林涛
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划军队医学科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- VEGFR_2siRNA腺病毒载体的构建及其对人结肠癌细胞系的影响被引量：4
- 2005年
- 目的:构建血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)siRNA腺病毒载体,并研究其对结肠癌细胞系LOVOVEGFR2表达的影响.方法:首先构建含有VEGFR2siRNA的鼠U6载体(mU6-VEGFR2siRNA);利用HindⅢ与XbaⅠ双酶切将鼠U6载体启动子和VEGFR2siRNA克隆入无启动子穿梭载体promoterlesspShuttlevector,得到pShuttle-mU6pro-VEGFR2siRNA;将pShuttle-mU6pro-VEGFR2siRNA与腺病毒骨架质粒(pAdeasy-1)在BJ5183细菌中进行同源重组,得到PAdeasy-mU6Pro-VEGFR2siRNA;利用得到的重组腺病毒感染人结肠癌LOVO细胞系,观察VEGFR2siRNA对结肠癌细胞VEGFR2表达的影响.采用West-blot检测感染前后VEGFR2蛋白表达水平的变化.结果:成功构建血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)siRNA腺病毒载体,该载体显著抑制LOVO细胞中VEGFR2的蛋白表达水平(P<0.01).结论:构建的Adeasy-mU6pro-VEGFR2siRNA腺病毒能有效地抑制LOVO细胞中VEGFR2表达,从而为肿瘤的基因治疗打下基础,也为肿瘤血管抑制治疗提供了新思路.
- 黄大伟吴开春潘阳林林涛刘长江郭长存樊代明
- 关键词：腺病毒载体人结肠癌细胞系血管内皮细胞生长因子受体结肠癌
- 胃癌细胞AGS中KDR的表达对人脐静脉内皮细胞生物学行为的影响
- 2005年
- 目的 观察胃癌细胞AGS中血管内皮生长因子受体KDR表达水平发生变化时,其培养上清对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)生物学行为的影响。方法 采用Westernblot及免疫细胞化学的方法检测AGS细胞中KDR的表达;利用重组腺病毒介导的KDRsiRNA转染AGS细胞,通过细胞增殖试验、迁移试验及管状结构形成试验,观察不同条件培养基作用下内皮细胞生物学特性的变化。结果 胃癌细胞AGS表达KDR,转染siRNA后表达水平降低;条件培养基影响了HUVECs增殖、迁移、形成管状结构的能力,转染siRNA的AGS细胞或亲本细胞组较RPMI1640组均增强,前者更强。结论 胃癌细胞AGS来源的条件培养基对内皮细胞的增殖、迁移、管状结构的形成具有促进作用,抑制AGS细胞中KDR的表达,这种作用被增强。
- 梁树辉丁杰黄大伟潘阳林林涛党冬梅时永全吴开春
- 关键词：KDRSIRNAHUVEC
- 肿瘤血管内皮细胞异质性分子的研究进展被引量：3
- 2006年
- 肿瘤血管与正常血管相比,其发生基础、表现形式及分子表达均存在明显差异,肿瘤血管内皮细胞的分子异质性是肿瘤抗血管生成靶向治疗的理论基础。深入研究肿瘤血管异质性分子对于肿瘤诊断、血管靶向治疗等具有重要意义。本文综述目前肿瘤血管内皮细胞异质性分子的研究进展,为相关研究提供参考。
- 梁树辉丁杰郅敏林涛吴开春樊代明
- 关键词：肿瘤内皮细胞噬菌体肽库
- 环7肽库筛选胃癌耐药细胞特异性结合短肽被引量：1
- 2006年
- 目的获得与胃癌耐药细胞株SGC7901/VCR特异结合的抑制耐药短肽,作为提高胃癌化疗效果的先导化合物。方法以SGC7901/VCR细胞为靶细胞,胃粘膜永生化上皮细胞GES,胃癌药敏细胞SGC7901为吸附细胞对噬菌体7肽库进行消减筛选,用细胞ELISA鉴定阳性噬菌体克隆并测序,利用竞争抑制试验确定阳性克隆的结合部位是否为外源性肽段。结果经4轮筛选,从随机挑选的30个噬菌体克隆中得到14个能特异性与SGC7901/VCR结合而不与胃癌药敏细胞结合的阳性克隆,确定其氨基酸序列分别为SY1和SY2(筛选所得安基酸序列正在专利申请中),含SY1为阳性克隆。结论用噬菌体环7肽库成功筛选到能特异性结合胃癌耐药细胞株的短肽,为肿瘤治疗或药物靶向治疗奠定基础。
- 王鹏林涛丁杰梁树辉韩霜曹珊珊葛伏林白飞虎樊代明
- 关键词：噬菌体肽库短肽多药耐药胃癌
- 胃癌耐药细胞特异性结合小肽对多药耐药的影响被引量：2
- 2007年
- 目的 研究环九肽（SY1）与胃癌耐药细胞（SGC7901／VCR）的结合特性及其对胃癌耐药性的逆转作用。方法 将细胞分为SGC7901和SGC7901／VCR2组培养。以无关噬菌体、阴性噬菌体为对照组，用免疫荧光技术检测含有SY1的阳性噬菌体与SGC7901／VCR的结合特性；通过体外药敏试验（MTT）分析含有SY1的阳性噬菌体和化学合成的SY1对SGC7901／VCR耐药性的改变；应用流式细胞仪检测在SY1作用下SGC7901／VCR细胞内阿霉素（ADM）的蓄积和储留。结果 （1）免疫荧光分析的结果显示，含有SY1的阳性噬菌体能够结合于SGC7901／VCR的膜表面，而不与亲本细胞SGC7901结合，无关噬菌体和阴性噬菌体均不与SGC7901／VCR结合，表明SY1可与SGC7901／VCR特异性结合。（2）MTT试验结果显示，在含有SY1的阳性噬菌体及化学合成的SY1的作用下，SGC7901／VCR的存活率显著降低（P〈0．05），其对长春新碱的耐药性降低。（3）在化学合成的SY1作用下，SGC7901／VCR细胞内ADM的储留蓄积高于对照组（P〈0．05）。结论 利用环七肽库差减筛选得到的环九肽SY1不仅能与SGC7901／VCR特异性结合，而且可部分逆转其对长春新碱的耐药性。这可能为胃癌多药耐药的逆转提供新思路。
- 王鹏丁杰林涛韩霜曹珊珊葛伏林安广群李荣雷婷白飞虎樊代明
- 关键词：胃肿瘤SGC7901/VCR细胞逆转耐药短肽
- 利用细菌内重组腺病毒系统构建胃癌MG7-Ag模拟表位疫苗被引量：6
- 2003年
- 目的:以复制缺陷的腺病毒为疫苗载体,构建基于胃癌MG7-Ag模拟表位的重组腺病毒疫苗.方法:将编码MG7-Ag模拟表位的互补序列设计到上游引物的5/端.以含有HBcAg全序列的质粒p1.2Ⅱ为模板,通过PCR扩增,获得MG7-Ag模拟表位与HBcAg的融合基因.经序列测定证实后,亚克隆至pAdTrack-CMV穿梭质粒,再与pAdEasy-1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组.经抗性筛选及酶切鉴定的重组质粒,再用导入293细胞进行包装,利用Adeasy系统上的绿色荧光蛋白标签鉴定病毒表达.结果:序列测定证实,PCR产物为胃癌MG7-Ag模拟表位与HBcAg的融合基因片段;酶切鉴定表明胃癌MG7-Ag模拟表位与HBcAg的融合基因片断插入了pAdTrack-CMV穿梭质粒,卡那霉素进行抗性筛选及PacⅠ酶切鉴定证实腺病毒重组质粒构建成功.PacⅠ酶切线性化的重组质粒导入293细胞3d后见明显的绿色荧光蛋白表达.回收病毒,可重复感染293细胞,证实有感染能力的病毒颗粒包装成功.结论:胃癌MG7-Ag模拟表位的重组腺病毒载体的构建成功,为进一步研究胃癌MG7-Ag模拟表位诱发抗胃癌免疫打下了基础.
- 林涛丁杰孟繁平韩全利喻召才郭长存刘志国樊代明
- 关键词：胃癌MG7-AG
- 胃癌特异性纳米疫苗的制备及其生物学活性的研究被引量：4
- 2005年
- 目的:以胃癌特异性多肽抗原MG7为靶点研制胃癌特异性纳米疫苗,并观察其对小鼠的免疫效能。方法:人工合成胃癌MG7-Ag的模拟表位多肽,用磁力超声法将其包封于纳米乳剂中,通过透析纯化,HPLC检测其包封效率。用包封有MG7抗原肽的纳米疫苗免疫健康Balb/c小鼠,以空白纳米疫苗和PBS作为对照,测定其免疫活性,通过ELISA测定血清中抗MG7抗体的效价;ELISPOT测定小鼠脾CTL活性。同时,用表达MG7-Ag的小鼠艾氏腹水瘤细胞进行肿瘤攻击2周,观察疫苗对小鼠的保护作用。结果:成功制备了胃癌MG7-Ag的纳米疫苗,并具有较好的包封率和较好的稳定性,小鼠产生MG7抗体,ELISPOT检测包封组与对照组相比分泌IFN-γ的活性淋巴细胞数量明显增高。疫苗免疫组8只小鼠中有2只未见肿瘤形成,而对照组8只小鼠则全部成瘤。结论:胃癌MG7-Ag表位纳米疫苗具有免疫原性,可以诱导小鼠产生抗肿瘤免疫。
- 师瑞吴开春吴道澄宁晓暄林涛樊代明
- 关键词：纳米乳剂纳米疫苗
- 利用细菌内重组腺病毒系统构建胃癌MG7—Ag模拟表位疫苗
- 2002年
- 林涛丁杰等
- 关键词：胃癌疫苗
- 人胃癌微血管内皮细胞的分离培养及鉴定
- 2005年
- 梁树辉丁杰赵澎涛郅敏林涛幺立萍洪流吴开春樊代明
- 关键词：胃肿瘤微血管内皮细胞
