毛赟赟
- 作品数：10 被引量：10H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市高等学校科技发展基金计划项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 新型低基础表达Tet-on基因表达系统的构建与鉴定被引量：3
- 2008年
- 目的:构建一种新型的具有更低基础表达的Tet-on调控系统,以用于毒性蛋白及+RNA病毒的真核细胞调控合成。方法:对目前常用的Tet-on系统中的四环素调控蛋白(rtTA、tTS)的表达途径进行改进,使得在非诱导条件下调控蛋白的基础诱导活性进一步降低。结果:相比原有的Tet-on系统,新构建的Tet-on系统非诱导状态下的基础表达值下降了一半以上。结论:成功构建基础表达值更低的Tet-on调控系统,为真核调控表达毒性蛋白或合成+RNA病毒打下了基础。
- 胡伟李玉霞凌焱毛赟赟宋兰高原段海清周围张京生陈惠鹏梁龙
- 关键词：TET-ON
- 注射用重组新蛭素的质量控制研究
- 2016年
- 目的:建立注射用重组新蛭素原液、成品的质量控制方法及内控质量标准。方法:利用纤维蛋白凝块法测定注射用重组新蛭素的生物学活性,非还原SDS-PAGE和RP-HPLC测定纯度,SDS-PAGE和质谱法分析相对分子质量,免疫印迹验证目的蛋白,其余检测项目按《中华人民共和国药典》(2010年版三部)规定进行。结果:用建立的方法对注射用重组新蛭素3批原液和成品进行了检定,原液抗凝比活性均为512 ATU/mg,非还原型SDS-PAGE和HPLC检测3批原液的纯度结果均大于95%;质谱法分析3批原液相对分子质量符合7.3×103±0.7×103,SDS-PAGE分析3批原液相对分子质量符合13.2×103±1.3×103;免疫印迹表明检测条带为目的蛋白,能被抗水蛭素抗体特异性结合;其余各项指标均符合内控质量标准及《中华人民共和国药典》(2010年版三部)的要求。结论:建立的质量控制方法和内控质量标准可以用于注射用重组新蛭素的检定和质量控制。
- 毛赟赟李彦英董俏言赵宁李凯靳继德董晓杰
- 关键词：水蛭素生物学活性
- 西妥昔单抗注射液生物学活性分析被引量：2
- 2016年
- 目的:对自行开发的爱必妥类似物西妥昔单抗进行体内及体外活性分析。方法:采用表皮生长因子受体(EGFR)结合实验、表面等离子共振法(SPR)、磷酸化抑制实验及细胞生长抑制实验分析西妥昔单抗的生物学活性,通过小鼠异体移植肿瘤的抑制实验分析体外生物学活性与药效关系。结果:体外亲和力分析结果表明,西妥昔单抗可特异结合人EGFR,亲和力与爱必妥相当(P>0.05)。西妥昔单抗可抑制由表皮生长因子(EGF)引发的EGFR自体磷酸化,基于对EGFR磷酸化抑制而建立的西妥昔单抗生物学活性方法与西妥昔单抗的肿瘤细胞生长抑制作用进行了比较,结果显示西妥昔单抗抑制EGFR磷酸化的活性数值与其抑制细胞生长的活性一致。在鼠异体移植模型中,西妥昔单抗对A431细胞的肿瘤生长产生强烈抑制作用,对HT-29细胞的肿瘤生长也有剂量依赖性抑制。结论:采用的检测方法可用于西妥昔单抗的生物学活性分析,其体内与体外生物学效应与市售爱必妥没有差异。
- 毛赟赟张丽汪波李凯李彦英王笑非董晓杰
- 关键词：西妥昔单抗表皮生长因子受体生物学活性磷酸化
- 炭疽毒素PA在E．coli中的表达、纯化及其生物活性分析
- 2008年
- 目的:构建pET-32a(+)-PA重组质粒,实现融合蛋白Trx-PA在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中的表达,并获得有生物学活性的PA。方法:采用PCR的方法扩增PA的编码序列,并且与pET-32a(+)载体的Trx编码区融合产生pET-32a(+)-PA重组质粒,将重组质粒转化至感受态E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达pET-32a(+)-PA,通过SDS-PAGE和Western印迹进行分析。利用Ni2+金属亲和层析纯化表达产物,通过梯度透析进行复性。通过蛋白酶降解和细胞毒性实验分析Trx-PA的生物学活性。结果:成功构建pET-32a(+)-PA重组质粒,并纯化了Trx-PA融合蛋白。SDS-PAGE分析表明融合蛋白相对分子质量大小正确,经纯化复性后,蛋白纯度达到76%。Trx-PA在体内和体外均能被弗林蛋白酶(furin酶)降解。Trx-PA的正确降解是致死因子(lethal factor,LF)进入小鼠巨噬细胞Raw264.7内并产生细胞毒性的基础。结论:重组Trx-PA融合蛋白能在E.coliBL21(DE3)中有效表达,并表现出生物学活性。
- 李玉霞李伟东凌焱胡伟毛赟赟周围张京生梁龙陈惠鹏
- 关键词：炭疽毒素保护性抗原纯化
- 单克隆抗体纯化过程中内毒素去除方法分析被引量：2
- 2013年
- 目的：分析单克隆抗体纯化过程中，去除内毒素的不同方法的应用效果，并探讨它们应用于中试规模的可行性。方法与结果：比较了多聚赖氨酸型的内毒素去除填料、20nm膜过滤、将单抗附着在蛋白A柱上后使用精氨酸和组氨酸溶液冲洗等3种方法的内毒素去除效果，发现3种方法都可以将内毒素水平大幅降低，可分别将内毒素去除70％、88％和97％。因为单抗分子等电点较高，所获得的最低内毒素含量为0．2～0-3EU／mg。结论：3种方法均具有一定的工艺放大潜力，进一步提高内毒素去除效果将需要综合使用不同机理的去除技术。
- 李彦英王珙李凌瑞周振海李娜毛赟赟李凯王笑非董晓杰
- 关键词：组氨酸精氨酸
- 大肠杆菌O157∶H7新蛋白Ecs4563的基因克隆、表达及纯化被引量：1
- 2008年
- 目的:克隆、表达并纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7新预测分子伴侣蛋白Ecs4563,以进一步开展其结构与功能的研究。方法:利用PCR方法从EHEC O157∶H7基因组中扩增出分子伴侣基因ecs4563,构建重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现诱导表达,采用Western印迹法进行鉴定,通过Ni2+螯合柱纯化获得目的蛋白。结果:构建了pET-24a-ecs4563重组质粒,实现了目的蛋白的融合表达,Ni2+金属螯合法纯化了目的蛋白,通过Western印迹法验证了融合蛋白的特异性。结论:得到了新预测分子伴侣Ecs4563,为下一步研究蛋白功能,进一步研究EHEC O157∶H7的致病机制奠定了基础。
- 毛赟赟李玉霞高原凌焱胡伟张部昌周围梁龙
- 关键词：克隆基因表达
- 新预测的Ⅲ型分泌系统毒力蛋白Z3672的基因克隆、表达及纯化被引量：1
- 2009年
- 目的:克隆、表达并纯化肠出血性大肠杆菌EHEC O157∶H7新预测毒力蛋白Z3672,以进一步开展其结构与功能的研究。方法:利用PCR方法从EHEC O157∶H7基因组中扩增出基因z3672,构建重组表达质粒,经测序证实后,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现诱导表达,采用质谱分析法和W estern印迹试验进行鉴定,通过洗涤包涵体纯化目的蛋白。结果:构建了pET-24 az-3672重组质粒,经酶切及测序鉴定与预期序列一致,实现了目的蛋白的融合表达,并且对蛋白条带的质谱分析证实了表达蛋白即为Z3672蛋白。纯化后目的蛋白的纯度>90%。结论:得到了新预测的毒力蛋白Z3672,为下一步研究蛋白功能,并进一步研究EHEC O157∶H7的致病机制奠定了基础。
- 高原马延毛赟赟李玉霞凌焱张京生周围梁龙
- 关键词：大肠杆菌O157:H7基因表达
- 大肠杆菌O157:H7新分子伴侣的预测、表达、纯化及其相互作用蛋白的初步筛选
- EHEC O157:H7是一种重要的危害严重的肠道致病菌,它主要通过III型分泌系统(type III secretion system,TTSS)将毒力蛋白直接注入宿主细胞发挥致病作用,是许多革兰氏阴性致病菌中存在的复...
- 毛赟赟
- 关键词：大肠杆菌O157:H7肠道致病菌蛋白鉴定致病机制
- 文献传递
- 3-脱氢莽草酸生物合成的代谢工程
- 2007年
- 3-脱氢莽草酸,是芳香族氨基酸生物合成代谢途径中一种重要的中间产物,可作为一些化学合成制剂和药物中间原料。这样以无毒可再生物质为起始原料的合成方法与传统的有机合成化学制剂的方法相比,对环境更加有利。此外,它还是一种十分有效的抗氧化剂。工业上一般采用化学合成法和发酵法来生产3-脱氢莽草酸,随着代谢工程的兴起,使得更加理性改造菌株成为可能,这更加促进了发酵法的广泛应用。主要介绍了代谢工程在生物合成3-脱氢莽草酸生产菌改造中的应用情况,其中涉及3-脱氢莽草酸生物合成途径中相关基因及其酶的调控、中心代谢途径的改造和3-脱氢莽草酸合成支路的修饰等,并探讨了将来的发展前景。
- 毛赟赟张部昌梁龙
- 关键词：代谢工程生物合成
- 利用CRISPR/Cas9n系统敲除人源SNF5基因被引量：1
- 2015年
- 目的:建立敲除人源基因组中SNF5基因的CRISPR/Cas9n系统。方法:设计一对靶向人源SNF5基因第1个外显子的sg RNA,分别克隆至p X461、p X462表达载体后,转入人胚肾293T细胞,通过Western印迹检测细胞株中SNF5基因的敲除效果。结果:测序证明构建的靶向SNF5基因CRISPR/Cas9n重组质粒与设计吻合。Western印迹结果显示,重组质粒p X461-h SNF5sg RNA转染293T细胞后24 h,细胞内SNF5表达水平明显降低;重组质粒p X462-h SNF5sg RNA转染293T细胞后48 h,细胞内SNF5表达水平显著降低。结论:通过CRISPR/Cas9n系统获得了靶向SNF5基因的重组质粒,构建的重组质粒能有效敲除SNF5基因的表达。
- 孙琰刘超毛赟赟王玺
- 关键词：表观遗传
