王志广
- 作品数：4 被引量：8H指数：1
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组腺相关病毒载体介导的人载脂蛋白AⅠ及载脂蛋白AⅠMilano在肌源性细胞C2C12中的表达
- 2005年
- 目的 以重组2型腺相关病毒为载体介导人载脂蛋白AⅠ及载脂蛋白AⅠMilano在小鼠肌源性细胞C2C12中的表达,探索一种崭新的预防、治疗动脉粥样硬化性疾病的途径。方法 以正常人肝组织中抽提的RNA为模板,用逆转录聚合酶链反应获得人载脂蛋白AⅠcDNA ,点突变制备载脂蛋白AⅠMilanocDNA。分别将载脂蛋白AⅠ、载脂蛋白AⅠMilano的cDNA插入重组2型腺相关病毒载体质粒,并与辅助质粒共转染包装细胞2 93T获得编码人载脂蛋白AⅠ和载脂蛋白AⅠMilano的重组腺相关病毒载体,粗提后以冰乙醇法进行浓缩。斑点杂交检测重组2型腺相关病毒载体滴度,十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其纯度。分别用含载脂蛋白AⅠ或载脂蛋白AⅠMilanocDNA的编码人载脂蛋白AⅠ和载脂蛋白AⅠMilano的重组腺相关病毒对小鼠肌源性细胞C2C12进行感染,酶联免疫吸附法检测蛋白表达情况。结果 聚合酶链反应产物序列正确,点突变成功。编码人载脂蛋白AⅠ和载脂蛋白AⅠMilano的重组腺相关病毒的滴度均在2×10 14 个/L左右。重组2型腺相关病毒纯度良好。载脂蛋白AⅠ及载脂蛋白AⅠMilano分别获得0 .39±0 .0 4mg/L和0 .31±0 .0 3mg/L的表达水平。结论 成功制备表达载脂蛋白AⅠ或载脂蛋白AⅠMilano的重组腺相关病毒载体,并在C2C12细胞中获得有效?
- 王志广桂鸣蒋莉陈秀英黄峻陈琪范乐明
- 关键词：腺相关病毒
- 非糖尿病患者脂联素基因SNP+276G/T单核苷酸多态性与冠心病的相关性研究被引量：8
- 2007年
- 目的:探讨在中国南京地区汉族人群中脂联素单核苷酸多态性SNP+276G/T与冠心病的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,分析了266例非糖尿病患者的冠脉造影结果和脂联素单核苷酸多态性(SNP+276G/T)的关系,研究设立了病例组和正常对照组。结果:相对于T/T基因型,G/G基因型修正后的OR值为3.16,(P<0.05);G/G+G/T基因型的修正后OR值为2.69,(P<0.05)。结论:脂联素SNP+276G/T各种基因型和冠心病的发病密切相关,G/G基因型很可能是冠心病的易感基因型。
- 陆峰王连生杨志健朱铁兵王志广朱怀军汤纳平曹克将黄峻桂鸣
- 关键词：脂联素单核苷酸多态性冠心病
- RTP801缺氧反应性核心序列调控下血管生长因子165和成纤维细胞生长因子2的高效共表达
- 2007年
- 目的获取人血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因,克隆基因损伤诱导转录物4基因启动子中的缺氧反应性核心序列,以含有内核糖体进入位点的单启动子双表达载体为骨架构建真核表达载体,转染人胚肾293细胞,观察在正常和缺氧下人血管内皮生长因子165和人成纤维细胞生长因子2的表达。方法利用聚合酶链反应法从小鼠基因组中获取基因损伤诱导转录物4基因启动子的缺氧反应性核心序列337bp^511bp,替换含有内核糖体进入位点的单启动子双表达载体上的巨细胞病毒增强子(150bp^390bp)。通过聚合酶链反应法获取含有人血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因的片段,插入含有内核糖体进入位点的单启动子双表达载体中的多克隆位点中,构建重组质粒。利用生物性可降解的聚乙烯亚胺多分支树状聚合物将重组质粒体外转染人胚肾293细胞,在正常和缺氧条件下分别培养36h,Western印迹法检测细胞内血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因的表达,酶联免疫吸附法检测细胞培养基中分泌性蛋白血管内皮生长因子165和人成纤维细胞生长因子2的表达。结果真核表达载体经聚合酶链反应和酶切分析及测序证实构建成功,Western印迹法和酶联免疫吸附法检测证实重组质粒中血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因在基因损伤诱导转录物4基因缺氧反应性核心序列介导下在缺氧人胚肾293细胞有高效共表达。结论获取的基因损伤诱导转录物4基因的缺氧反应性核心序列在缺氧状态下有增强下游基因表达的功能,含有该增强子的真核质粒在缺氧下高效表达血管内皮生长因子165和人成纤维细胞生长因子2。
- 朱含章王志广蒋玲琳苏鑫铭张芳林徐亚林徐州陈琪范乐明
- 关键词：病理学与病理生理学成纤维细胞生长因子2
- 重组腺相关病毒载体介导的人载脂蛋白A-I及载脂蛋白A-IMilano在肌源细胞中的表达
- 本实验以重组2型腺相关病毒(rAAV)为载体介导人apoA-I及apoA-IMilano在小鼠肌源性细胞C2C12中的表达，探索一种崭新的、安全经济的预防和治疗动脉粥样硬化性疾病的途径。方法以正常人肝组织中抽提的RNA为...
- 王志广
- 关键词：腺相关病毒载脂蛋白A-I
- 文献传递
