王文波
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 供职机构：苏州大学医学部基础医学与生物科学学院病原生物学系更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 检测水体日本血吸虫毛蚴PCR方法的建立
- 2010年
- 目的建立一种灵敏、特异的痕量检测日本血吸虫毛蚴的PCR方法。方法取感染6～8w日本血吸虫的小鼠肝脏,碾磨后沉淀,孵化并利用间接连续离心法富集毛蚴,采用蛋白酶K-苯酚法提取毛蚴基因组DNA。登陆GenBank查询获得日本血吸虫保守序列18S小亚基单位核糖体脱氧核酸(18SrDNA)基因,利用引物设计软件PrimerPremier5.0和Oligo6自主设计一对引物,建立检测日本血吸虫毛蚴的PCR方法。梯度稀释血吸虫毛蚴基因组DNA进行PCR方法的灵敏性试验,设置阴性对照,PCR产物通过电泳鉴定。结果 PCR扩增日本血吸虫毛蚴得到特异性DNA片段,片段长度为463bp,阴性对照组无扩增产物。PCR法可检测出日本血吸虫毛蚴DNA的最低浓度为62.5pg/μL。结论建立的检测日本血吸虫毛蚴PCR方法灵敏、特异,具有一定的预警作用。
- 王廷安沈海英申云侠王文波王本敬梁幼生诸葛洪祥
- 关键词：日本血吸虫毛蚴PCR
- 枞酸钠对体外培养日本血吸虫成虫的杀虫效果被引量：4
- 2011年
- 目的观察枞酸钠对体外培养的日本血吸虫雄性和雌性成虫的杀灭效果。方法小鼠感染日本血吸虫尾蚴5周后肝门静脉灌注法收集雌、雄成虫,体外培养于DMEM培养液中,加入不同浓度枞酸钠连续培养3d,观察虫体死亡及活力降低情况,并设空白对照组。虫体盐酸卡红染色,观察其损伤情况。采用Bradford标准曲线法测定药物对虫体蛋白质含量的影响。结果在含不同浓度枞酸钠的DMEM培养液中,雄虫及雌虫死亡率与活力降低率显著高于对照组;雄性成虫对枞酸钠的敏感性高于雌性成虫(P均<0.05)。染色结果显示,雄虫虫体肠管膨大,均出现黑色或褐色条带或斑点;雌虫肠管内容物分布不均,部分虫体卵巢形状不规则,着色不均匀。蛋白质含量测定结果显示雄性与雌性虫体的蛋白质含量均较对照组显著降低(P均<0.05)。结论枞酸钠具有体外杀灭日本血吸虫成虫的作用,其可能会影响日本血吸虫成虫的蛋白质代谢。
- 王文波刘红军王本敬周霞张静刘晨晨龚唯诸葛洪祥
- 关键词：日本血吸虫杀虫效果体外培养
- 荧光实时定量PCR定量水体中日本血吸虫尾蚴方法的建立被引量：3
- 2011年
- 目的建立快速、高效、特异的定量水体中尾蚴的数量和检测水体中日本血吸虫尾蚴残余基因组DNA的方法,来评估水体受日本血吸虫尾蚴污染的程度。方法根据日本血吸虫基因组DNA中的3个多拷贝序列Sjrh1.0(序列号:U92488.1)、18S小亚基单位核糖体核酸基因(18SrRNA)序列(序列号:AY157226.1)和逆转录转座子SjR2的G55A序列(G55A)(序列号:AF412221.1),设计常规PCR引物和实时定量PCR引物,选取较好的靶序列建立SYBR GreenI实时定量PCR方法,绘制尾蚴数的对数与Ct值的标准曲线,并对疫水中日本血吸虫尾蚴残余的基因组DNA进行检测。结果尾蚴数的对数与Ct值的标准曲线有良好的线性关系,相关系数r2为0.918 6,重复性良好。结论本方法特异性高,灵敏,可定量水体中尾蚴数,对疫水检测有一定的预警作用。
- 王本敬王文波周霞陈艳勤张静刘晨晨梁幼生诸葛洪祥
- 关键词：日本血吸虫尾蚴荧光实时定量PCR
