沈小燕
- 作品数：9 被引量：23H指数：2
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- 用RNA干扰慢病毒研究Wnt/β-连环蛋白信号通路对小鼠胰岛β细胞增殖的影响
- 2010年
- 目的 构建β-连环蛋白特异的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,初步探讨Wnt/β-连环蛋白信号通路对小鼠胰岛β细胞增殖的影响.方法 利用体外同源重组技术构建短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,与辅助包装质粒一起在293 T淋巴细胞中包装并扩增病毒,逐孔稀释法测定病毒滴度;RNAi慢病毒感染小鼠胰岛β细胞,实时PCR以及Western blot法检测其对β-连环蛋白表达的抑制效应;利用构建的RNAi慢病毒抑制β-连环蛋白表达,四甲基偶氮唑盐法检测小鼠胰岛β细胞增殖活性.组间比较采用方差分析(ANOVA).结果 成功构建了β-连环蛋白特异的RNAi慢病毒表达载体,获得的慢病毒滴度在5.0×10~8TU/ml左右;RNAi慢病毒在3 d后就能有效感染小鼠胰岛β细胞,5 d后使细胞内β-连环蛋白基因mRNA和相应蛋白的表达受到明显抑制;慢病毒感染小鼠胰岛β细胞后,细胞增殖率明显减少.结论 构建的目的RNAi慢病毒表达载体能有效抑制β-连环蛋白基因的表达;Wnt/β-连环蛋白信号通路在小鼠胰岛β细胞增殖中有重要影响.
- 邹欣陈刚沈小燕方晓文陈玉芳胡雅婷曾月桂林丽香
- 关键词：RNA干扰WNT信号Β-连环蛋白胰岛Β细胞增殖
- RNAi对波动性葡萄糖诱导的人脐静脉内皮细胞糖原合成酶激酶-3β、β-联蛋白作用的研究
- 2018年
- 目的构建糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)特异的RNAi腺病毒表达载体,感染原代人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),观察其对波动性浓度葡萄糖溶液诱导的HUVEC Wnt信号通路中GSK-3β、β-联蛋白(β-catenin)的影响。方法设计合成针对GSK-3βmRNA不同位点的短发荚RNA(short hairpin RNA,shRNA)编码序列,重组RNAi腺病毒表达载体。实验分为3组,空白对照组、阴性对照组、实验组。空白对照组使用波动性浓度葡萄糖溶液(5.5 mmol/L和30.5 mmol/L两种浓度的葡萄糖溶液每日交替培养,模拟血液中葡萄糖浓度的波动)培养HUVEC;阴性对照组使用波动性浓度葡萄糖溶液培养HUVEC,并使用无携带GSK-3β基因的腺病毒感染培养的HUVEC;实验组使用波动性浓度葡萄糖溶液培养HUVEC,并GSK-3β特异的RNAi腺病毒感染培养的HUVEC。Western印迹法波动性浓度葡萄糖溶液干预前及干预后72小时3组的GSK-3β、β-联蛋白水平。结果波动性浓度葡萄糖溶液干预72小时后,实验组的GSK-3β表达水平(0.1068±0.0034)较空白对照组、阴性对照组低,差异有统计学意义(F=10886.388,P=0.000);实验组的β-联蛋白水平表达水平(0.6653±0.0167)较空白对照组、阴性对照组低,差异有统计学意义(F=315.96,P=0.000)。结论构建的RNAi腺病毒感染HUVEC后可以抑制高糖诱发的GSK-3β蛋白表达、增加细胞内β-联蛋白的蛋白水平。
- 梁继兴李连涛陈彦游婷婷陈玉芳沈小燕林丽香
- 关键词：RNA干扰糖原合成酶激酶-3Β脐静脉内皮细胞
- 2型糖尿病合并肺部感染患者临床分析被引量：19
- 2009年
- 目的了解T2DM合并肺部感染患者的致病菌分布及药敏情况,比较社区获得性肺炎(CAP)和医院获得性肺炎(HAP)病原谱差异和耐药强弱。方法分析我院1995年1月至2006年10月收治的T2DM合并肺部感染患者的痰培养和血培养致病菌及药敏测定结果。结果 494例痰培养致病菌分布为:革兰阳性球菌73株,占16.7%;革兰阴性杆菌139株,占31.9%;真菌224株,占51.4%。CAP组和HAP组均以真菌和革兰阴性杆菌为主,两组对多种抗生素耐药性较高,HAP组明显高于CAP组。结论 2型糖尿病患者合并CAP与HAP病原菌均以真菌和革兰阴性杆菌为多见,两组病原谱和耐药情况存在统计学差异。临床应重视2型糖尿病合并肺部感染患者痰培养及抗生素的合理使用。
- 沈小燕陈刚林丽香
- 关键词：肺部感染药物敏感性试验
- 福建省立医院2型糖尿病合并肺部感染住院患者细菌学及药敏分析
- 目的了解福建省2型糖尿病合并肺部感染住院患者的痰培养及血培养致病菌分布及药敏情况,比较社区获得性肺炎和医院获得性肺炎病原谱差异和耐药情况。方法回顾性分析我院1995年1月至2006 年10月收治的2型糖尿病合并肺部感染患...
- 陈刚沈小燕李连涛林丽香
- 文献传递
- 用RNA干扰腺病毒载体研究Wnt／β-连环蛋白信号途径对人甲状腺细胞增殖的影响被引量：2
- 2008年
- 目的以糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）特异的RNA干扰（RNAi）腺病毒表达载体作为研究工具，从转录后水平抑制GSK-3β基因表达，探讨Wnt/β-连环蛋白（Wnt/β-catenin）信号通路对人甲状腺细胞增殖的影响。方法利用体外同源重组技术构建短发夹RNA（shRNA）腺病毒表达载体，在HEK293A细胞中包装并扩增病毒、空斑实验法测定病毒滴度；RNAi腺病毒感染原代培养人甲状腺细胞，Western印迹法检测其对GSK-3β蛋白表达的抑制效应；利用构建的RNAi腺病毒抑制GSK-3β表达，BrdU法检测原代培养人甲状腺细胞增殖活性。结果成功构建了GSK-3β特异的RNAi腺病毒表达载体，获得高滴度的腺病毒液；RNAi腺病毒感染原代培养人甲状腺细胞后，GSK-3β蛋白的表达受到明显抑制，β-catenin蛋白表达显著增加（1．324±0．057vs0．935±0．029，P〈0．05）；腺病毒感染原代培养人甲状腺细胞1、3、5、7d后，RNAi腺病毒组比空病毒组细胞增殖率明显增加（1．473±0．035vs1．312±0．043、1．226±0．045vs0．959±0．066、0．776±0．041vs0．605±0．054、0．337±0．018vs0．259±0．021，P〈0．05）。结论构建的目的RNAi腺病毒表达载体能有效抑制GSK-3β基因的表达；Wnt／β-catenin信号通路在人甲状腺细胞的增殖中有重要影响。
- 陈刚牟伦盼姚瑾游婷婷沈小燕朱香清乔玉芳林苗方晓文邹欣林丽香
- 关键词：信号传递增殖
- NF—κB信号通路对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的作用
- 2009年
- 目的研究高糖尤其是波动性高糖对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡的影响，以及NF-κB信号通路在高糖诱导HUVEC凋亡中的作用。方法构建针对NF-κBp65 mRNA序列1566位点的重组RNAi腺病毒表达载体，并利用RNAi腺病毒抑制HUVEC p65表达。应用流式细胞术及脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）研究NF-κB信号通路在高糖诱导HUVEC凋亡的作用。结果高糖（20．5mmol／L或30．5mmol／L）可以促进HUVEC凋亡。NF-κBp65特异腺病毒感染HUVEC后，可以明显抑制高糖刺激的NF-κBp65核蛋白转录，使核内p65蛋白表达处于基础水平。TUNEL结果示高糖作用后5d，高糖组细胞凋亡率显著高于正常葡萄糖组（25．81％±1．77％比8．20％±0．63％，P〈0．05），Ad—DEST＋高糖组（26．10％±0．98％）与单独高糖组的细胞凋亡率差异无统计学意义（P〉0．05）。Ad-1566＋高糖组的细胞凋亡率（11．49％±0．92％）比Ad—DEST＋高糖组显著下降（P〈0．01）。TUNEL法及流式细胞术检测结果均显示NF-κBp65特异腺病毒可以降低高糖诱导的HUVEC凋亡。结论高糖可以促进HUVEC凋亡。腺病毒感染HUVEC可以明显抑制高糖刺激的NF-κBp65核转录，从而保护高糖作用的HUVEC凋亡。
- 陈刚沈小燕林旭游婷婷乔玉芳姚瑾林苗朱香清牟伦盼方晓文邹欣林丽香
- 关键词：RNA干扰细胞凋亡高糖人脐静脉内皮细胞
- NF-κB特异的RNAi腺病毒载体的构建及其对人脐静脉内皮细胞增殖凋亡的影响
- 目的:构建针对NF-κB p65基因的RNAi腺病毒表达载体,从转录后水平抑制p65基因表达,为研究NF-κB信号通路提供技术工具;研究高糖尤其是波动性高糖对HUVEC增殖和凋亡的作用;利用构建的RNAi腺病毒感染人脐静...
- 陈刚沈小燕林旭林丽香
- 关键词：RNAI腺病毒NF-ΚBHUVEC增殖凋亡
- 文献传递
- β-连环蛋白在高糖诱导的内皮细胞损伤中的作用被引量：1
- 2007年
- 内皮细胞功能紊乱被认为是高糖诱导血管并发症的始动因素和加重的基础。Wnt/β-连环蛋白信号途径在内皮细胞增生和凋亡的调控上起着重要作用,这条信号通路关键调节靶点是胞浆中β-连环蛋白的水平,它决定了Wnt靶基因的活化水平。当内皮细胞处于高糖环境中,β-连环蛋白减少,Wnt信号减弱,内皮细胞抗凋亡能力下降,增殖受到抑制,从而导致血管并发症。除此以外,在高糖作用下,β-连环蛋白介导的内皮细胞间黏附连接的破坏将导致内皮通透性增高,使蛋白质等大分子物质漏出血管外,同样造成血管功能紊乱。
- 沈小燕陈刚
- 关键词：Β-连环蛋白内皮细胞高糖凋亡
- GSK-3β特异siRNA腺病毒对脐静脉内皮细胞增殖的影响被引量：1
- 2008年
- 目的以糖原合成酶激酶3p（GSK-3β）特异的RNA干扰（RNAi）腺病毒表达载体作为研究工具，初步探讨Wnt／β-连环蛋白（Wnt／β-eatenin）信号通路对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖的影响。方法利用体外同源重组技术构建GSK-3β特异的siRNA腺病毒表达载体，在HEK293A细胞中包装并扩增病毒、空斑实验法测定病毒滴度。GSK-3β特异的RNAi腺病毒感染HUVEC，Western印迹和免疫细胞化学法检测其对GSK-3β和13-catenin蛋白表达的影响，以四甲基偶氮唑盐（MTr）法检测细胞增殖。结果成功构建了GSK-3β特异的siRNA腺病毒表达载体，获得高滴度的腺病毒液。构建的重组腺病毒感染HUVEC显著抑制GSK-3B蛋白的表达，增加β-catenin的蛋白表达。重组腺病毒感染3、5、7d后，细胞增殖率明显增加（P〈0．05或P〈0．01）。结论构建的GSK-3β特异的siRNA腺病毒能有效抑制GSK-3β基因的表达，促进β-catenin的蛋白表达，上调Wnt／β-catenin信号通路对人脐静脉内皮细胞增殖有重要的影响。
- 陈刚游婷婷乔玉芳沈小燕林丽香
- 关键词：糖原合成酶激酶3Β-连环蛋白人脐静脉内皮细胞细胞增殖
