王亮亮
- 作品数：16 被引量：7H指数：2
- 供职机构：南京林业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程资助项目引进国际先进农业科技计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程石油与天然气工程农业科学更多>>
- 巨大芽孢杆菌细胞色素P450酶的表达纯化及定向进化研究
- 2014年
- 为了获得高效的重组来自巨大芽孢杆菌ALA2的细胞色素P450酶(CYPs),将CYPs基因(cyp)克隆到大肠杆菌表达载体p ET20b(含T7启动子)和p Trc99A(含trc启动子)中,转入大肠杆菌表达,发现trc启动子更适合CYPs的表达。优化了Ni-NTA纯化CYPs的条件,在p H值8.1时,用60 mmol/L的咪唑缓冲液洗脱得到电泳纯的重组CYPs,酶活达到2 095 U/mg,纯化回收率为31%,回收倍数为2.32。通过理性设计确定突变位点为269位苏氨酸(T)和394位苯丙氨酸(F),通过筛选获得了突变酶T269S和T269R,2种突变酶以软脂酸为底物,酶活提高32.0%和29.0%,以油酸为底物酶活提高11.6%和9.1%。
- 李迅王婷王亮亮王飞
- 关键词：巨大芽孢杆菌细胞色素P450酶定向进化软脂酸
- 餐桌
- 1．本外观设计产品的名称：餐桌。;2．本外观设计产品的用途：本外观设计产品用于餐厅食品摆放及展示。;3．本外观设计产品的设计要点：形状、形状与色彩的结合。;4．最能表明本外观设计设计要点的图片或照片：立体图。;5．请求保...
- 陈于书王亮亮
- 文献传递
- 一种基于纤维小体的毕赤酵母表面共展示系统及其构建方法和应用
- 本发明提供了一种基于纤维小体的毕赤酵母表面共展示系统及其构建方法和应用，属于分子生物学、食品以及基因工程技术领域。本发明所述系统包括锚定蛋白和多蛋白展示底架蛋白，所述锚定蛋白为酿酒酵母细胞壁蛋白Sed1p；所述多蛋白展示...
- 李迅王亮亮王月皎李文谦王飞张瑜
- 文献传递
- 腾冲菌脂肪酶的表达纯化及酶学性质的表征被引量：2
- 2014年
- 将来自腾冲菌的脂肪酶（LipA）基因（lipA）克隆到大肠杆菌表达载体pET28a（含T7启动子）和pTrc99A （含Trc启动子）中，转入大肠杆菌表达，发现Trc启动子更适合LipA的表达。通过热处理和DEAE-Sepharose阴离子柱纯化过程，重组LipA得到纯化，比酶活达到1.9U/mg，重组LipA分子量为42kDa。重组LipA在80℃、pH 4.5时酶活最高，经85℃保温2h，酶活保持60%以上；在pH值4.0～6.0之间，LipA具有较好的稳定性；Cu^2＋和Zn^2＋对酶活力分别有38.9%和69.2%的抑制作用，Mn^2＋、Co^2＋和Tween-20对该酶有较大的激活作用；以p-nitrophenyl-laurate （p-NP-C12）为底物时，该酶的Km值为1.5mmol/L，kcat为34.5s-1。
- 李迅仲惠王亮亮邓若冰高红王飞
- 关键词：脂肪酶酶学性质
- 巨大芽孢杆菌ALA2细胞色素P450酶基因及其重组质粒的构建及酶的纯化方法
- 巨大芽孢杆菌ALA2细胞色素P450酶基因及其重组质粒的构建及酶的纯化方法，该基因的核苷酸序列<I>cypI</I>如SEQIDNO.1所述。通过对大肠杆菌表达载体的选择和基因的定向改造，选择的pTrc99A载体使重组蛋...
- 李迅王婷王亮亮
- 文献传递
- 复合脂肪酶协同催化制备生物柴油的研究被引量：2
- 2016年
- 【目的】探讨复合酶协同催化体系在含水量较高的体系中催化油脂制备生物柴油的工艺条件。【方法】通过基因工程手段在毕赤酵母中分别高效分泌表达南极假丝酵母脂肪酶(CALB)和米根霉脂肪酶(ROL),构建CALB和ROL复合酶协同催化体系制备生物柴油,利用单因素实验优化工艺条件,以甲酯化得率作为复合酶协同催化体系效能的评价标准。【结果】优化工艺条件为:CALB?ROL最佳复合酶配比为7?3,每克大豆油中加入16 U的复合脂肪酶,甲醇与大豆油摩尔比为4?1,并按0 h时2?1醇油摩尔比,12 h和24 h时以1?1醇油摩尔比分批加入甲醇,含水量为30%-60%之间,40°C反应29-34 h,甲酯得率达到93%。【结论】该复合酶协同催化体系对环境友好,与常规酶法制备生物柴油工艺相比对酶的使用量和催化时间减少幅度都在50%以上,本复合酶协同催化体系能有效降低生物柴油制备成本,具有较好的工业化应用前景。
- 李迅邓若冰段成元王亮亮王飞
- 关键词：生物柴油米根霉脂肪酶
- 突变修饰的巨大芽孢杆菌ALA2细胞色素P450酶及其制备方法和应用
- 突变修饰的巨大芽孢杆菌ALA2细胞色素P450酶及其制备方法和应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所述。通过对P450<Sub>BM‑3</Sub>单加氧酶基因的定向改造，选择的3个突变点R966L/K972L/W1...
- 李迅王亮亮卢敏王飞
- 文献传递
- 餐椅（DFYXBD-CY1）
- 1．本外观设计产品的名称：餐椅（DFYXBD‑CY1）。;2．本外观设计产品的用途：本外观设计产品用于餐厅坐具。;3．本外观设计产品的设计要点：形状、形状与色彩的结合。;4．最能表明本外观设计设计要点的图片或照片：立体图...
- 陈于书王亮亮
- 沙发（DFYXAL-SF1）
- 1．本外观设计产品的名称：沙发（DFYXAL‑SF1）。;2．本外观设计产品的用途：本外观设计产品用于坐具。;3．本外观设计产品的设计要点：形状、形状与色彩的结合。;4．最能表明本外观设计设计要点的图片或照片：主视图。;...
- 陈于书王亮亮
- 茶椅
- 1．本外观设计产品的名称：茶椅。;2．本外观设计产品的用途：本外观设计产品用于饮茶坐具。;3．本外观设计产品的设计要点：形状、形状与色彩的结合。;4．最能表明本外观设计设计要点的图片或照片：立体图。;5．请求保护的外观设...
- 陈于书王亮亮
- 文献传递
