抗原有可能应用于血吸虫病诊断。
- 段立华张仁利吴少庭高世同林敏
- 关键词：CALPAIN原位表达日本血吸虫免疫组织化学钙蛋白动物实验
- 恶性疟原虫DNA疫苗在小鼠体内组织分布和安全性的初步研究被引量：3
- 2002年
- 目的 探讨疟疾DNA疫苗在小鼠体内的组织分布 ,并对其安全性进行观察。方法 将重组质粒pBK -CSP经肌肉途径免疫BALB/c小鼠 ,分别在 4周和 8周后剖杀动物并摘取各种组织 ,抽提全组织DNA进行PCR扩增后经琼脂糖凝胶电泳分析 ,并对DNA疫苗的安全性进行观察。结果 免疫 4周和 8周后 ,仅有DNA疫苗接种位点的肌肉组织检测到CSP基因 ,而 10 0 μg的质粒DNA并未产生明显的毒副作用。 结论 疟疾DNA疫苗接种 4周后 ,质粒DNA仅分布于接种部位 ,并可持续至 8周以上 ,而未发现毒副作用。
- 郑春福吴少庭陈雅棠高世同林敏
- 关键词：恶性疟原虫DNA疫苗安全性疟疾
- 日本血吸虫Calpain的DNA疫苗诱导小鼠免疫保护性研究被引量：11
- 2003年
- 目的 研究日本血吸虫中国大陆株Calpain的DNA疫苗对Balb/c小鼠的免疫保护性作用。方法 大量制备pVAC质粒DNA和pVAC -CalpainDNA疫苗 ,Balb/c小鼠 5 0只 ,随机均分为对照组和实验组 ,对照组每只小鼠的股四头肌注射接种 10 μgpVAC质粒DNA ,实验组以同样方式注射 10 μgpVAC -CalpainDNA疫苗 ,第 3周加强免疫一次。第 4周每只小鼠经腹部皮肤感染 ( 2 5± 1)条尾蚴 ,感染 6周后剖杀 ,从门静脉灌流收集计成虫数、碎脾计T淋巴细胞总数、从各鼠肝脏的同一部位切下小块肝组织 ,置 5 %KOH溶液消化后 ,计算每克肝组织虫卵数 ,比较减虫率、减雌率和减卵率。于免疫前、第一次免疫后 2周和感染后 2周分别从尾静脉采血 ,用ELISA测定抗体水平。结果 与对照组相比 ,实验组获得 36.84%的减虫率、36.36%的减雌率和 43.31%的减卵率 ,感染后实验组小鼠IgG抗体水平升高幅度大于对照组 ,对照组T淋巴细胞数显著多于实验组。结论 CalpainDNA疫苗可诱导小鼠产生较好的免疫保护作用 。
- 周爱琴张仁利石淑华龙彩虹高世同林敏吴少庭
- 关键词：日本血吸虫中国大陆株CALPAINDNA疫苗免疫保护
