王怡
- 作品数：20 被引量：33H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院野战输血研究所更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学一般工业技术自动化与计算机技术更多>>
- 报告基因标记的HCV全基因组复制细胞模型的建立被引量：1
- 2011年
- 目的建立稳定的报告基因标记的HCV全基因组复制细胞模型，对细胞内病毒蛋白和核酸的表达水平进行定量。方法把neo抗性基因插入到Luc-JCl中，构建Luc-JC。将体外转录的Luc-JCRNA转染Huh7细胞，经筛选后获得的G418抗性克隆，通过荧光素酶活性检测、Westernblot和HCVNS3／4A对eYFP—MAVS的切割试验进行鉴定。用IFN-α处理筛选到的细胞，观察细胞中荧光素酶活性、HCV相关蛋白和RNA的变化，对复制细胞在抗病毒药物评价方面的应用进行初步验证。结果G418加压筛选得到了多个含HCV全基因组的细胞克隆。在细胞克隆中，荧光素酶活性检测观察到萤火虫荧光素酶；Westernblot检测到HCVNS3和NS5A蛋白的表达；由于NS3／4A的切割，eYFP—MAVS的定位由线粒体转移到细胞质。IFN-α处理阳性克隆细胞，荧光素酶活性、HCV蛋白表达和RNA水平明显降低。结论成功建立稳定的报告基因标记的HCV全基因组复制细胞模型，报告基因能用来指示细胞内HCV蛋白和RNA的表达水平，为进一步开展HCV致病机制研究和治疗药物筛选奠定了基础。
- 高博贾帅争彭剑淳王怡樊炜李银太詹林盛许金波
- 关键词：丙型肝炎病毒萤火虫荧光素酶细胞模型
- 基因表达系列分析技术研究进展被引量：3
- 2004年
- 基因表达系列分析技术(SAGE)是一种新的基因表达分析技术,它可以大量获取全基因组范围基因表达的类别并量化分析。由于其克服了基因丰度的影响,SAGE在新基因的发现中具有独特的优点。同时,SAGE技术被成功应用于特异组织或细胞的转录组研究、mRNA群体间的全局化比较以及差异表达基因染色体分布的分析。文章主要述及了SAGE技术的原理、特点及其在应用上的最新进展。
- 王怡王海平王全立
- 关键词：基因表达系列分析新基因表达谱
- 丙型肝炎病毒感染性细胞模型的研究进展被引量：2
- 2009年
- 丙型肝炎病毒(HCV)是造成慢性肝炎,肝硬化及肝癌的重要原因之一,目前全球约有1.7亿人感染HCV。然而缺乏有效的HCV感染模型,严重阻碍了对HCV致病机制的认识。最近几年以JFH1株和Huh-7细胞系为基础,通过对不同病毒株基因组的重组和细胞系的优化,进一步提高其感染能力,在HCV感染系统的建立上取得了突破性进展。我们简要综述近几年在HCV感染细胞模型方面取得的进展。
- 王志强王怡詹林盛
- 关键词：丙型肝炎病毒细胞模型
- 双荧光素酶标记丙型肝炎病毒亚基因组复制子细胞模型的建立被引量：2
- 2013年
- 目的构建双荧光素酶标记丙型肝炎病毒(HCV)亚基因组复制子细胞模型,为HCV研究提供有效工具。方法通过单克隆筛选及慢病毒感染构建双荧光素酶标记的HCV亚基因组复制子细胞模型(HCV Fluc-UbiGluc)。利用荧光素酶检测、Western印迹检测鉴定细胞模型,利用IFN-α对HCV抗病毒效果评价验证细胞模型的有效性。结果筛选所得HCV亚基因组细胞克隆检测到荧光素酶活性,Western印迹检测到HCV NS5A蛋白表达。NS3/4A对黄色荧光蛋白(YFP)标记的MAVS(YFP-MAVS)切割作用使亚细胞定位发生转移。IFN-α处理后荧光素酶活性、HCV蛋白表达水平明显降低。结论该模型采用萤火虫荧光素酶报告基因指示HCV亚基因组在细胞内的复制水平,Gaussia荧光素酶指示细胞的生长数量,能准确反映候选药物对HCV复制水平的影响,并有效排除药物的细胞毒性干扰,具有操作简单、快速等优点,在抗病毒药物高通量筛选、HCV致病机制等研究方面具有一定的价值。
- 彭剑淳高博王怡付秋霞樊炜周欠欠贾帅争詹林盛
- 关键词：丙型肝炎病毒细胞模型复制子
- 人IgG标记金纳米棒并用于抗人IgG抗体的检测被引量：1
- 2009年
- 目的:研究金纳米棒(GNRs)IgG生物学标记及其在抗人IgG检测中的应用。方法:利用种子生长法制备GNRs,用巯基十一酸(MUA)对GNRs端头邀111妖晶面进行化学修饰,MUA提供的羧基可与人IgG结合;抗人IgG与活化的GNRs反应引起GNRs表面等离子体共振(SPR)特征变化,通过读取SPR值判断免疫反应的结果。结果:合成了不同长径比(AR)的GNRs,成功地将人IgG标记于GNRs(AR=3.7)的端头;利用标记后的GNRs对抗人IgG进行检测,其SPR最大吸收峰发生9nm红移,检测灵敏度可达纳摩尔量级。结论:基于人IgG-抗人IgG免疫反应建立了GNRs用于免疫检测的方法,为GNRs用于免疫检测进而研制免疫传感器奠定了基础。
- 彭剑淳王小慧李媛王怡杨淑华詹林盛
- 关键词：金纳米棒表面等离子体共振人免疫球蛋白
- 利用萤光素酶标记的肿瘤细胞建立肝癌原位移植模型及其活体成像被引量：9
- 2008年
- 目的:利用生物发光成像技术非侵入性地监测活体裸鼠原位肝癌发展过程。方法:将包含有萤火虫萤光素酶基因的pCI-neo-Luc载体转染人肝癌HepG2细胞系,筛选获得具有高萤光素酶活性的细胞克隆;利用流式细胞仪对萤光素酶表达的稳定性进行初步研究,并分析细胞的生物发光情况;持续表达萤光素酶的肿瘤细胞培养扩增后被植入裸鼠皮下,2周后以形成的异体瘤作为供体瘤,进行肝脏原位移植手术;对建立的肝癌原位移植模型,用影像学资料显示肿瘤部位,用IVIS成像系统动态监测肿瘤生长情况。结果:体外影像的结果显示,表达萤光素酶细胞的数量与发光强度呈正相关;活体成像的结果显示,成功地建立了萤光素酶标记的原位肝癌动物模型。结论:生物发光成像可以监测活体内肝癌演进过程,为抗肿瘤药物的筛选和评价提供了新的手段和工具。
- 孙萍王怡孙志东彭剑淳周勇詹林盛
- 关键词：生物发光成像萤光素酶原位肝癌
- 活体动物体内光学成像技术的研究进展及其应用被引量：9
- 2007年
- 活体动物体内光学成像是利用基因改构进行内源性成像试剂或外源性成像试剂标记细胞、蛋白或DNA,从而非侵入性地报告小动物体内的特定生物学事件的技术。活体成像可以直观灵敏地监测基因的表达模式、标记和示踪细胞、探讨蛋白间的相互作用,因而这一技术被广泛地用于分析基因的表达模式、评价基因治疗效果、评估肿瘤的发生和转移、监测移植器官等。简要综述了现有活体动物体内光学成像技术的基本原理、技术进展和相关应用。
- 王怡詹林盛
- 关键词：生物发光荧光素酶荧光蛋白量子点
- 一种嵌合型病毒样颗粒疫苗载体蛋白及其制备方法与应用
- 本发明公开了一种嵌合型病毒样颗粒疫苗载体蛋白及其制备方法与应用，目的是提供一种通用、高效的嵌合型病毒样颗粒疫苗载体蛋白以及以该载体蛋白为基础的疫苗。本发明所提供的载体蛋白，按如下方法得到：1)将包含酶切位点的连接子序列编...
- 王海平王全立甘慧周勇高明吕丽萍付秋霞王怡
- 文献传递
- CPS1报告基因人肝细胞系及其构建方法与应用
- 本发明公开了CPS1报告基因人肝细胞系及其构建方法与应用，用氨基酰基磷酸合成酶1(CPS1)和报告基因构建人肝细胞系，获得的CPS1报告基因人肝细胞具有人原代成体肝实质细胞的功能，包括白蛋白分泌、细胞色素P450酶代谢和...
- 王韫芳王怡常乐
- 文献传递
- 金纳米棒制备、修饰及与寡核苷酸适配子的耦联被引量：1
- 2010年
- 目的金纳米棒的制备、修饰及与寡核苷酸适配子的耦联。方法利用种子调制生长法制备了金纳米棒,采用化学桥联方法对金纳米棒进行m-SH-PEG修饰及与靶向定位乳腺癌细胞的寡核苷酸适配子的耦联。结果成功制备了金纳米棒,以CTAB包裹的金纳米棒表面光滑、尺寸均一、分散性和稳定性良好;Zeta电位检测表明m-SH-PEG已成功修饰金纳米棒,琼脂糖电泳证实寡核苷酸适配子与金纳米棒成功耦联。结论成功地进行了金纳米棒的制备、修饰及与寡核苷酸适配子的耦联。
- 杨淑华王怡周勇詹林盛钱小红
- 关键词：金纳米棒修饰适配子寡核苷酸类
